【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，尤其涉及一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法。
技术介绍
1、根据红细胞膜表面有无a抗原和b抗原，将红细胞abo血型分为a型、b型、ab型及o型4种。血液凝集试验是指抗体和红细胞在液体介质中发生肉眼可见的凝集或溶血反应。通过红细胞凝集试验，进行正、反定型，从而准确鉴定abo血型。正定型，是用抗-a和抗-b血型定型试剂来测定红细胞表面有无相应的a抗原或b抗原。反定型，是用a1型和b型红细胞试剂来测定血清中有无相应的抗-a或抗-b抗体。根据受检者红细胞表达的a、b抗原及血清(或血浆)中的抗-a、抗-b抗体情况判断abo血型。常见检测方法包括:玻片法、试管法、微板法、微柱凝集法等。常用方法：1.玻片法利用商品化igm抗-a、抗-b血型定型试剂鉴定红细胞表面abo抗原即正定型。玻片法不适用于abo反定型鉴定，只能用于abo血型正定型初筛，不能出具正式检验报告。2.试管法利用商品化igm抗-a、抗-b血型定型试剂鉴定红细胞表面abo抗原即正定型，利用已知abo血型的试剂红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗-a和抗-b抗体即反定型。正、反定型结果一致方可确定受检标本abo血型，若正、反定型结果不一致，需增加辅助试验以确定abo血型。3.微柱凝集法微柱凝集免疫分析技术是利用微柱内介质的分子筛效应来区分凝集反应中游离红细胞和凝集红细胞的技术，abo血型鉴定微柱中分别充填igm类抗-a、抗-b单克隆抗体试剂，用于检测红细胞上a、b抗原。微柱内的介质起到分子筛作用，分子筛在一定离心力的作用下只允许游离红细胞通过，沉淀于底部
2、在前述的三种测定方法中，血型的判定是以红细胞凝固为判断依据的，进行血型定型实验时，常常出现弱凝集，致使血型无法正确判断的现象。
3、环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification method，lamp)具有高特异性、高灵敏性、简单、快捷及成本低的特点。lamp(环介导等温扩增)是由notomi于2000年开发的一种新型核酸扩增技术，该技术利用4种不同的特异性引物识别靶基因的6个特定区域，借助具有链置换作用的bst dna聚合酶，在恒等温条件下进行靶序列高效扩增，可合成109-1010个数量级的靶标dna。该技术避免了常规pcr对循环温度的特殊要求，并因其高效性、简易行、成本低廉且检测周期短等特点提升了它的应用价值。到目前为止，还没有将lamp技术有效用于血型鉴定中。
4、为此我们提出一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，包括以下步骤：
3、s1：采集待测个体的血液样本；
4、s2：提取血液样本中的dna；
5、s3：设计针对血型基因的lamp引物；
6、s4：利用lamp引物对提取的dna进行扩增；
7、s5：通过检测扩增产物的荧光信号判断待测个体的血型。
8、优选的，所述s2中，采用酚-氯仿法、柱式法提取血液样本中的dna。
9、优选的，所述s4中，lamp扩增反应在等温条件下进行，使用具有链置换活性的dna聚合酶。
10、优选的，所述s5中，通过实时荧光检测仪器检测扩增产物的荧光信号，从而判断待测个体的血型，能够根据荧光信号的强度和出现时间来判断血型类型。
11、优选的，所述s3中，所述lamp引物针对7种亚型snp序列进行实验方案设计，针对同一靶基因，设计5套，进行筛选评价。
12、优选的，利用oligo7软件优化引物参数，避免发夹结构，避免引物间相互配对。
13、优选的，利用核酸热动力学再优化引物设计，然后再实际评价。
14、优选的，所述s5中，如果荧光信号出现在a型血特异性基因对应的扩增产物中，则待测个体为a型血；如果荧光信号出现在b型血特异性基因对应的扩增产物中，则待测个体为b型血；如果荧光信号同时出现在a型血和b型血特异性基因对应的扩增产物中，则待测个体为ab型血；如果没有荧光信号出现，则待测个体为o型血。
15、本专利技术的有益效果：
16、1、本专利技术构建了基于环介导等温扩增(lamp)的血型检测方法；
17、2、本专利技术检测效果达到临床检测极限需求。
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1.一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，所述S2中，采用酚-氯仿法、柱式法提取血液样本中的DNA。
3.根据权利要求1所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，所述S4中，LAMP扩增反应在等温条件下进行，使用具有链置换活性的DNA聚合酶。
4.根据权利要求1所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，所述S5中，通过实时荧光检测仪器检测扩增产物的荧光信号，从而判断待测个体的血型，能够根据荧光信号的强度和出现时间来判断血型类型。
5.根据权利要求1所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，所述S3中，所述LAMP引物针对7种亚型SNP序列进行实验方案设计，针对同一靶基因，设计5套，进行筛选评价。
6.根据权利要求5所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，利用Oligo7软件优化引物参数，避免发夹结构，避免引物间相互配对。
7.根据权利要求6所述的一种基
8.根据权利要求1所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，所述S5中，如果荧光信号出现在A型血特异性基因对应的扩增产物中，则待测个体为A型血；如果荧光信号出现在B型血特异性基因对应的扩增产物中，则待测个体为B型血；如果荧光信号同时出现在A型血和B型血特异性基因对应的扩增产物中，则待测个体为AB型血；如果没有荧光信号出现，则待测个体为O型血。
...【技术特征摘要】
1.一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，所述s2中，采用酚-氯仿法、柱式法提取血液样本中的dna。
3.根据权利要求1所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，所述s4中，lamp扩增反应在等温条件下进行，使用具有链置换活性的dna聚合酶。
4.根据权利要求1所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，所述s5中，通过实时荧光检测仪器检测扩增产物的荧光信号，从而判断待测个体的血型，能够根据荧光信号的强度和出现时间来判断血型类型。
5.根据权利要求1所述的一种基于环介导等温扩增的血型鉴定方法，其特征在于，所述s3中，所述lamp引物针对7种亚型sn...
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