【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体涉及一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有治疗肺损伤作用的药物中的应用。
技术介绍
1、肺是人体唯一的呼吸器官，人体通过肺与外界保持气体的流通和交换，以维持人体的基本生命，对人体体内的水分、温度、酸碱平衡也起到了维持稳定的作用。肺损伤是直接或间接的因素导致肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成的弥漫性肺间质及肺泡水肿，由于多发性损伤的总面积改变和激发反应性改变，可能会导致较严重、甚至危及生命的并发症。
2、干细胞外泌体是膜衍生的纳米级的囊泡，携带着来自间充质干细胞的某些蛋白质、脂质、dna及rna等生物活性物质，可以通过抗炎、抗细胞凋亡、促进细胞再生等共同机制对肺损伤发挥作用。
3、研究表明，间充质干细胞外泌体在急性肺损伤中具有保护作用，通过旁分泌多种细胞因子和生长因子来促进受损肺组织的修复，治疗效果良好，基于此，如何制备一种含干细胞外泌体组合物的药物用于治疗肺损伤成为目前研究的一个方向。
技术实现思路
1、本专利技术首先提供一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有治疗肺损伤作用的药物中的应用，所述组合物能够协同为肺提供所需营养，促进肺部细胞再生，有效治疗肺损伤。
2、本专利技术解决技术问题采用如下技术方案：
3、本专利技术提供一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.25-0.6份脐带间充质干细胞外泌体、4-7份虫草提取物、0.01-0.04份依克多因、0.15
4、优选地，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.4-0.45份脐带间充质干细胞外泌体、5-6份虫草提取物、0.02-0.03份依克多因、0.9-1.1份甘油、0.14-0.16份蜂蜜、0.15-0.2份复合维生素、0.05-0.1份亮氨酸、0.05-0.1份异亮氨酸、0.05-0.1份缬氨酸、0.45-0.55份甘露聚糖肽、0.18-0.23份丙二醇海藻酸钠、0.09-0.14份羧甲基纤维素钠、28-32份去离子水。
5、优选地，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.42份脐带间充质干细胞外泌体、5.5份虫草提取物、0.025份依克多因、1份甘油、0.15份蜂蜜、0.18份复合维生素、0.08份亮氨酸、0.08份异亮氨酸、0.08份缬氨酸、0.5份甘露聚糖肽、0.2份丙二醇海藻酸钠、0.12份羧甲基纤维素钠、30份去离子水。
6、优选地，所述脐带间充质干细胞外泌体的制备方法为：
7、s1、取脐带组织，放入pbs缓冲液中清洗3次，每次10min，去除动静脉得到沃顿胶，将沃尔顿胶剪碎成3-5mm的组织块，用去离子水冲洗15min,再用pbs缓冲液清洗4次，每次5min，得到组织块；
8、s2、将组织块和复合酶溶液按照重量比1:（8-10）混合，反应30-60min，得到第一物料；
9、s3、将第一物料和胶原酶i溶液按照重量比1：（0.2-0.28）混合，反应15-30min，得到第二物料；
10、s4、将第二物料置于800-1200r/min条件下离心10-30min，过0.3μm无菌滤膜，得到细胞沉淀，用pbs缓冲液洗涤3次；
11、s5、用平衡盐缓冲溶液洗涤细胞沉淀3次，再用2倍体积的平衡盐缓冲液重悬细胞，利用密度梯度离心法纯化细胞悬液，得到脐带间充质元代干细胞；
12、s6、将脐带间充质元代干细胞以1×10个/ml的密度接种至培养基中，放置于培养箱中培养3-5d，传代次数控制在p10以内，待细胞融合率达到80-90%时，收集培养液上清液；
13、s7、将培养液上清液于4℃、1200r/min条件下离心10-30min，收集上清液，超滤浓缩去除小分子后，过0.25μm无菌滤膜过滤除菌，得到脐带间充质干细胞外泌体。
14、作为一种优选方案，所述的pbs缓冲液包含1-3wt%的青霉素和2-2.5wt%的硫酸链霉素；所述的复合酶溶液由弹性蛋白酶和中性蛋白酶按照重量比1：（0.25-0.3）组成；所述的培养基为含8-10wt%fbs的dmem培养基；所述的培养箱培养条件为35-39℃、4.5-5.5%co2饱和湿度。
15、优选地，所述虫草提取物的制备方法为：
16、s21、将虫草洗净，干燥，粉碎至50-100目，得到虫草粉末；
17、s22、将虫草粉末加入酶解液中，加热至40-50℃保持1-3h，得到混合液a；
18、s23、往混合液a中加无水乙醇，将混合液溶液配成70-90%乙醇溶液，100-300w、40-50℃超声处理10-30min，得到混合液b;
19、s24、将混合液b在45℃下回流提取1-3h，提取3次后合并提取液，在25℃、9000r/min下离心15min，取上清液，将上清液进行超滤得到滤液；
20、s25、将滤液通入填有大孔树脂的吸附柱中，洗脱速度为1.5-2.5bv/h，用2倍树脂柱体积的去离子水以1-3bv/h、1.5倍树脂柱体积的50wt%乙醇溶液以2-3bv/h的流速冲洗吸附柱，收集乙醇溶液，干燥，即得虫草提取物。
21、作为一种优选方案，所述的虫草粉末与酶解液的重量比为1：（7-12）；所述的酶解液由2-5份纤维素酶、0.8-2份果胶酶、0.5-1.5份十六烷基三甲基溴化铵、0.08-0.15份柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液和15-30份去离子水组成；所述的超滤采用截留分子量为50-100kd的超滤膜；所述的大孔吸附树脂为hpd-100。
22、优选地，所述复合维生素由维生素a、维生素b、维生素c、维生素d按照重量比3:1:2:0.5组成。
23、优选地，所述含干细胞外泌体的组合物的制备方法为：
24、s31、将甘油、复合维生素、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘露聚糖肽、丙二醇海藻酸钠、羧甲基纤维素钠溶于去离子水后，45℃、120-240rmp下搅拌45-75min，使其完全溶解，得到混合物a;
25、s32、将脐带间充质干细胞外泌体、虫草提取物加入到混合物a中，40℃、80-150rmp搅拌10-30min，得到混合物b;
26、s33、将混合物b在37℃下回流1-2h，过滤后浓缩至相对密度为1.5-2.5，冻干得到含干细胞外泌体的组合物。
27、本专利技术还提供了一种含干细胞外泌体的组合物在制备具有治疗肺损伤作用的药物中的应用。
28、本专利技术的有益效果：
29、本专利技术所述的一种含干细胞外泌体的组合物，包含复合维生素、氨基酸等组分，干细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.25-0.6份脐带间充质干细胞外泌体、4-7份虫草提取物、0.01-0.04份依克多因、0.15-1.8份甘油、0.08-0.2份蜂蜜、0.05-0.3份复合维生素、0.03-0.12份亮氨酸、0.03-0.12份异亮氨酸、0.03-0.12份缬氨酸、0.28-0.7份甘露聚糖肽、0.15-0.26份丙二醇海藻酸钠、0.05-0.18份羧甲基纤维素钠、25-35份去离子水。
2.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.4-0.45份脐带间充质干细胞外泌体、5-6份虫草提取物、0.02-0.03份依克多因、0.9-1.1份甘油、0.14-0.16份蜂蜜、0.15-0.2份复合维生素、0.05-0.1份亮氨酸、0.05-0.1份异亮氨酸、0.05-0.1份缬氨酸、0.45-0.55份甘露聚糖肽、0.18-0.23份丙二醇海藻酸钠、0.09-0.14份羧甲基纤维素钠、28-32份去离子水。
3.根据权利要求1
4.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述脐带间充质干细胞外泌体的制备方法为：
5.根据权利要求4所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述的PBS缓冲液包含1-3wt%的青霉素和2-2.5wt%的硫酸链霉素；所述的复合酶溶液由弹性蛋白酶和中性蛋白酶按照重量比1：（0.25-0.3）组成；所述的培养基为含8-10wt%FBS的DMEM培养基；所述的培养箱培养条件为35-39℃、4.5-5.5%CO2饱和湿度。
6.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述的虫草提取物的制备方法为：
7.根据权利要求6所述的一种含干细胞外泌体的组合物，所述的虫草粉末与酶解液的重量比为1：（7-12）；所述的酶解液由2-5份纤维素酶、0.8-2份果胶酶、0.5-1.5份十六烷基三甲基溴化铵、0.08-0.15份柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液和15-30份去离子水组成；所述的超滤采用截留分子量为50-100KD的超滤膜；所述的大孔吸附树脂为HPD-100。
8.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述复合维生素由维生素A、维生素B、维生素C、维生素D按照重量比3:1:2:0.5组成。
9.根据权利要求1所述的含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物的制备方法为：
10.根据权利要求1-9任一项所述的一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有治疗肺损伤作用的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.25-0.6份脐带间充质干细胞外泌体、4-7份虫草提取物、0.01-0.04份依克多因、0.15-1.8份甘油、0.08-0.2份蜂蜜、0.05-0.3份复合维生素、0.03-0.12份亮氨酸、0.03-0.12份异亮氨酸、0.03-0.12份缬氨酸、0.28-0.7份甘露聚糖肽、0.15-0.26份丙二醇海藻酸钠、0.05-0.18份羧甲基纤维素钠、25-35份去离子水。
2.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.4-0.45份脐带间充质干细胞外泌体、5-6份虫草提取物、0.02-0.03份依克多因、0.9-1.1份甘油、0.14-0.16份蜂蜜、0.15-0.2份复合维生素、0.05-0.1份亮氨酸、0.05-0.1份异亮氨酸、0.05-0.1份缬氨酸、0.45-0.55份甘露聚糖肽、0.18-0.23份丙二醇海藻酸钠、0.09-0.14份羧甲基纤维素钠、28-32份去离子水。
3.根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：0.42份脐带间充质干细胞外泌体、5.5份虫草提取物、0.025份依克多因、1份甘油、0.15份蜂蜜、0.18份复合维生素、0.08份亮氨酸、0.08份异亮氨酸、0.08份缬氨酸、0.5份甘露聚糖肽、0.2份丙二醇海藻酸钠、0.12份羧甲基纤维素钠、30份去离子...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈忠平，
申请(专利权)人：朗姿赛尔生物科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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