【技术实现步骤摘要】
本申请属于肾移植与蛋白尿评估，具体涉及评估肾移植术后蛋白尿发生的引物对及其应用。
技术介绍
1、随着肾移植手术方法、技术的改进，以及新型免疫抑制剂的应用，肾移植术后短期存活率显著改善。然而，肾移植术后长期存活率仍需要改善，因为肾移植术后存在谋些并发症，蛋白尿的发生就是其中之一。
2、蛋白尿是指尿内蛋白质含量增多，用常规定性试验检测呈阳性或定量检测超过阈值的尿。在正常情况下，肾小球只能通过分子量较小的物质，但是如有患某些疾病，蛋白质漏出就会增加，形成蛋白尿。尿蛋白总量指尿液中蛋白质的总含量，通常采用24h尿蛋白定量检验。与慢性肾脏病相关蛋白尿一致，肾移植术后持续性蛋白尿与肾移植预后密切相关。肾移植术后1年蛋白尿发生率为15～20％，是肾移植术后长期存活的独立危险因素。肾移植术后蛋白尿的病因分为免疫因素以及非免疫因素，研究表明增强免疫抑制治疗对于肾移植术后蛋白尿没有明显治疗效果。肾移植术后蛋白尿的产生与慢性排斥反应、慢性移植物肾病、肾移植后肾小球肾炎、急性排斥反应和环孢素肾毒性有关。有效控制肾移植术后蛋白尿可减少对移植肾的损害。
3、目前，大量的研究表明基因多态性与肾脏疾病有关。如nephrin基因nphs1的突变和多态性影响芬兰型先天性肾病综合征(cnf)、mcns等疾病的发展及其蛋白尿的发生；podocin的nphs2基因突变可导致类固醇抵抗性肾病综合征(srns)，其中大多数是家族性的，但也可能是散发的；podocin基因突变也与非糖尿病性终末期肾脏疾病有关，该基因多态性与蛋白尿的发生之间的明确相关性已
4、toll样受体(tlrs)是一个跨越细胞膜的结构识别家族受体，在细胞发育、炎症、免疫反应和肿瘤发生中起重要作用，其中tlr2是一个关键的成员。tlr2的编码基因为位于4号染色体4q32区，tlr2为主要在外周血表面表达白细胞。tlr2可以与细菌和内源性相互作用配体激活转录因子，如nf-κb和ap-1。目前的研究已经证实，在组织缺血性损伤后，大量凋亡细胞可出现在器官和产生宿主防御等一系列免疫反应和损伤修复反应。积累随着炎性细胞的释放这些因素会损害组织。tlr2的缺失会导致肾损伤，白细胞内流，肾小管损伤肾缺血再灌注期间。研究报道显示蛋白尿可能表现出内源性危险相关分子模式(damp)诱导小管间质tlr2-myd88-nf-κb通路激活。因此，tlr2在蛋白尿的发生中起到了重要的作用，测得相关位点的基因型，可能能够预测肾移植术后蛋白尿的发生。
5、单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，snp)被称为“第三代dna遗传标记”，具有分布密集、数量庞大、频率高、属二态性标记、存在相对稳定的特点，被认为是应用前景最好的遗传标记物。
技术实现思路
1、1.专利技术目的
2、本申请的目的是提供评估肾移植术后蛋白尿发生的引物对及其应用，通过检测基因tlr2snp位点(rs3804099)的基因型，可在在肾移植术后早期，在患者服药前预测患者蛋白尿发生情况，从而及时调整用药方案，改善移植肾预后。
3、2.技术方案
4、为了解决上述问题，本申请所采用的技术方案如下：
5、本申请提供了检测基因tlr2 snp位点基因型的试剂在制备评估肾移植术后蛋白尿发生产品中的应用，snp位点为基因tlr2的rs3804099位点，专利技术人研究发现基因tlr2是蛋白尿发生的相关基因，该基因上snp位点(rs3804099)的突变，能够预测受试者(患者)肾移植术后蛋白尿发生的情况。
6、进一步地，上述检测基因tlr2 snp位点基因型的试剂，包括：引物对，引物对的序列为：
7、f：5’-gaacttgagattgatgatgcttcagatctacagag-3’；
8、r：5’-ctctgtagatctgaagcatcatcaatctcaagttc-3’。
9、本申请还提供了评估肾移植术后蛋白尿发生的引物对，引物对的序列为：
10、f：5’-gaacttgagattgatgatgcttcagatctacagag-3’；
11、r：5’-ctctgtagatctgaagcatcatcaatctcaagttc-3’。
12、本申请还提供了检测基因tlr2 snp位点基因型的试剂，snp位点为tlr2rs3804099位点，包括：引物对，引物对的序列为：
13、f：5’-gaacttgagattgatgatgcttcagatctacagag-3’；
14、r：5’-ctctgtagatctgaagcatcatcaatctcaagttc-3’。
15、本申请还提供了一种评估肾移植术后蛋白尿发生的试剂盒，该试剂盒包括上述引物对。
16、进一步地，上述一种评估肾移植术后蛋白尿发生的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括总rna提取试剂、pcr扩增和测序试剂，pcr扩增试剂包括上述引物对。
17、进一步地，上述总rna提取试剂包括：trizol、氯仿、异丙醇、乙醇、去离子甲酰胺。
18、进一步地，上述pcr扩增和测序试剂包括：上述引物对、dntp、pcr buffer、taq酶，内参(g3pd)特异性引物、焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate，depc)水、双蒸水等。
19、本申请还提供了一种检测基因tlr2 snp位点基因型的试剂盒，snp位点包括tlr2rs3804099位点，该试剂盒包括上述检测基因tlr2 snp位点基因型的引物对。
20、进一步地，上述一种检测基因tlr2 snp位点基因型的试剂盒，包括总rna提取试剂、pcr扩增试剂和测序试剂，pcr扩增试剂包括上述检测基因tlr2snp位点基因型的引物对。
21、进一步地，上述总rna提取试剂包括：trizol、氯仿、异丙醇、乙醇、去离子甲酰胺。
22、进一步地，上述pcr扩增和测序试剂包括：上述引物对、dntp、pcr buffer、taq酶，内参(g3pd)特异性引物、焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate，depc)水、双蒸水等。
23、本申请还提供了一种评估肾移植术后蛋白尿发生的装置，该装置包括数据接收模块、赋值和数据处理模块、输出模块，其中：
24、数据接收模块，其被配置为用于接受数据，包括：受试者的性别、年龄、体重、是否发生急性排斥反应、免疫抑制方案、是否服用雷帕霉素、是否发生移植物功能延迟恢复、tlr2rs3804099位点的基因型；
25、赋值和数据处理模块，其被配置为基于数据接收模块接收的数据，给如下公式中各参数赋值并计算受试者肾移植术后蛋白尿发生的概率：
26、蛋白尿发生的概率＝1.029+0.334×性本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测基因TLR2 SNP位点基因型的试剂在制备评估肾移植术后蛋白尿发生产品中的应用，其特征在于，所述SNP位点包括TLR2 rs3804099位点。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括：引物对，
3.一种评估肾移植术后蛋白尿发生的引物对，其特征在于，所述引物对序列为：
4.一种评估肾移植术后蛋白尿发生的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的引物对。
5.根据权利要求4所述的一种评估肾移植术后蛋白尿发生的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括总RNA提取试剂、PCR扩增和测序试剂，所述PCR扩增试剂包括权利要求3所述的引物对。
6.一种评估肾移植术后蛋白尿发生的装置，其特征在于，所述装置包括数据接收模块、赋值和数据处理模块、输出模块，其中：
7.根据权利要求6所述的一种评估肾移植术后蛋白尿发生的装置，其特征在于，所述装置还包括基因型检测模块，所述基因型检测模块包括权利要求3所述的引物对，检测受试者基因TLR2 SNP位点基因型，SNP位点包括TLR2 rs3804099。
...【技术特征摘要】
1.检测基因tlr2 snp位点基因型的试剂在制备评估肾移植术后蛋白尿发生产品中的应用，其特征在于，所述snp位点包括tlr2 rs3804099位点。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括：引物对，
3.一种评估肾移植术后蛋白尿发生的引物对，其特征在于，所述引物对序列为：
4.一种评估肾移植术后蛋白尿发生的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的引物对。
5.根据权利要求4所述的一种评估肾移植术后蛋白尿发生的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括总rna提取试剂、pcr扩增和测序试剂，所述pcr扩增试剂包括权利要求3所述的引物对。
...【专利技术属性】
技术研发人员：费爽，袁静文，王子杰，季逸圣，倪斌，顾民，谭若芸，居小兵，韩志坚，陶俊，黄正楷，陈浩，孙黎，王增军，
申请(专利权)人：江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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