一种2’-脱氧胞苷单磷酸及其酶促合成方法技术

本发明专利技术提供一种2’‑脱氧胞苷单磷酸及其酶促合成方法，属于生物合成技术领域。其中所述合成方法包括：构建第一工程菌株及第二工程菌株；将第一工程菌株和第二工程菌株分别进行发酵培养和蛋白分离纯化得到高纯度脱氧胞苷激酶及高纯度多聚磷酸激酶；以2’‑脱氧胞苷为脱氧胞苷底物，腺苷三磷酸为磷酸供体，循环投料多聚磷酸盐并保持腺苷三磷酸与多聚磷酸盐的比例为预设比例构成酶促反应体系；进行酶促反应，得到2’‑脱氧胞苷单磷酸。本发明专利技术能够实现快速有效地生产高浓度脱氧胞苷单磷酸，不但可以解决化学合成法带来的污染危害，还可以减少生物合成体系中腺苷三磷酸作为磷酸供体的投入量，降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物合成，尤其涉及一种2’-脱氧胞苷单磷酸及其酶促合成方法。

技术介绍

1、核苷酸是一类由嘌呤或嘧啶碱基、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的小分子化合物，是构成生物体遗传物质脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，dna)、核糖核酸(ribonucleic acid，rna)的物质基础。核苷酸与dna、rna的紧密联系预示着核苷酸类化合物在生物遗传代谢中的重大作用。在科学研究领域，聚合酶链式反应(polymerase chainreaction，pcr)技术自诞生以来为生命科学的各个方面做出了史无前例的贡献，快速的推动者生物技术的发展，而脱氧核苷三磷酸则是聚合酶链式反应技术的物质基础。脱氧核苷单磷酸是合成脱氧核苷三磷酸的必需原料之一。目前合成脱氧核苷单磷酸一般采用化学合成法，但是该方法不但对人类和环境存在一定危害，有时还会导致核苷酸产量低。为了缓解上述问题，可以采用生物合成法，该方法不仅可以有效降低制造产业的原料成本，提高核苷酸产量，而且有助于缓解化学合成法所引发的环境污染、原料成本高，产物产量低等问题，对社会可持续发展具本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合成方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合成方法，其特征在于，所述第一工程菌株，是通过将基于黑腹果蝇来源的经密码子优化后的脱氧胞苷激酶表达在大肠杆菌中，构建得到第一工程菌株；

3.如权利要求1所述的2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合成方法，其特征在于，所述脱氧胞苷激酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

4.如权利要求1所述的2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合成方法，其特征在于，所述第一工程菌和所述第二工程菌的构建方法包括：

5.如权利要求4所述的2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合...

【技术特征摘要】

1.一种2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合成方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合成方法，其特征在于，所述第一工程菌株，是通过将基于黑腹果蝇来源的经密码子优化后的脱氧胞苷激酶表达在大肠杆菌中，构建得到第一工程菌株；

3.如权利要求1所述的2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合成方法，其特征在于，所述脱氧胞苷激酶的氨基酸序列如seq id no:1所示；

4.如权利要求1所述的2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合成方法，其特征在于，所述第一工程菌和所述第二工程菌的构建方法包括：

5.如权利要求4所述的2’-脱氧胞苷单磷酸的酶促合成方法，其特征在于，所述质粒载体为适于在大肠杆菌表达的载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾德臣，金梦如，唐享，程寿玲，
申请(专利权)人：生工生物工程上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：