【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酵母数检测，尤其涉及一种能够准确计数芽簇状上面酵母的处理方法。
技术介绍
1、啤酒酿造过程中，准确的检测酵母数是过程质量控制中的重要参数，酵母数是否正常，会深刻地影响到啤酒发酵过程的多个方面。酵母数量的多少，直接影响着酵母对糖的利用、氨基酸的同化、主产物酒精的发酵、副产物的形成、风味的形成以及啤酒的稳定性等。
2、上面酵母又称为表面酵母、顶面酵母，增值过程中，其母细胞和子细胞能够长时间相互连接，形成多枝的芽簇状，如图1所示。因为酵母细胞黏连、样品内酵母分布不均匀，在酵母数的实际检测中误差较大。
3、目前，在检测芽簇状上面酵母的酵母数时，样品处理均是按照下面酵母的方法进行的，但下面酵母经过处理后，其呈分离状态且分布均匀，如图2所示，因此检测结果的重现性比较好，数据检测准确性高。但芽簇状上面酵母和下面酵母的特性完全不同，按照下面酵母的处理方法处理完芽簇状上面酵母后，在使用显微镜酵母数量时，芽簇状上面酵母依旧出现链接、重叠、分布不均的问题，如图3所示，这导致同一样品数据检测波动大，数据的重现性较差，无法实现酵母数的准确检测。因此，目前能够准确检测芽簇状上面酵的手段尚处于空白状态，需要开发该类技术和方法，实现准确检测酵母数，为精准的工艺控制提供可靠的数据支撑。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种能够准确计数芽簇状上面酵母的处理方法，该方法通过选择采用超声波技术进行预处理，解决了酵母出现的黏连、重叠、分布不均匀等带来的检测误差问题，同时设计了创新的计
2、为了达到上述目的，本专利技术提供了一种能够准确计数芽簇状上面酵母的处理方法，取样并对啤酒上面酵母发酵液样品排气后，先对发酵液样品进行超声振荡预处理，待芽簇状上面酵母充分悬浮后，再根据计数时计数区内细胞数的多少调整稀释和计数方式。
3、作为优选，所述上面酵母为酿酒酵母saccharomyces cerevisiae。可以理解的是，本方案对于上面酵母的选择并不做具体限定，只要外观形态属于芽簇状上面酵母即可。
4、作为优选，对发酵液样品进行超声预处理时使发酵液样品充分振荡和排气，超声处理后使发酵液样品充分排气，以确保芽簇状上面酵母充分悬浮。
5、作为优选，超声频率为35-40khz，超声时间为10min。
6、作为优选，根据计数时计数区内细胞数的多少调整稀释和计数方式具体为：
7、若每个中格内细胞数≥20个，则向反应瓶中加入稀释液稀释发酵液样品，并在计数时使计数区的计数室内的每个中格内的细胞数在30～70个；
8、若每个中格内细胞数＜20个，则不对发酵液样品进行稀释，并在计数时对计数区的计数室内的所有中格进行计数。
9、作为优选，稀释液通过以下方法获得：
10、将6m h2so4按1:100的比例添加至蒸馏水或去离子水中，混匀即可。
11、作为优选，计数室分为25个中格，每个中格分为16个小格，计数室内共有25×16＝400个小格；
12、计数室的容积为1mm长×1mm宽×0.1mm高＝0.1mm3＝1×10-4ml。
13、作为优选，稀释后静置，于显微镜下使用不低于40×10倍的放大倍数，调整焦距，使镜头对准计数区，并分别对两个计数区进行计数；
14、对于稀释样品，对所述计数区的计数室内的四角及中心区共计5个中格内的细胞总数进行计数；或
15、对于非稀释样品，对所述计数区的计数室内的全部中格，即25个中格的细胞总数和出芽数进行计数；
16、判断两个计数区的读数的差值是否在允许的范围内，若在，则将读数换算为每ml的细胞数及出芽率，报告结果；若不在，则重复制片测定，直至有两个计数区读数的差值符合要求。
17、作为优选，判断两个计数区的读数的差值是否在允许的范围内具体为：
18、对于稀释样品，5个中格的细胞总数相差不应超过20个；
19、对非稀释样品25个中格计数细胞总数的，25个中格中的细胞总数相差不超过40个。
20、作为优选，对于稀释样品，细胞数＝5个中格的细胞总数×5×104×稀释倍数个/ml；
21、对于非稀释样品，细胞数＝全部方格的细胞总数×104个/ml；
22、出芽率＝所有的计数出芽数×100/所有的计数细胞数(％)。
23、作为优选，取样并对啤酒液样品排气具体为：
24、释放1000±10ml的上面酵母发酵液清洗取样阀后，取上面酵母发酵液样品100±10ml，将发酵液采用振荡或烧杯互倒30-60次的方式充分排气。
25、与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：
26、本专利技术提供了一种能够准确计数芽簇状上面酵母的处理方法，该方法通过选择采用超声波技术进行预处理，解决了酵母出现的黏连、重叠、分布不均匀等带来的检测误差问题，同时设计了创新的计数方法，可实现芽簇状上面酵母数简单、快捷、准确检测的目的，填补了芽簇状上面酵母检测处理技术的空白。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种能够准确计数芽簇状上面酵母的处理方法，其特征在于，取样并对啤酒上面酵母发酵液样品排气后，对发酵液样品进行超声振荡预处理，待芽簇状上面酵母充分悬浮后，根据计数时计数区内细胞数的多少调整稀释和计数方式。
2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，对发酵液样品进行超声预处理时使发酵液样品充分振荡和排气，超声处理后使发酵液样品充分排气，以确保芽簇状上面酵母充分悬浮。
3.根据权利要求1或2所述的处理方法，其特征在于，超声频率为35-40kHz，超声时间为10min。
4.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，根据计数时计数区内细胞数的多少调整稀释和计数方式具体为：
5.根据权利要求4所述的处理方法，其特征在于，稀释液通过以下方法获得：
6.根据权利要求4所述的处理方法，其特征在于，计数室分为25个中格，每个中格分为16个小格，计数室内共有25×16＝400个小格；
7.根据权利要求4所述的处理方法，其特征在于，稀释后静置，于显微镜下使用不低于40×10倍的放大倍数，调整焦距，使镜头对准计数区，并分别对
8.根据权利要求7所述的处理方法，其特征在于，判断两个计数区的读数的差值是否在允许的范围内具体为：
9.根据权利要求7所述的处理方法，其特征在于，对于稀释样品，细胞数＝5个中格的细胞总数×5×104×稀释倍数个/mL；
10.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，取样并对啤酒液样品排气具体为：
...【技术特征摘要】
1.一种能够准确计数芽簇状上面酵母的处理方法，其特征在于，取样并对啤酒上面酵母发酵液样品排气后，对发酵液样品进行超声振荡预处理，待芽簇状上面酵母充分悬浮后，根据计数时计数区内细胞数的多少调整稀释和计数方式。
2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，对发酵液样品进行超声预处理时使发酵液样品充分振荡和排气，超声处理后使发酵液样品充分排气，以确保芽簇状上面酵母充分悬浮。
3.根据权利要求1或2所述的处理方法，其特征在于，超声频率为35-40khz，超声时间为10min。
4.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，根据计数时计数区内细胞数的多少调整稀释和计数方式具体为：
5.根据权利要求4所述的处理方法，其特征在于，稀...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐楠，孙治富，王可欣，冯海田，韩娜，凌峰，
申请(专利权)人：青岛啤酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。