【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，具体涉及一种酶解构树粉及其制备方法与应用。
技术介绍
1、构树别名构桃树、谷浆树、假杨梅等，广泛分布于我国华北、华中、华南、西南、西北各地区。在我国，人们将构树叶作为牲畜的饲料原料。作为牲畜饲料而言，构树叶优势十分突出：蛋白质含量高达20％至30％，氨基酸、维生素及微量元素等营养成分也十分丰富；采用以构树叶为主要原料发酵制成的饲料，绿色环保，不含农药或激素，清香味正；牲畜吃后生长速度快，抗病力强，饲养周期短。
2、由于构树粉中存在单宁(含量约为1.6％)，因此其饲料口感苦涩，而且单宁易于蛋白质形成络合物，影响动物的营养摄入量。需要添加额外的甜味剂(糖精)，改善饲料的口感，提高饲料的适口性以及动物对饲料的摄入量。有试验数据表明，单宁酸在仔猪小肠内不被吸收，而会在结肠部位被微生物部分分解，变成没食子酸被吸收。一般而言，仔猪采食的单宁酸会通过粪便排出70-80％。对大猪而言，也至少有30％的单宁酸随粪便而排出。
3、单宁酶是单宁降解过程中研究比较多的酶，可以水解单宁中的酯键。单宁酶是一种诱导酶，在单宁酸和单宁存在的情况下可以诱导生成。单宁酶在各种真菌和细菌中广泛存在。生产中常用的单宁酶生产菌主要是真菌，如米曲霉(aspergillus oryzae)等。
4、黑曲霉历史悠久，早在中国古代，人们就利用黑曲霉制作酱料、酱油、米酒等。由于黑曲霉生长旺盛、发酵周期短、不产生毒素，被美国fda认证为安全菌种。黑曲霉具有很强的蛋白表达、分泌和修饰能力，同时重组子具有很高的遗传稳定性。随着
5、专利cn100467586c公开了一种可同时高产柚苷酶和橙皮苷酶、并能实现工业化生产的黑曲霉菌wz001(aspergillus niger wz001)及其应用。具体而言，该种菌株产酶量高，采用液态发酵培养时，柚苷酶与橙皮苷酶产酶量均可达到14000u/g以上；采用固态发酵培养时，柚苷酶与橙皮苷酶产酶量均可达到6000u/g以上。因此本申请为解决目前以构树粉为原料的饲料中单宁含量过高，导致饲料适口性差的技术问题，针对黑曲霉菌wz001(aspergillus niger wz001)展开了进一步的应用研发。
技术实现思路
1、本专利技术以黑曲霉菌wz001作为出发菌株，制备了一种新型的黑曲霉单宁酶，所述黑曲霉单宁酶可以酶解构树粉中的单宁，进而解决目前以构树粉为原料的饲料中单宁含量过高，导致饲料适口性差的技术问题。具体通过以下技术方案实现：
2、一种酶解构树粉的制备方法，包括以下步骤：
3、s1、以野生型黑曲霉为出发菌株，敲除pyrg基因，获得黑曲霉pyrg基因缺陷型菌株；所述野生型黑曲霉保藏编号为cctcc no.206047；以单宁酶基因加pyrg基因的形式回补pyrg基因，筛选得到黑曲霉高产单宁酶菌株；对黑曲霉高产单宁酶菌株进行发酵罐培养得到黑曲霉单宁酶；
4、s2、使用所述黑曲霉单宁酶对构树粉进行酶解，得到酶解构树粉。
5、作为优选，步骤s2包括以下步骤：
6、s2.1、将构树粉原料溶于水，得到预处理原料；
7、s2.2、向预处理原料中加入所述黑曲霉单宁酶的酶液，进行酶解，得到酶解产物；
8、s2.3、将酶解产物进行灭活处理，得到酶解构树粉。
9、作为优选，步骤s2.1中，构树粉原料与水的质量体积比为1：3。
10、作为优选，步骤s2.2中酶液添加量与预处理原料中构树粉添加量的体积质量比为1％～10％。
11、作为优选，步骤s2.2中酶解条件为：温度25～60℃，时间为1～6h。
12、作为优选，步骤s2.3中灭活处理为：将酶解产物加热至沸腾，之后冷却至室温，得到酶解构树粉。
13、一种使用上述任一项制备方法制得的酶解构树粉。
14、一种包含有上述酶解构树粉的饲料。
15、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
16、本专利技术以黑曲霉菌wz001作为出发菌株，构建并筛选出一株高产黑曲霉单宁酶菌株，而后将其发酵获得的重组单宁酶用于酶解构树粉中的单宁，可以将构树粉单宁转化为没食子酸，这可以有效提高以构树粉作为原料之一的饲料的适口性。在此基础上，由于黑曲霉宿主具有丰富的酶系，淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶等，本专利技术的黑曲霉单宁酶可以起到复合酶的作用，因此可以较为全面的对构树粉进行酶解，经酶解后获得的产物营养价值较高，体现出了较高的经济价值和社会效益。此外，本专利技术构建的黑曲霉单宁酶能够达到食品级酶制剂的要求，因此获得的酶解构树粉安全性有所保障。
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1.一种酶解构树粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2.1中，构树粉原料与水的质量体积比为1：3。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2.2中酶液添加量与预处理原料中构树粉添加量的体积质量比为1％～10％。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2.2中酶解条件为：温度25～60℃，时间为1～6h。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2.3中灭活处理为：将酶解产物加热至沸腾，之后冷却至室温，得到酶解构树粉。
7.一种使用权利要求1～6任一项所述的制备方法制得的酶解构树粉。
8.一种包含有权利要求7所述的酶解构树粉的饲料。
【技术特征摘要】
1.一种酶解构树粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤s2包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤s2.1中，构树粉原料与水的质量体积比为1：3。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤s2.2中酶液添加量与预处理原料中构树粉添加量的体积质量比为1％～10％。
【专利技术属性】
技术研发人员：郑建永，李玲秀，王伟丽，李春，吕巨波，唐仁喜，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
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