【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制药，尤其是涉及一种季节性甲型流感通用mosaic重组抗原及其疫苗和应用。
技术介绍
1、流行性感冒病毒(influenza virus，iv)，简称流感病毒，其亚型众多，不同来源的ha和na基因能重配组合成上百种不同亚型的病毒，同一种亚型中还存在众多的不同毒株，可以在不同的宿主之间传播。而甲型流感病毒ha抗原的变异频率很高，在免疫压力下，其抗原性变异更频繁，极易发生抗原漂移和抗原转变，使流感病毒产生免疫逃逸，从而导致季节性流感流行与全球流感大流行。
2、接种流感疫苗是预防流感、降低流感危害以及减少各类并发症的最佳干预措施。由于流感病毒的易变异性，世界卫生组织(who)每年都会预测并推荐南、北半球的流行毒株，疫苗生产厂商会以此为疫苗株生产流感疫苗，而人群也需要每年接种流感疫苗以匹配当年预测将会流行的毒株。如果疫苗使用的毒株与流行的毒株不匹配，保护效力会大幅降低，并导致流感的发病率和死亡率增加。因此研发具有相对广谱性的通用型疫苗已成为大家关注的重点问题。
3、目前国际上研究了许多通用的流感疫苗策略。病毒表面糖蛋白、血凝素(ha)和神经氨酸酶(na)是疫苗最常见的靶点，但它们的交叉保护作用有限。最近的研究主要针对ha茎部区，该区域比ha头部区域更保守。ha和na靶点依赖于诱导抗体反应来提供对iav的保护。然而，在以往的流感疫苗研制过程中，往往忽略了t细胞免疫应答的重要性。t细胞免疫应答是抵抗病毒感染的关键因素，对控制流感病毒、艾滋病毒具有重要作用。越来越多的证据表明，t细胞免疫可能是更好的疫
4、目前，国内上市的流感疫苗均为传统鸡胚培养的疫苗，包括灭活和减毒疫苗，通常为三价(甲型h1n1、甲型h3n2和一种乙型)或四价(甲型h1n1、甲型h3n2、乙型yamagata及乙型victoria)疫苗。这些疫苗一方面只能引起全身体液反应，另一方面对新出现的毒株的保护有限。基于流感病毒的多样性与抗原的频繁突变，研制一种可抵御多种亚型流感病毒的通用型疫苗是非常理想的选择。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种季节性甲型流感通用mosaic重组抗原及其疫苗和应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
3、本专利技术提供了一种季节性甲型流感通用mosaic重组抗原，所述mosaic重组抗原为：
4、(a)由seq id no:3所示的氨基酸序列组成的抗原；或者，
5、(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸组成的抗原。
6、作为本专利技术所述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的优选实施方式，所述mosaic重组抗原的th细胞表位与流感病毒的天然ha蛋白上的th细胞表位相比，th细胞表位覆盖率大于81％；所述mosaic重组抗原的th细胞表位与流感病毒的天然na蛋白上的th细胞表位相比，th细胞表位覆盖率大于84％。
7、本申请的mosaic重组抗原是在天然ha蛋白或na蛋白序列上产生少量“镶嵌”序列，使其包含来自天然蛋白序列的潜在t细胞表位的最大多样性。利用遗传算法(计算优化方法)从天然蛋白的片段组装，优化产生的“镶嵌”蛋白具有丰富的t细胞表位。经过模拟预测mosaic重组抗原的三维结构模型，本专利技术筛选得到的mosaic重组抗原与天然蛋白具有较高的结构相似性，具有开发为疫苗抗原的潜力。
8、作为本专利技术所述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的优选实施方式，所述ha蛋白包括h1蛋白或h3蛋白，所述na蛋白包括n1蛋白或n2蛋白。
9、作为本专利技术所述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的优选实施方式，所述mosaic重组抗原超过81％的th细胞表位的12个氨基酸与流感病毒的天然h1蛋白或h3蛋白上的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
10、作为本专利技术所述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的优选实施方式，所述mosaic重组抗原超过96％的th细胞表位的11个以上氨基酸与流感病毒的天然h1蛋白或h3蛋白上的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
11、作为本专利技术所述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的优选实施方式，所述mosaic重组抗原超过99％的th细胞表位的10个氨基酸与流感病毒的天然h1蛋白或h3蛋白的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
12、作为本专利技术所述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的优选实施方式，所述mosaic重组抗原超过84％的th细胞表位的12个氨基酸与流感病毒的天然n1蛋白或n2蛋白上的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
13、作为本专利技术所述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的优选实施方式，所述mosaic重组抗原超过96％的th细胞表位的11个以上氨基酸与流感病毒的天然n1蛋白或n2蛋白上的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
14、作为本专利技术所述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的优选实施方式，所述mosaic重组抗原超过98％的th细胞表位的10个以上氨基酸与流感病毒的天然n1蛋白或n2蛋白上的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
15、经过蛋白生物学功能的实验验证，氨基酸序列如seq id no:1所示的mosaic重组抗原能产生26的血凝效价，氨基酸序列如seq id no:2所示的mosaic重组抗原能产生27的血凝效价。
16、本专利技术的mosaic重组抗原对于唾液酸a2,3-半乳糖受体与唾液酸a2,6-半乳糖受体均有结合能力且与pbs组对比有显著性差异(p≤0.01)，其中对于a2,6-半乳糖受体结合能力更强。
17、作为本专利技术所述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的优选实施方式，所述mosaic重组抗原还添加有gp67信号肽、凝血酶切割位点和8×his标签，去除ha或na原有信号肽；针对ha蛋白添加gcn4pii序列，针对na蛋白添加vasp序列；
18、所述gp67信号肽的氨基酸序列为：mllvnqshqgfnkehtskmvsaivlyvllaaaahsafaad；
19、所述gcn4pii序列为mkqiedkieeilskiyhieneiarikkligev；
20、所述vasp序列为sssdysdlqrvkqelleevkkelqkvkeeiieafvqelrkrg。
21、本专利技术还提供了编码上述季节性甲型流感通用mosaic重组抗原的基因。
22、本专利技术对处理后的mosaic重组抗原的基因进行优化，根据昆虫细胞的密码子偏好性进行基因改造，得到优化后的基因。
23、作为本专利技术所述基因的优选实施方式，所述基因的序列如seq id no:7所示。
24、本专利技术还提供了包含所述基因的载体。
25、作为本专利技术所述载体的优本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述Mosaic重组抗原为：
2.如权利要求1所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述Mosaic重组抗原的Th细胞表位与流感病毒的天然HA蛋白上的Th细胞表位相比，Th细胞表位覆盖率大于81％；所述Mosaic重组抗原的Th细胞表位与流感病毒的天然NA蛋白上的Th细胞表位相比，Th细胞表位覆盖率大于84％。
3.如权利要求2所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述HA蛋白包括H1蛋白或H3蛋白，所述NA蛋白包括N1蛋白或N2蛋白。
4.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述Mosaic重组抗原超过81％的Th细胞表位的12个氨基酸与流感病毒的天然H1蛋白或H3蛋白上的Th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
5.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述Mosaic重组抗原超过96％的Th细胞表位的11个以上氨基酸与流感病毒的天然H1蛋白或H3蛋白上的Th细胞表位的
6.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述Mosaic重组抗原超过99％的Th细胞表位的10个氨基酸与流感病毒的天然H1蛋白或H3蛋白的Th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
7.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述Mosaic重组抗原超过84％的Th细胞表位的12个氨基酸与流感病毒的天然N1蛋白或N2蛋白上的Th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
8.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述Mosaic重组抗原超过96％的Th细胞表位的11个以上氨基酸与流感病毒的天然N1蛋白或N2蛋白上的Th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
9.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述Mosaic重组抗原超过98％的Th细胞表位的10个以上氨基酸与流感病毒的天然N1蛋白或N2蛋白上的Th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
10.如权利要求1所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原，其特征在于，所述Mosaic重组抗原还添加有gp67信号肽、凝血酶切割位点和8×His标签，去除HA或NA原有信号肽；针对HA蛋白添加GCN4pII序列，针对NA蛋白添加VASP序列；
11.编码如权利要求1～10任一项所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原的基因。
12.如权利要求11所述的基因，其特征在于，所述基因的序列如SEQ ID No:7所示。
13.包含如权利要求11或12所述基因的载体。
14.如权利要求13所述的载体，其特征在于，所述载体是将如权利要求11或12所述基因连接到表达质粒中得到。
15.包含如权利要求11或12所述的基因或如权利要求13或14所述的载体的细胞。
16.如权利要求15所述的细胞，其特征在于，所述细胞为将基因或载体转入大肠杆菌宿主细胞中得到。
17.一种如权利要求1～10任一项所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原在制备季节性甲型流感通用疫苗中的应用。
18.一种疫苗制剂，其特征在于，所述疫苗制剂包含如权利要求1～10任一项所述的季节性甲型流感通用Mosaic重组抗原、如权利要求11或12所述的基因、如权利要求13或14所述的载体。
19.如权利要求18所述的疫苗制剂，其特征在于，还包括免疫学和药学上可接受的载体或佐剂。
20.一种如权利要求1819所述的疫苗制剂在制备预防和/或治疗季节性甲型流感药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种季节性甲型流感通用mosaic重组抗原，其特征在于，所述mosaic重组抗原为：
2.如权利要求1所述的季节性甲型流感通用mosaic重组抗原，其特征在于，所述mosaic重组抗原的th细胞表位与流感病毒的天然ha蛋白上的th细胞表位相比，th细胞表位覆盖率大于81％；所述mosaic重组抗原的th细胞表位与流感病毒的天然na蛋白上的th细胞表位相比，th细胞表位覆盖率大于84％。
3.如权利要求2所述的季节性甲型流感通用mosaic重组抗原，其特征在于，所述ha蛋白包括h1蛋白或h3蛋白，所述na蛋白包括n1蛋白或n2蛋白。
4.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用mosaic重组抗原，其特征在于，所述mosaic重组抗原超过81％的th细胞表位的12个氨基酸与流感病毒的天然h1蛋白或h3蛋白上的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
5.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用mosaic重组抗原，其特征在于，所述mosaic重组抗原超过96％的th细胞表位的11个以上氨基酸与流感病毒的天然h1蛋白或h3蛋白上的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
6.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用mosaic重组抗原，其特征在于，所述mosaic重组抗原超过99％的th细胞表位的10个氨基酸与流感病毒的天然h1蛋白或h3蛋白的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
7.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用mosaic重组抗原，其特征在于，所述mosaic重组抗原超过84％的th细胞表位的12个氨基酸与流感病毒的天然n1蛋白或n2蛋白上的th细胞表位的12个氨基酸完全匹配。
8.如权利要求3所述的季节性甲型流感通用mosaic重组抗原，其特征在于，所述mosaic重组抗原超过96％的th细胞表位的11个以上氨基酸与流感病毒的天然n1蛋白或n2蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：舒跃龙，刘雪洁，孙彩军，赵天旖，罗楚铭，
申请(专利权)人：中山大学·深圳，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。