一种用于高GC片段的qPCR扩增方法技术

本发明专利技术提供了一种用于高GC片段的qPCR扩增方法，用于高GC片段的qPCR反应体系包括Taq酶、PCR缓冲液、dNTP、MgC1、上游引物、下游引物、TaqMan探针和荧光定量PCR参比染料和DNA模板，qPCR反应体系还包括qPCR增强剂，qPCR增强剂由偶氮苯水溶液和烯效唑水溶液构成，添加至qPCR反应体系中的偶氮苯的终浓度为0.04~0.36mol/L、烯效唑的终浓度0.02~0.18 mol/L，偶氮苯和烯效唑构成的增强剂组合使高GC片段扩增反应顺利进行。本发明专利技术增强剂组合可扩增高GC含量的目的基因，提高扩增体系的灵敏度，改善高GC含量片段的分型效果、提升分型准确度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及一种用于高gc片段的qpcr扩增方法，利用实时荧光定量pcr增强剂增强荧光pcr信号。

技术介绍

1、实时荧光定量pcr（qpcr）即在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程，在扩增目的片段的过程中通过荧光信号的富集来得到ct值，从而确定基因转录表达含量。实时荧光定量pcr技术，通过引入特异性探针并实时监测荧光信号以监测pcr 产物的扩增，其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针，该探针的5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团，正常情况下两个基团的空间距离很近，荧光基团因淬灭而不能发出荧光；pcr扩增时，引物与该探针同时结合到模板上，探针的结合位置位于上下游引物之间，当扩增延伸到探针结合的位置时，taq酶利用5’-3’外切酶活性，将探针5’端连接的荧光分子从探针上切割下来，从而使其发出荧光，检测到的荧光分子数与pcr产物的数量成正比，因此，根据pcr反应体系中的荧光强度即可计算出初始dna模板的数量。相比于测序法、基因芯片法、高分辨率熔解曲线法，实时荧光定量pcr全过程可以在单管本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于高GC片段的qPCR扩增方法，其特征在于，用于高GC片段的qPCR反应体系包括Taq酶、PCR缓冲液、dNTP、MgC1、上游引物、下游引物、TaqMan探针和荧光定量PCR参比染料（ROX Reference Dye）和DNA模板，qPCR反应体系还包括qPCR增强剂，所述qPCR增强剂由偶氮苯水溶液和烯效唑水溶液构成，添加至qPCR反应体系中的偶氮苯的终浓度为0.04~0.36mol/L，添加至qPCR反应体系中的烯效唑的终浓度0.02~0.18 mol/L，偶氮苯和烯效唑构成的增强剂组合可扩增高GC含量的目的基因。

2.根据权利要求1所述的一种用于高GC片段...

【技术特征摘要】

1.一种用于高gc片段的qpcr扩增方法，其特征在于，用于高gc片段的qpcr反应体系包括taq酶、pcr缓冲液、dntp、mgc1、上游引物、下游引物、taqman探针和荧光定量pcr参比染料（rox reference dye）和dna模板，qpcr反应体系还包括qpcr增强剂，所述qpcr增强剂由偶氮苯水溶液和烯效唑水溶液构成，添加至qpcr反应体系中的偶氮苯的终浓度为0.04~0.36mol/l，添加至qpcr反应体系中的烯效唑的终浓度0.02~0.18 mol/l，偶氮苯和烯效唑构成的增强剂组合可扩增高gc含量的目的基因。

2.根据权利要求1所述的一种用于高gc片段的qpcr扩增方法，其特征在于，所述偶氮苯水溶液、烯效唑水溶液按如下体积比添加至qpcr反应体系中：当偶...

【专利技术属性】
技术研发人员：张炳强，陈梦梦，栾延松，张振惠，张宁，周阳，于俊梅，韩丽辉，孙允东，
申请(专利权)人：青岛瑞思德医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：