【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药技术和分子生物学领域，涉及用于人类肝细胞癌诊断的相关标志物，针对肝细胞癌诊断相关标志物设计的检测试剂和肝细胞癌诊断方法，以及用于肝细胞癌的治疗药物。
技术介绍
1、肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，hcc）的发病率位于恶性肿瘤的第四位，死亡率位于第三位，是严重威胁人民生命健康的一种疾病。根据世界卫生组织的数据，2020年我国肝细胞癌新发和死亡病例大概是48万和37万例，分别占全球肝细胞癌新发和死亡病例的44%和48.6%。肝细胞癌的主要危险因素主要包括：乙肝病毒或者丙肝病毒的感染，糖尿病或者肥胖相关的非酒精性脂肪肝，长期大量饮酒相关的脂肪肝。其他比较少见的危险因素包括：原发性胆管炎，血色素沉着症和a-抗胰蛋白酶缺乏症等原因导致的硬化。目前治疗肝细胞癌的主要方法为手术切除，肝移植，图像引导下的射频消融以及经动脉化疗栓塞（tace）。系统治疗的方法包括：免疫检查点制（icis）络氨酸激酶抑制剂（tkis）和单克隆抗体。然治疗方法的改进提高了患者的总体生存率和生活质量，然而影响肝细胞癌预后的决定性因素仍为肿瘤的分级。有症状的晚期肝细胞癌在接受治疗后，其生存期的中位数仍然仅为1—1.5年。因此需要更加深入理解肝细胞癌的发病、发展机制，从而进一步改善患者预后。
2、mirna（microrna）是一种单链非编码rna，其长度大约为22个核酸在细胞质中mirna由ago蛋白（argonaute proteins）整合到risc（rna-induced silencing compl
技术实现思路
1、针对现有技术，本专利技术的目的是提供一组与肝细胞癌的发生、发展密切相关的多个肝细胞癌mirnas标志物；提供针对本专利技术肝细胞癌相关标志物而设计的肝细胞癌检测试剂；提供使用本专利技术肝细胞癌检测试剂对检测样本进行检测诊断是否患有肝细胞癌的方法；提供针对肝细胞癌相关标志物而设计的肝细胞癌治疗药物。本专利技术为肝细胞癌诊断提供了新的一组标志物及检测试剂，为肝细胞癌诊断提供了一种快速精准的检测方法，设计的药物对肝细胞癌具有明显的抑制作用，对肝细胞癌的治疗具有重要的医学价值。
2、为实现专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术提供的肝细胞癌相关标志物，其特征在于，由伴随肝细胞癌的发生、发展，呈现过量表达的两个标志物hsa-mir-12123、hsa-mir-199a，以及呈现抑制表达的两个标志物hsa-mir-106b、hsa-mir-7850构成；
3、所述标志物hsa-mir-12123的序列为ttattcattcacaaaagcttta（seq id no.1），
4、所述标志物hsa-mir-199a的序列为acagtagtctgcacattggtta（seq id no.2），
5、所述标志物hsa-mir-106b的序列为ccgcactgtgggtacttgctgc（seq id no.3），
6、所述标志物hsa-mir-7850的序列为gtttggacatagtgtggctgg（seq id no.4）。
7、本专利技术通过生物信息学和现有的分子生物学的技术手段，筛选用于肝细胞癌诊断和治疗的血清mirnas标志物，从中选择hsa-mir-12123、hsa-mir-199a、hsa-mir-106b和hsa-mir-7850作为用于肝细胞癌诊断的相关标志物（在肝细胞癌患者血清中，hsa-mir-12123、hsa-mir-199a上调，但hsa-mir-106b、hsa-mir-7850下调）。在此基础上，本专利技术还提供了用于检测hsa-mir-12123、hsa-mir-199a、hsa-mir-106b和hsa-mir-7850表达水平的肝细胞癌检测试剂。
8、本专利技术提供的一种肝细胞癌检测试剂，其特征在于，肝细胞癌检测试剂中含有针对肝细胞癌相关标志物hsa-mir-12123、hsa-mir-199a、hsa-mir-106b、hsa-mir-7850设计的引物，将所述肝细胞癌检测试剂用于pcr反应体系，可以检测出受测样本中肝细胞癌相关标志物hsa-mir-12123、hsa-mir-199a、hsa-mir-106b、hsa-mir-7850的表达量；所述肝细胞癌检测试剂中含有的肝细胞癌相关标志物的引物构成如下：hsa-mir-12123的上游引物hsa-mir-12123-f的序列为ttattcattcacaaaagc；
9、hsa-mir-199a的上游引物hsa-mir-199a-f的序列为acagtagtctgcacattg；
10、hsa-mir-106b的上游引物hsa-mir-106b-f的序列为ccgcactgtgggtactt；
11、hsa-mir-7850的上游引物hsa-mir-7850-f的序列为gtttggacatagtgtgg；
12、所述标志物hsa-mir-12123、hsa-mir-199a、hsa-mir-106b、hsa-mir-7850的通用下游引物universal rp的序列为cagtgcagggtccgaggt。
13、本专利技术提供的一种肝细胞癌检测试剂，还含有内参引物、taq酶、dntps、pcr缓冲液、mgcl、tagman探针、荧光定量pcr参比染料，或者含有上述组分中的一种或几种。
14、为了方便临床检测使用，可以将本专利技术提供的肝细胞癌检测试剂及在本专利技术肝细胞癌检测方法中使用的其他试剂（如阳性对照品、阴性对照品等）和工具制备成试剂盒。
15、本专利技术还提供了一种肝细胞癌检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
16、s1. 抽取被检测人员的外周血放入分离胶采血管中，经离心处理后得到外周血血清，经过抽提纯化后，得到含有总rna的待测血清样本；
17、s2. 制备cdna样本：取含有总rna的待测血清样本，配制加尾和逆转录反应体系，反应体系中的加尾试剂对小rna进行加尾，反应体系中的逆转录试剂对加尾后的小rna进行逆转录后，得到cdna样本；
18、s3. qpcr检测：配制包含cdna样本、肝细胞癌检测试剂的qpcr本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.肝细胞癌相关标志物，其特征在于，由伴随肝细胞癌的发生、发展，呈现过量表达的两个标志物hsa-miR-12123、hsa-miR-199a，以及呈现抑制表达的两个标志物hsa-miR-106b、hsa-miR-7850构成；
2.一种肝细胞癌检测试剂，其特征在于，肝细胞癌检测试剂中含有针对肝细胞癌相关标志物hsa-miR-12123、hsa-miR-199a、hsa-miR-106b、hsa-miR-7850设计的引物，将所述肝细胞癌检测试剂用于PCR反应体系，可以检测出受测样本中肝细胞癌相关标志物hsa-miR-12123、hsa-miR-199a、hsa-miR-106b、hsa-miR-7850的表达量；所述肝细胞癌检测试剂中含有的肝细胞癌相关标志物的引物构成如下：hsa-miR-12123的上游引物hsa-miR-12123-F的序列为ttattcattcacaaaagc；
3.根据权利要求2所述的一种肝细胞癌检测试剂，其特征在于，还含有内参引物、Taq酶、dNTPs、PCR缓冲液、MgCl、TagMan探针、荧光定量PCR参比染料，或者含有上述
4.一种肝细胞癌检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.一种肝细胞癌治疗药物，其特征在于，包括hsa-miR-12123、hsa-miR-199a基因的抑制剂，以及hsa-miR-106b、hsa-miR-7850基因的模拟物，用于抑制目标基因hsa-miR-12123、hsa-miR-199a的表达量，提高目标基因hsa-miR-106b、hsa-miR-7850的表达量，从而抑制肝细胞癌的发生和发展；
...【技术特征摘要】
1.肝细胞癌相关标志物，其特征在于，由伴随肝细胞癌的发生、发展，呈现过量表达的两个标志物hsa-mir-12123、hsa-mir-199a，以及呈现抑制表达的两个标志物hsa-mir-106b、hsa-mir-7850构成；
2.一种肝细胞癌检测试剂，其特征在于，肝细胞癌检测试剂中含有针对肝细胞癌相关标志物hsa-mir-12123、hsa-mir-199a、hsa-mir-106b、hsa-mir-7850设计的引物，将所述肝细胞癌检测试剂用于pcr反应体系，可以检测出受测样本中肝细胞癌相关标志物hsa-mir-12123、hsa-mir-199a、hsa-mir-106b、hsa-mir-7850的表达量；所述肝细胞癌检测试剂中含有的肝细胞癌相关标志物的引物构成如下：hsa-mir-12123的上游...
【专利技术属性】
技术研发人员：栾延松，陈梦梦，张炳强，张媛，张高峰，周阳，于俊梅，张振惠，张宁，孙静，卢晓玥，
申请(专利权)人：青岛瑞思德医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：
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