【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药技术和分子生物学领域，涉及用于人类胃癌诊断的几个胃癌相关标志物，针对几胃癌相关标志物设计的检测试剂和胃癌诊断方法，以及能有效抑制胃癌发生发展的胃癌治疗药物。
技术介绍
1、胃癌的发病率位于恶性肿瘤的第四位，死亡率位于第三位，是严重威胁人民生命健康的一种疾病。根据世界卫生组织的数据。早期胃癌多无症状或仅有轻微症状。当临床症状明显时，病变已属晚期。胃癌诊断主要依靠x线钡餐造影、胃镜和活组织病理检查。同时辅助的检测手段还包括癌的免疫学反应、体内特殊化学成分的测定及酶反应等。血中如血清胃蛋白酶原i及胃蛋白酶原i/ii之比；cea，ca19-9，ca125等癌胚抗原及单克隆抗体的检测都可以对胃癌的诊断提供参考，但这些检查假阳性与假阴性均较高，特异性不强。因此，迫切需要开发新的准确度高、重复性好、简便易行的胃癌早期筛查手段。
2、微小核糖核酸（microrna，mirna）是一类长约19至23个核酸的非编码单链小核糖核酸分子。它们在进化上高度保守，并与动物的许多正常生理活动,如生物个体发育、组织分化、细胞调亡以及能量代谢等密切相关，同时也与许多疾病的发生及发展存在着紧密的联系。越来越多的文献报道mirna在癌症的发生、发展、转移中起重要的功能，而且抑制或者过表达一些mirna能够抗癌。因此，针对胃癌，有必要去研究是否有mirna也能起到抗癌或延缓癌症发生发展的作用。
技术实现思路
1、针对现有技术，本专利技术的目的是提供一种与胃癌发生发展相关的胃癌诊断用标志物
2、为实现专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种胃癌诊断用标志物组合，其特征在于，所述胃癌诊断用标志物组合由与胃癌发生发展相关的标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803构成；标志物hsa-mir-10397的序列为tccttgacctgatgctgtaggg（seq id no.1），标志物hsa-mir-122的序列为tggagtgtgacaatggtgtttg（seq id no.2），标志物hsa-mir-21的序列为tagcttatcagactgatgttga（seq id no.3），标志物hsa-mir-4803的序列为taacataatagtgtggattga（seq id no.4）。
4、本专利技术通过生物信息学和现有的分子生物学的技术手段，筛选用于胃癌诊断和治疗的血清mirna标志物，从中选择hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803作为本专利技术胃癌诊断用标志物组合，在胃癌患者血清中，四个胃癌标志物的表现是：标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122上调，标志物hsa-mir-21和hsa-mir-4803下调。
5、在此基础上，本专利技术提供了联合检测胃癌标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803表达水平的胃癌诊断用试剂。
6、本专利技术提供了一种胃癌诊断用试剂，其特征在于，所述的胃癌诊断用试剂加入pcr反应体系，用于检测样本中胃癌标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803的表达量，所述的胃癌诊断用试剂中含有针对胃癌标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803设计的引物，每个胃癌标志物的引物由上游引物和下游引物构成，其中，hsa-mir-10397（seq id no.1）的上游引物hsa-mir-10397-f的序列为tccttgacctgatgctgta（seq id no.5）；hsa-mir-122（seq id no.2）的上游引物hsa-mir-122-f的序列为tggagtgtgacaatggtgt（seq id no.6）；hsa-mir-21（seq id no.3）的上游引物hsa-mir-21-f的序列为tagcttatcagactgatgt（seq id no.7）；hsa-mir-4803（seq idno.4）的上游引物hsa-mir-4803-f的序列为taacataatagtgtggat（seq id no.8）；四个胃癌标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803的通用下游引物universal rp序列为cagtgcagggtccgaggt（seq id no.9）。
7、所述的胃癌诊断用试剂中，还含有内参引物、taq酶、dntps、pcr缓冲液、mgcl、tagman探针、荧光定量pcr参比染料中的一种或几种。
8、为了方便临床检测使用，可以将本专利技术提供的胃癌诊断用试剂、及在本专利技术胃癌诊断方法中使用的其它试剂（阳性对照品、阴性对照品等）和工具制备成试剂盒。
9、本专利技术还提供了一种胃癌诊断用方法，其特征在于，包括如下步骤：
10、s1. 抽取被检测人员的外周血放入分离胶采血管中，经离心处理后得到外周血血清，经过抽提纯化后，得到含有总rna的待测血清样本；
11、s2. 制备cdna样本：取含有总rna的待测血清样本，配制加尾和逆转录反应体系，反应体系中的加尾试剂对小rna进行加尾，反应体系中的逆转录试剂对加尾后的小rna进行逆转录后，得到cdna样本；
12、s3. qpcr检测：配制qpcr反应体系，qpcr反应体系包括cdna样本、本专利技术胃癌诊断用试剂，以cdna样本为模板，使用real-time pcr方法检测cdna样本四个胃癌标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803在血清中的相对表达量（δct值）；
13、s4. 对检测结果进行判断：
14、将步骤s3测出的四个胃癌标志物的δct值输入如下综合判别公式：
15、综合判断值=-1.327+0.358*δct hsa-mir-10397+0.439*δct hsa-mir-122 -0.541* δct hsa-mir-21-0.138*δct hsa-mir-4803；综合判断值≥0，为阳性，患胃癌的风险较高；综合判断值＜0，为阴性，患胃癌的风险较低。
16、本专利技术胃癌诊断用方法作为胃癌诊断的手段之一，具有检测快速方便、检测灵敏度高、特异度好、成本低，可以满足绝大多数肿瘤病人的检测需求，应用范围广等特点。
17、本专利技术还提供了一种胃癌治疗药物，其特征在于，所述的胃癌治疗药物包括hsa-mir-103本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一种胃癌诊断用标志物组合，其特征在于，所述胃癌诊断用标志物组合由与胃癌发生发展相关的标志物hsa-miR-10397、hsa-miR-122、hsa-miR-21和hsa-miR-4803构成；标志物hsa-miR-10397的序列为tccttgacctgatgctgtaggg（SEQ ID NO.1），标志物hsa-miR-122的序列为tggagtgtgacaatggtgtttg（SEQ ID NO.2），标志物hsa-miR-21的序列为tagcttatcagactgatgttga（SEQ ID NO.3），标志物hsa-miR-4803的序列为taacataatagtgtggattga（SEQ ID NO.4）。
2. 一种胃癌诊断用试剂，其特征在于，所述的胃癌诊断用试剂加入PCR反应体系，用于检测样本中胃癌标志物hsa-miR-10397、hsa-miR-122、hsa-miR-21和hsa-miR-4803的表达量，所述的胃癌诊断用试剂中含有针对胃癌标志物hsa-miR-10397、hsa-miR-122、hsa-miR-21和hsa-miR-480
3.根据权利要求2所述的一种胃癌诊断用试剂，其特征在于，所述的胃癌诊断用试剂中，还含有内参引物、Taq酶、dNTPs、PCR缓冲液、MgCl、TagMan探针、荧光定量PCR参比染料中的一种或几种。
4.一种胃癌诊断用方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.一种胃癌治疗药物，其特征在于，所述的胃癌治疗药物包括hsa-miR-10397、hsa-miR-122基因的抑制剂，包括hsa-miR-21、hsa-miR-4803基因的模拟物；所述的胃癌治疗药物用于抑制hsa-miR-10397、hsa-miR-122基因的表达，同时提高hsa-miR-21、hsa-miR-4803基因的表达；
...【技术特征摘要】
1. 一种胃癌诊断用标志物组合，其特征在于，所述胃癌诊断用标志物组合由与胃癌发生发展相关的标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803构成；标志物hsa-mir-10397的序列为tccttgacctgatgctgtaggg（seq id no.1），标志物hsa-mir-122的序列为tggagtgtgacaatggtgtttg（seq id no.2），标志物hsa-mir-21的序列为tagcttatcagactgatgttga（seq id no.3），标志物hsa-mir-4803的序列为taacataatagtgtggattga（seq id no.4）。
2. 一种胃癌诊断用试剂，其特征在于，所述的胃癌诊断用试剂加入pcr反应体系，用于检测样本中胃癌标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803的表达量，所述的胃癌诊断用试剂中含有针对胃癌标志物hsa-mir-10397、hsa-mir-122、hsa-mir-21和hsa-mir-4803设计的引物，每个胃癌标志物的引物由上游引物和下游引物构成，其中，hsa-mir-10397（seq id no.1）的上游引物hsa-mir-10397-f的序列为tccttgacctgatgctgta（seq id no.5）；hsa-mir-122（seq id no.2...
【专利技术属性】
技术研发人员：张炳强，陈梦梦，栾延松，于俊梅，周阳，张高峰，孙国龙，刘贺，
申请(专利权)人：青岛瑞思德医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：
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