【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子诊断，具体涉及外泌体mirna-365a-5p作为诊断骨折内固定术后感染的分子标志物及其应用。
技术介绍
1、骨折内固定术后感染指的是骨折内固定置入术后由于致病微生物污染或患者自身免疫力低下所致的、与内置物接触、伴或不伴周围软组织感染的骨组织感染。由于社会经济的快速发展，各类创伤因素所致四肢骨折并接受内固定治疗的患者日益增多，加上患者自身伤情复杂多变，以及临床医生对患者感染高危因素认识不足等原因，使得骨折内固定术后感染患者数目不断增加。研究显示，骨折内固定术后感染的发病率为0.4％～16.1％，而不同部位的骨折，发病率略有不同。以胫骨近端骨折和踝关节骨折为例，胫骨近端骨折内固定术后感染平均发生率为6.47％，而踝关节骨折内固定术后感染平均发生率为4.1％。骨折内固定术后感染不仅为患者带来巨大的身心压力，还加重了患者和社会的经济负担。因此，及早明确诊断并及时开展治疗，对提高患者治愈率，降低感染复发风险和改善生活质量是至关重要的。目前，骨折内固定术后感染的诊断需要依靠患者明确的外伤史及手术史，局部皮肤、窦道、流脓和全身症状等情况；影像学检查包括x线、超声、ct、mri及核医学检查等，评估骨质变化、骨折断端是否接触、内置物位置及骨不连的情况；实验室检查如白细胞、血沉、c反应蛋白和病原学检查等，明确有无感染以及感染的程度等。临床上，骨折内固定术后感染往往诊断困难，多数患者早期症状往往不典型甚至缺如，感染指标的特异度和敏感度并不高，且受多种因素影响，组织病理活检虽然是诊断骨折内固定术后感染的“金标准”，但是其诊断往往在手
2、外泌体是由细胞分泌而来的微小囊泡，分子直径约30-200nm，具有双侧膜结构，广泛分布于血清、血浆、尿液和腹水等体液中。外泌体作为细胞间通讯的介质，携带蛋白质、核酸和脂类，参与细胞交流、调控重要的细胞生理活动，在免疫应答、凋亡、血管生成和炎症反应等过程中均有报道，成为了多种疾病早期诊断标记物、治疗的潜在靶点以及靶向药物载体等。
3、mirna是一类长约19-23个核苷酸的非编码rna，在进化上高度保守，通过与靶信使核糖核酸(mrna)特异结合，从而抑制转录后基因表达，如生物体内在的与机体生长、发育、疾病发生过程有关的基因的表达。目前发现mirna通过负调控基因的表达降低成骨细胞的活性，促使骨缺损和骨不连的发生。
4、已有研究表明，血浆外泌体中存在几百种mirnas，这些小分子rnas性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性。这些特征使得外泌体mirna可用于监测骨折内固定术后感染的疾病发展，并且作为诊断骨折内固定术后感染的有效指标。目前还没有用于骨折内固定术后感染辅助早期诊断的较为稳定的生物标志物的报道。
技术实现思路
1、解决的技术问题：本专利技术提供一种外泌体mirna-365a-5p作为诊断骨折内固定术后感染的分子标志物及其应用，通过对血浆外泌体中的mirna-365a-5p的实时定量pcr检测，为骨折内固定术后感染提供新的诊断方法。
2、技术方案：核酸序列如seq id no.1所示的外泌体mirna-365a-5p作为分子标志物在制备诊断骨折内固定术后感染产品中的应用。
3、上述产品为一种早期诊断试剂盒。
4、上述试剂盒中含有检测血浆外泌体mirna-365a-5p表达量的实时定量pcr扩增引物。
5、上述引物如seq id no.7和seq id no.8所示。
6、诊断骨折内固定术后感染的试剂盒，含有核酸序列如seq id no.1所示的外泌体mirna-365a-5p。
7、上述试剂盒还含有如seq id no.7和seq id no.8所示的引物。
8、有益效果：本专利技术公开了基于血浆外泌体mirna-365a-5p的诊断骨折内固定术后感染的分子标志物及其应用。利用高通量测序检测临床骨折内固定术后感染患者的血浆外泌体标本中microrna的表达，与骨折内固定术后未感染组相比，mirna-365a-5p，mirna-889-3p，mirna-130b-3p和mirna-27b-5p共四个血浆外泌体microrna在骨折内固定术后感染中差异表达。随后扩大样本量，通过实时定量pcr进行验证发现，mirna-365a-5p和mirna-130b-3p与芯片分析结果一致。通过roc曲线分析两种血浆外泌体mirna诊断骨折内固定术后感染的效能，结果显示两种血浆外泌体的auc值分别为0.8356和0.7617，mirna-365a-5p诊断效能最高，其敏感度和特异度分别为90.0％和66.7％。
9、本专利技术证明血浆外泌体mirna-365a-5p可以作为骨折内固定术后感染的分子诊断标志物。将其制成诊断骨折内固定术后感染的试剂盒，通过检测患者血浆外泌体mirna的表达量，对骨折内固定术后感染进行早期和快速诊断，当外泌体mirna-365a-5p表达量上调，则提示患者骨折内固定术后感染，具有重要的临床应用价值。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.核酸序列如SEQ ID NO.1所示的外泌体miRNA-365a-5p作为分子标志物在制备诊断骨折内固定术后感染产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为一种早期诊断试剂盒。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中含有检测血浆外泌体miRNA-365a-5p表达量的实时定量PCR扩增引物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述引物如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。
5.诊断骨折内固定术后感染的试剂盒，其特征在于，含有核酸序列如SEQ ID NO.1所示的外泌体miRNA-365a-5p。
6.根据权利要求5所述诊断骨折内固定术后感染的试剂盒，其特征在于，还含有如SEQID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物。
【技术特征摘要】
1.核酸序列如seq id no.1所示的外泌体mirna-365a-5p作为分子标志物在制备诊断骨折内固定术后感染产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为一种早期诊断试剂盒。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中含有检测血浆外泌体mirna-365a-5p表达量的实时定量pcr扩增引物。
4.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘源，胡军，易小兰，黄雅慧，戴艳，胡清原，
申请(专利权)人：江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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