大规模工业化从牛、羊血液中提取超氧化物歧化酶的方法及应用于该方法中的刀片式搅拌机技术

本发明专利技术公开了一种大规模工业化从牛、羊血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其将新鲜的牛血液或羊血液经过抗凝、低渗溶血、超滤、通过带有热源／冷源的搅拌机快速升降温、沉淀、３级温度处理：第一级：４５－５５℃；第二级：５５－６０℃；第三级：６０－６５℃、盐析、超滤及浓缩、冷冻干燥等生产步骤处理后即可同时得到比活和纯度略有不同的两组超氧化物歧化酶成品，与现有技术相比，本发明专利技术具有工艺简单、生产周期短、产品收率及比活高、质量稳定、成本低等特点，经济效益好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提取超氧化物歧化酶方法，尤其涉及大规模工业化从牛、羊血液中提取超氧化物歧化酶的方法。
技术介绍
超氧化物歧化酶(SOD)是一种能够催化超氧阴离子自由基歧化反应的金属酶，是一种极其有效的抗氧化剂，能抵御超氧阴离子自由基对细胞的破坏。研究显示：SOD可能是人体内塌重韭的酶之一，SOD从结构上可分成两族，Cu-Zn-SOD为第一族，Mn-SOD和Fe-SOD为第二族，而Cu-Zn-SOD是人们了解最多的一种SOD，是人们对SOD结构研究的突破口。随着SOD在医药临床、食品及化妆品中应用的深度拓展，SOD的需求量越来越大，牛血SOD的制备将从实验室走向规模工业化生产，其关键在于保证质量，提高酶的回收率并降低生产成本。依照1969年McCord和Fridovioh的第一次从牛血中提纯Cu-Zn-SOD的方法，国际、国内多沿用该方法，并视为成熟技术，传统方式，其主要工艺过程为：第一步：乙醇+氯仿除去血红蛋白；第二步：有机溶剂和硫酸铵分级沉淀；第三步：离子交换层析精制。随着近十年来用这种传统方法在不同版本的工业化生产的应用，发现有如下不足：A、乙醇、氯仿等有机溶剂存在时Cu-Z本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大规模工业化从牛、羊血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：　　１）在牛血液或羊血液中加入占血液重量比０．３－０．６％的柠檬酸钠抗凝剂，在４℃的低温下静置３０－６０分钟，待溶液分层后，去掉大部分上清；　　２）加入等量体积的蒸馏水，搅拌，低渗溶血３０分钟，再放置４０－６０分钟，待溶液分层后，对上清液进行超滤，得上清液ａ；　　对分层后的沉淀边加热边用带热源的搅拌机搅拌，使其在５－１０分钟内迅速加温至４０－５０℃，保温１０－３０分钟后，边降温边用带冷源的搅拌机搅拌，使其在５－１０分钟内迅速降至室温，４０００－６０００转／分钟离心１５－２０分钟后，在４℃的低温下静置１０－３０分钟...

【技术特征摘要】
1.一种大规模工业化从牛、羊血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)在牛血液或羊血液中加入占血液重量比0.3-0.6％的柠檬酸钠抗凝剂，在4℃的低温下静置30-60分钟，待溶液分层后，去掉大部分上清；2)加入等量体积的蒸馏水，搅拌，低渗溶血30分钟，再放置40-60分钟，待溶液分层后，对上清液进行超滤，得上清液a；对分层后的沉淀边加热边用带热源的搅拌机搅拌，使其在5-10分钟内迅速加温至40-50℃，保温10-30分钟后，边降温边用带冷源的搅拌机搅拌，使其在5-10分钟内迅速降至室温，4000-6000转/分钟离心15-20分钟后，在4℃的低温下静置10-30分钟后除去沉淀，得到上清液b；3)将步骤2)获得的上清液a、b混合，对混合后的上清液进行三级温度梯度处理：第一级：45-55℃；第二级：55-60℃；第三级：60-65℃；每一级梯度边加热边用带热源的搅拌机搅拌，使其在5-10分钟内迅速升温到相应温度后，保温10-30分钟后，边降温边用带冷源的搅拌机搅拌，以使其在5-10分钟内迅速降温，4000-6000转/分钟离心15-20分钟后，在4℃的低温下静置10-30分钟后除去沉淀，得上清液；4)对步骤3)中最后获得的上清液进行两级盐析：首先加入硫酸铵，使盐析液饱和度50-60％，充分搅拌使硫酸铵完全溶解，在温度为4-6℃下放置15-30小时后，4000-6000转/分钟离心15-20分钟后，在4℃的低温下静置10-30分钟后除去沉淀，得上清液；5)在步骤4)获得的上清液中继续加入硫酸铵，使盐析液饱和度为90-95％，充分搅拌使硫酸铵完全溶解，在温度为4-6℃的低温下静置20-3...

【专利技术属性】
技术研发人员：李蒙，
申请(专利权)人：云南呈贡光明亚南经贸有限责任公司，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]