外泌体在制备脑卒中治疗用产品中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种治疗脑卒中的方法，所述方法是联合使用外泌体和针刺治疗。本发明专利技术还提供了用于所述方法的治疗用组合产品或组合套装，包括含有外泌体的药物组合物和针刺装置。本发明专利技术的治疗方法对脑卒中患者神经功能损伤的改善具有协同效果，可以降低脑卒中患者的神经元凋亡，抑制小胶质细胞的激活，抑制星形胶质细胞的激活，调节脑卒中导致的T细胞免疫应答的紊乱，降低脑梗死体积，改善脑卒中患者脑卒中后认知障碍、肢体运动功能等。肢体运动功能等。肢体运动功能等。

【技术实现步骤摘要】
外泌体在制备脑卒中治疗用产品中的用途


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及外泌体以及针刺在治疗脑卒中的应用，以及包含外泌体和针刺的治疗用产品在制备治疗脑卒中的产品中的用途。

技术介绍

[0002]脑卒中(stroke)又称“中风”，是一种急性脑血管疾病，是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞，导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一组疾病，包括缺血性卒中和出血性卒中。缺血性脑卒中一般是由于脑的供血动脉狭窄或闭塞，脑供血不足导致的脑组织坏死的总称，又叫脑梗死。
[0003]近年来，卒中已成为导致我国居民死亡的主要原因之一。据全球疾病负担工作组估算卒中终生风险：全球为24.9％，中国为39.3％，中国已成为卒中终生风险最高和疾病负担最重的国家。
[0004]在卒中的预防和治疗中，预防和改善脑血管狭窄或闭塞，预防脑血管破裂是一方面，卒中发生后脑组织损伤的修复是另一方面。
[0005]外泌体是细胞释放的细胞外囊泡的一种，是一种双磷脂膜囊泡，直径在30～150nm，含有蛋白、脂质及核酸等多种成分。几乎所有的细胞都分泌外泌体，在细胞间连接中发挥重要作用，在多种体液中可检测到。外泌体的功能表现为细胞间连接、免疫调节、细胞再生及分化的信号传导、血管形成、凋亡、抗原呈递等。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种治疗脑卒中的方法，包括给有需要的患者联合使用治疗有效量的外泌体和针刺治疗。
[0007]本专利技术还提供一种治疗脑卒中的组合产品或套装产品，包括含有外泌体的药物组合物以及针刺装置。
[0008]本专利技术还提供外泌体在制备与针刺治疗联合使用的治疗脑卒中的药物中的用途。
[0009]本专利技术还提供外泌体在制备包括针刺装置的治疗脑卒中的组合产品或套装产品中的用途，优选，所述组合产品或套装产品包括含有外泌体的药物组合物。
[0010]根据本专利技术，所述外泌体可以是人或哺乳动物的细胞的外泌体。
[0011]所述哺乳动物，包括但不限于牛、羊、马、猪等有蹄类，兔、大鼠、小鼠、豚鼠等啮齿类，猴、猩猩等灵长类，猫、狗等。在本专利技术的一个实施方式中，所述外泌体是人的细胞的外泌体。
[0012]所述细胞可以是正常体细胞或/和干细胞，细胞包括但不限于血管内皮细胞、树突状细胞、T细胞(例如Foxp3
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Treg细胞)、神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞、胚胎干细胞、成体干细胞(例如造血干细胞，神经干细胞，来源于骨髓、脐带、脂肪、脐带血、羊膜、(胎盘)绒毛膜、牙髓、胸腺、滑膜等的间充质干细胞等)等。
[0013]还可以利用诱导性多能干细胞(Induced pluripotent stem cells，iPSCs)技术
通过导入特定的基因(如Oct4、Sox2、Klf4、c
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Myc等)将终末分化的体细胞重编程为多能性干细胞，以iPSCs得到来源于iPSCs的外泌体，在本专利技术中将iPSCs的外泌体简写为“iPSC
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Exos”。利用iPSCS技术可以用病人自己的体细胞制备专有的诱导性多能干细胞，再由患者的专有诱导性多能干细胞获得外泌体，用于患者自身可以大大降低免疫排斥反应发生的可能性。
[0014]所述细胞还可以通过生物工程技术改造，以高表达某个或某些蛋白质、RNA，或/和，低表达另一个或另一些蛋白质、RNA，以实现来源于被改造细胞的外泌体中所述的蛋白质含量增高或/和降低，以达到更优的治疗目的或活性。可以采用本领域已知的生物工程技术，例如，将携带目标蛋白质DNA的载体或mRNA转染细胞，在细胞中实现目标蛋白质表达量的提高。将携带目标基因的siRNA或shRNA的载体转染细胞，在细胞中实现沉默目标基因表达，以降低相应蛋白质的表达量。
[0015]外泌体可以通过体外培养相应的细胞，经细胞自分泌的方式，从细胞培养液中分离制备得到。每类细胞的培养可以采用本领域已知的方法和培养基进行。例如：人皮肤成纤维细胞培养基可以是DMEM+15％FBS+NEAA，脐带间充质干细胞培养基可以是DMEM+10％FBS，神经元细胞培养基可以是B27+Neurobasal+GlutaMAX。
[0016]为了提高细胞培养物中外泌体的产量，可以根据被培养细胞的特点，调整其培养基中化学物质的含量，例如：保留培养基中细胞生长必需的化学物质，去除或降低培养中细胞生长非必需化学物质或其含量，使细胞生长处于“饥饿”状态，以达到提高培养物中外泌体产量的效果。例如，对于培养干细胞以获得干细胞外泌体为例，可以在干细胞的基础培养基，例如DMEM，F12或者DMEM/F12的基础上，添加L
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抗坏血酸或其盐、硒或其盐、胰岛素等，诱导干细胞大量分泌外泌体。例如中国专利申请CN112920991A中记载的外泌体分泌诱导剂，该专利申请的全文引入本申请。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述外泌体是人间充质干细胞或ESC(胚胎干细胞)或iPSC的外泌体。所述外泌体的制备方法可以为：在相应细胞的基础培养基中加入L
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抗坏血酸或其盐、硒或其盐、以及胰岛素，调节培养基pH为7.0
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7.5，得到能获得高产量外泌体的细胞培养基，采用所述细胞培养基培养人间充质干细胞或ESC(胚胎干细胞)或iPSC，获取细胞培养上清，从中分离得到相应细胞的外泌体。所述获取细胞培养上清的操作，可以在培养结束前，间隔适当时间重复进行，例如培养期间每天获取细胞培养上清。可采用本领域常用的pH调节剂对培养基pH进行调节，包括但不限于碳酸盐或碳酸氢盐，例如Na2CO3、K2CO3、NaHCO3、KHCO3等。在本专利技术的一个实施方式中，在基础培养基中加入浓度为30
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100mg/L的L
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抗坏血酸或其盐、浓度为5
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50μg/L的硒或其盐、浓度为10
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30mg/L的胰岛素，并调节培养基pH为7.0
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7.5。在本专利技术的一个实施方式中，所述基础培养基是DMEM。在本专利技术的另一个实施方式中，所述基础培养基是DMEM/F12。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述外泌体是iPSC(例如可以是从人外周血细胞诱导而来的iPSC)的外泌体，以DMEM/F12为基础培养基，在基础培养基中加入浓度为50
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75mg/L的L
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抗坏血酸或其盐(例如L
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抗坏血酸二磷酸镁盐)、浓度为10
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20μg/L的硒或其盐(例如钠硒)、浓度为15
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25mg/L的胰岛素，调节pH为7.0
‑
7.5，得到能获得高产量外泌体的细胞培养基，用所述细胞培养基培养iPSC，从培养开始后的15～30小时开始，至培养结束，每间隔20～25小时，获取细胞培养上清，从中分离得到外泌体。
[0018]可以采用本领域的各种外泌体分离方法，从细胞培养液中分离获得外泌体。
[001本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种治疗脑卒中的组合产品或套装产品，其特征在于，包括含有外泌体的药物组合物以及针刺装置。2.外泌体在制备与针刺治疗联合使用的治疗脑卒中的药物中的用途。3.外泌体在制备包括针刺装置的治疗脑卒中的组合产品或套装产品中的用途，优选，所述组合产品或套装产品包括含有外泌体的药物组合物。4.如权利要求1所述的组合产品或套装产品或权利要求2或3所述的用途，其中，所述外泌体是人或哺乳动物的细胞的外泌体；优选，所述细胞选自血管内皮细胞、树突状细胞、T细胞、神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞、胚胎干细胞、成体干细胞；优选，所述T细胞是Foxp3
+
Treg细胞；优选，所述成体干细胞选自造血干细胞，神经干细胞，间充质干细胞；优选，所述间充质干细胞来源于骨髓、脐带、脂肪、脐带血、羊膜、绒毛膜、牙髓、胸腺或滑膜。5.如权利要求1所述的组合产品或套装产品或权利要求2或3所述的用途，其中，所述外泌体是诱导性多能干细胞的外泌体或人间充质干细胞或胚胎干细胞的外泌体。6.如权利要求1
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5任一项所述的组合产品或套装产品或用途，其中，所述药物或药物组合物中，外泌体的含量为100～50000μg。7.如权利要求1
‑
5任一项所述的组合产品或套装产品或用途，其中，所述药物或药物组合物为混悬液，外泌体的浓度为0.01
‑
20μg/mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建民，孙华，邓培颖，王靓，
申请(专利权)人：国典北京医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：