【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种近视预测模型及其检测方法。
技术介绍
1、近视是一种由环境与遗传因素共同作用引起的屈光不正，其发病率很高。高度近视的屈光度超过600度，和/或眼轴超过26mm，是较为严重的一种屈光不正类型。随着病程进展，患者的眼轴病理性、进行性增长，近视度数不断加深，眼底出现视盘颞侧近视弧、豹纹状眼底、视网膜脉络膜萎缩、fuchs斑以及脉络膜新生血管等，且经常合并多种眼部并发症，如视网膜脱离、并发性白内障、玻璃体浑浊等，导致视功能严重受损甚至失明，是全球范围内主要的致盲性眼病之一，而目前的治疗仍非常有限且效果甚微。高度近视严重损害了患者的视功能，并且对患者的心理健康和生活质量也造成了极大的影响。
2、全球近视发生率一直在以惊人的速度上升，目前全球近30％的人口有近视，预计到2050年，这一数字可能进一步上升，甚至达到全球人口的一半。同时，预计全球近视人口将接近10％造成更严重的视力障碍，成为个人和社会难以承受的沉重负担。据最新统计，中国近视儿童青少年比例已达52.7％。
3、目前我国对于高度近视的检测主要依靠于屈光度检测、眼轴测量、眼底彩照、光学相干断层扫描检查等多种辅助检查方法进行综合评估，有经验的专家可以结合多种检查进行有限的高度近视眼底病变风险预测。但人工的高度近视风险预测耗时费力，精确度不高，难以推广实施。
4、高度近视的发生涉及多因素复杂过程，发病机制仍不清楚，当下的各种光学矫正手段以及手术治疗方法，如屈光手术和巩膜加固手术，不能从根本上阻止及延缓高度近视眼底
5、眼泪是由泪腺分泌的细胞外液透明液体，由外脂层、中间水层和覆盖上皮的黏液层构成。研究表明，眼泪可被认为是血浆的低渗超滤液，其中含有蛋白质、脂质、粘蛋白和小分子代谢物等，因此眼泪可提供身体的信息，具有临床意义。微小核糖核酸microrna（mirna）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码rna，其大小长约20～25个核苷酸。成熟的mirnas是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进rna诱导的沉默复合体(rna-induced silencing complex简称 risc)，通过碱基互补配对的方式识别靶mirna，并根据互补程度的不同指导沉默复合体（risc）降解靶mirna或者阻遏靶mirna的翻译。最近的研究表明mirna参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。
技术实现思路
1、针对现有技术对近视眼底病变风险预测存在的缺陷，本专利技术的目的是提供一种基于人眼泪特定mirna表达情况而建立的近视风险预测模型，为早期预测近视发生风险提供了一种新的检测工具，以眼泪为检测对象，通过检测眼泪中特定mirna的差异表达，由模型对受测者患有近视的概率做出预测。
2、为解决技术问题，本专利技术采用了如下技术方案：
3、专利技术提供了一种基于眼泪mirna表达构建的近视预测模型，其构建方法如下：
4、s1. 眼泪mirna近视标志物筛选：
5、选择多个眼泪样本（分成健康对照组、近视组），对眼泪样本进行mirna芯片检测，通过mirna芯片检测以及数据分析，筛选出健康对照组和近视组存在差异表达的三个mirna近视标志物hsa-mir-21、hsa-mir-27和hsa-mir-221；
6、s2. 在模型训练集中，对多个眼泪样本（分成健康对照组、近视组）进行训练：使用real-time pcr方法检测多个眼泪样本中三个mirna近视标志物的差异表达；将存在表达差异显著的mirnas纳入logistics回归方程，logit（p＝myopia）=0.295*hsa-mir-21 -0.322*hsa-mir-221 +0.606*hsa-mir-27，对logistics回归模型得到的参数进行评估，生成近视预测概率，建立受测者工作特征（roc）曲线；
7、s3. 在模型验证集中，用多个眼泪样本（分成健康对照组、近视组）进行mirna近视标志物组合诊断效能的验证：使用real-time pcr方法检测眼泪样本中三个mirna近视标志物的表达量，从训练集中得出的参数用于验证集上预测被诊断患有近视的概率，建立受测者工作特征roc曲线，roc曲线下面积（auc）评价眼泪mirna近视标志物组合的诊断效能。
8、利用本专利技术基于眼泪mirna表达构建的近视预测模型检测受测者患有近视概率的方法如下：以受测者眼泪样本为检测对象，使用real-time pcr方法检测眼泪样本中三个mirna近视标志物hsa-mir-21、hsa-mir-27和hsa-mir-221的表达量，所述近视预测模型根据三个mirna近视标志物的表达情况对受测者患有近视的概率做出预测。
9、所述三个mirna近视标志物由hsa-mir-21、hsa-mir-27、hsa-mir-221构成，hsa-mir-21的序列为tagcttatcagactgatgttga，hsa-mir-27的序列为ttcacagtggctaagttccgc，hsa-mir-221的序列为agctacattgtctgctgggtttc。
10、所述使用real-time pcr方法检测三个mirna近视标志物的表达量，设计的引物构成如下：
11、hsa-mir-21的上游引物为hsa-mir-21-f，序列为tcggcaggtagcttatcagac；
12、hsa-mir-27的上游引物为hsa-mir-27-f，序列为gccgagttcacagtggctaag；
13、hsa-mir-221的上游引物为hsa-mir-221-f，序列为gccgagagctacattgtctgc；
14、上述三个mirna近视标志物的通用下游引物为universal rp，序列为cagtgcagggtccgaggt。
15、所述使用real-time pcr方法检测三个mirna近视标志物的表达量，包括如下步骤：
16、（1）制备样品得到cdna：
17、（a）使用通用加尾试剂对mirnas进行加尾（e.coli poly(a) polymerase，vazyme）；
18、（b）使用逆转录试剂对加尾后的mirnas进行逆转录（hiscript® ii reversetranscriptase，vazyme），试剂内含有3条目标mirna的引物（如表3所示），得到cdna。
19、（2）real-time pcr：使用探针法实时荧光定量pcr（taq pro u multiple probeqpcr mix，vazyme本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基于眼泪miRNA表达构建的近视预测模型，其特征是，近视预测模型构建方法如下：
2. 根据权利要求1所述的基于眼泪miRNA表达构建的近视预测模型，其特征是，利用近视预测模型检测受测者患有近视概率的方法如下：以受测者眼泪样本为检测对象，使用Real-time PCR方法检测眼泪样本中三个miRNA近视标志物hsa-miR-21、hsa-miR-27和hsa-miR-221的表达量，近视预测模型根据三个micro-RNA近视标志物的表达情况对受测者患有近视的概率做出预测。
3.根据权利要求1或2所述的基于眼泪miRNA表达构建的近视预测模型，其特征是，所述三个miRNA近视标志物由hsa-miR-21、hsa-miR-27、hsa-miR-221构成，hsa-miR-21的序列为tagcttatcagactgatgttga，hsa-miR-27的序列为ttcacagtggctaagttccgc，hsa-miR-221的序列为agctacattgtctgctgggtttc。
4.根据权利要求1或2所述的基于眼泪miRNA表达构建的近视预测模型，
5.根据权利要求1或2所述的基于眼泪miRNA表达构建的近视预测模型，其特征是，所述眼泪样本的制备方法如下：
...【技术特征摘要】
1.基于眼泪mirna表达构建的近视预测模型，其特征是，近视预测模型构建方法如下：
2. 根据权利要求1所述的基于眼泪mirna表达构建的近视预测模型，其特征是，利用近视预测模型检测受测者患有近视概率的方法如下：以受测者眼泪样本为检测对象，使用real-time pcr方法检测眼泪样本中三个mirna近视标志物hsa-mir-21、hsa-mir-27和hsa-mir-221的表达量，近视预测模型根据三个micro-rna近视标志物的表达情况对受测者患有近视的概率做出预测。
3.根据权利要求1或2所述的基于眼泪mirna表达构建的近视预测模型，其特征是，所述三个mirna近视标志...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈梦梦，张昱，周阳，张炳强，栾延松，于俊梅，孙允东，韩丽辉，赵云雪，
申请(专利权)人：青岛瑞思德医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：
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