一种可去除标签的载体及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种可去除标签的载体及其构建方法与应用，涉及基因工程技术领域。本发明专利技术通过在pET‑28(a)质粒上插入PSP酶对应的酶切位点的碱基序列和纯化标签的编码基因获得一种重组质粒，该质粒表达的蛋白可以在初次纯化后，再利用PSP酶对目的蛋白进行酶切，再次进行镍柱纯化后可获得不带标签的高纯度蛋白，为对于蛋白纯度有高要求的科研工作者提供了一个新的纯化策略。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，具体而言，涉及一种可去除标签的载体及其构建方法与应用。

技术介绍

1、蛋白质是生物的重要组成成分之一，对于人体生命活动的研究主要集中在对于蛋白质的结构和功能上。由于大部分蛋白质在体内表达量较低，原位提取无法满足蛋白质研究的需求，因此重组蛋白的体外表达与纯化一直是生物学领域研究的重要研究内容。目前市场上可购买的为pet28(a,b,c)-6×his tag质粒,由于载体自身所带的6个组氨酸以及分子克隆引入的多余氨基酸序列，这就导致重组表达的蛋白会比实际蛋白大小大1-2kda，分子量的增加在一定程度上是导致重组蛋白结构与功能研究偏离真实情况的原因之一。因此，为了使得对重组蛋白结构与功能研究更加细致，如何消除重组蛋白增加的氨基酸是目前最为关键的问题。

2、鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种可去除标签的载体、制备方法及其应用。

2、为实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：

3、第一方面，本专利技术提供了一种可去本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种可去除标签的载体，其特征在于，所述载体为将蛋白酶切位点的碱基序列和两个组氨酸的碱基序列插入到pET28-6His质粒上得到的重组载体pET28-8His；所述蛋白酶为PSP酶；

2.根据权利要求1所述的可去除标签的载体，其特征在于，所述重组载体还包括多克隆位点和C端6×His tag，所述PSP酶对应的酶切位点的碱基序列被插入到多克隆位点前。

3.根据权利要求2所述的可去除标签的载体，其特征在于，所述PSP酶对应的酶切位点的碱基序列在所述8×His tag的碱基序列在之后。

4.根据权利要求3所述的可去除标签的载体，其特征在于，所述重组载体依次...

【技术特征摘要】

1.一种可去除标签的载体，其特征在于，所述载体为将蛋白酶切位点的碱基序列和两个组氨酸的碱基序列插入到pet28-6his质粒上得到的重组载体pet28-8his；所述蛋白酶为psp酶；

2.根据权利要求1所述的可去除标签的载体，其特征在于，所述重组载体还包括多克隆位点和c端6×his tag，所述psp酶对应的酶切位点的碱基序列被插入到多克隆位点前。

3.根据权利要求2所述的可去除标签的载体，其特征在于，所述psp酶对应的酶切位点的碱基序列在所述8×his tag的碱基序列在之后。

4.根据权利要求3所述的可去除标签的载体，其特征在于，所述重组载体依次包含有8×his tag的编码基因、psp酶对应的酶切位点的碱基序列、多克隆位点和6×his tag的编码基因。

5.根据权利要求1所述的可去除标签的载体，其特征在于，所述重组载...

【专利技术属性】
技术研发人员：王彩艳，范敏棋，许远航，张英，吴芳，张林，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：