【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种用于hipsc源外泌体纯度检测的方法及其专用消化剂。
技术介绍
1、外泌体是一类具有生物学活性的，由细胞分泌的细胞外囊泡。其粒径范围为30-150 nm，具有磷脂双分子层结构。外泌体携带供体细胞的分子生物学信息，如核酸、蛋白质和脂质等，参与细胞通讯及多种生理病理过程的调节。人诱导多能干细胞（human inducedpluripotent stem cell，hipsc）是一种具有强大分化再生潜力的类胚胎干细胞，可分化为人体各个器官和组织所需要的各种细胞类型。由hipsc分泌的外泌体（以下称hipsc源外泌体）已被证明具有强大的再生和抗炎作用，对心肌细胞具有保护作用，改善细胞凋亡和肥大引起的心肌损伤（admiak marta, 等人. "induced pluripotent stem cell (ipsc)-derived extracellular vesicles are safer and more effective for cardiacrepair than ipscs." circulation research122.3 (2018): 296-309.），对急性肾损伤大鼠模型也表现显著的保护效果（collino federica, 等人. "extracellular vesiclesderived from induced pluripotent stem cells promote renoprotection in
2、外泌体可利用多种方法进行鉴定和检测，如纳米粒子跟踪分析（nanoparticletracking analysis，nta）、western blot等。这些方法均是针对外泌体样本总体进行检测，无法对单颗粒进行表征，也无法对外泌体与其他颗粒杂质进行区分。虽然透射电镜可以对单颗粒进行表征，但这种方法的样品制备繁琐、检测效率低、设备昂贵，并且无法进行定量。随着技术的发展，纳米流式检测法已被广泛应用于外泌体的检测（例如纯度检测），并且该方法已被外泌体协会纳入团体标准。
3、已知外泌体囊泡的脂质膜相比于蛋白聚集物，对表面活性剂的敏感度更高，因此在用纳米流式检测法对外泌体进行检测时，通常需要不同类型的表面活性剂来破坏外泌体囊泡的膜结构（cloutier nathalie, 等人. "the exposure of autoantigens bymicroparticles underlies the formation of potent inflammatory components: themicroparticle-associated immune complexes." embo molecular medicine5.2 (2013):235-249；wu cheng yeu, 等人. "membrane vesicles nucleate mineralo-organicnanoparticles and induce carbonate apatite precipitation in human bodyfluids." the journal of biological chemistry288.42 (2013): 30571-30484；rousseau matthieu, 等人. "detection and quantification of microparticles fromdifferent cellular lineages using flow cytometry. evaluation of the impact ofsecreted phospholipase a2 on microparticle assessment." plos one10.1 (2015):e0116812；arraud n, 等人. "a simple flow cytometry method improves thedetection of phosphatidylserine-exposing extracellular vesicles." journal of thrombosis and haemostasis: jth13.2 (2015): 237-247. ）。目前，常用纳米流式检测经表面活性剂triton x-100处理前后的外泌体，通过颗粒数（通常为30 nm~200 nm粒径范围内的颗粒）的变化，来确定外泌体的纯度（györgy bence, 等人. "detection andisolation of cell-derived microparticles are compromised by protein complexesresulting from shared biophysical parameters." blood117.4 (2011): e39-e48.）。虽然这种方法可适用于多种来源（例如293t细胞、间充质干细胞、牛乳等）的外泌体的纯度检测，但是，这种基于triton x-100的外泌体纯度检测法并不是通用的，其在针对hipsc源外泌体时，无法检测hipsc源外泌体纯度。其他表面活性剂，例如sds（十二烷基硫酸钠）、tween20或脱氧胆酸盐虽然也可用于坏外泌体囊泡的膜结构（osteikoetxea xabier, 等人. "differential detergent sensitivity of extracellular vesicle subpopulations." organic&biomolecular chemistry13.38 (2015): 9775-9782.），但这些表面活性剂在单独使用时也均不能充分破坏hipsc源外泌体囊泡的膜结构，因此不能单独用于对hipsc源外泌体的纯度进行检测。因此，本领域亟需一种可对hipsc源外泌体纯度进行检测的有效方法。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本专利技术的一个方面提供一种用于hipsc源外泌体纯度检测的方法，其使用由triton x-100和sds组合的消化剂对hipsc源外泌体样品进行消化处理，并利用纳米流式对消化处理后的样品进行检测，其中所述tritonx-100的使用终浓度为0.1%~1%，所述sds的使用终浓度为0.1%~0.5%。
2、在一些本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于hiPSC源外泌体纯度检测的方法，其特征在于，所述方法使用由Triton X-100和SDS组合的消化剂对hiPSC源外泌体样品进行消化处理，并利用纳米流式对消化处理后的样品进行检测，其中所述Triton X-100的使用终浓度为0.1%~1%，所述SDS的使用终浓度为0.1%~0.5%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下操作：
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对经所述消化剂处理后的hiPSC源外泌体样品进行超声处理。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述超声处理的条件为在500W以上条件下超声处理5 min以上。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述超声处理的条件为500-600W条件下超声处理5-10 min。
6.一种用于hiPSC源外泌体纯度检测的专用消化剂，其由使用终浓度为0.1%~1%的Triton X-100和使用终浓度为0.1%~0.5%的SDS组合而成。
7.权利要求6所述的专用消化剂在检测hiPSC源外泌
8.权利要求6所述的专用消化剂在破坏hiPSC源外泌体囊泡的膜结构中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于hipsc源外泌体纯度检测的方法，其特征在于，所述方法使用由triton x-100和sds组合的消化剂对hipsc源外泌体样品进行消化处理，并利用纳米流式对消化处理后的样品进行检测，其中所述triton x-100的使用终浓度为0.1%~1%，所述sds的使用终浓度为0.1%~0.5%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下操作：
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对经所述消化剂处理后的hipsc源外泌体样品进行超声处理。
4.根据权利要求3所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：张建民，徐铭枝，韩晓红，赵芊，
申请(专利权)人：国典北京医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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