一种提高干细胞活性的培育方法技术

本发明专利技术公开了一种提高干细胞活性的培育方法，涉及干细胞活性领域，针对目前临床使用的干细胞，由于其细胞活性较低，进而对临床的研究造成阻碍的问题，现提出如下方案，其包括培养基、间充质干细胞与填充剂，所述填充剂包括胶原蛋白与透明质酸，所述培养基包括培养基干粉、谷氨酰胺、4

【技术实现步骤摘要】
一种提高干细胞活性的培育方法


[0001]本专利技术涉及干细胞活性领域，尤其涉及一种提高干细胞活性的培育方法。

技术介绍

[0002]干细胞是一类具有无限的或者永生的自我更新能力的细胞、能够产生至少一种类型的、高度分化的子代细胞，目前临床干细胞在使用过程中，现有的干细胞活性较低，进而导致干细胞使用效果降低，同时影响临床效果，因此在使用时存在一定的弊端。
[0003]针对目前临床使用的干细胞，由于其细胞活性较低，进而对临床的研究造成阻碍，无法使得临床效果达到预期理想的问题，我们提出一种提高干细胞活性的培育方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术提出的一种提高干细胞活性的培育方法，解决了目前临床使用的干细胞，由于其细胞活性较低，进而对临床的研究造成阻碍，无法使得临床效果达到预期理想的问题。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]一种提高干细胞活性的培育方法，包括培养基、间充质干细胞与填充剂，所述填充剂包括胶原蛋白与透明质酸，所述培养基包括培养基干粉、谷氨酰胺、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、碳酸氢钠与水，其称重比例如下：培养基干粉10份，谷氨酰胺1份，4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸0.8份、碳酸氢钠1.4份，余量为水。
[0007]优选的，所述间充质干细胞的密度为3*106‑
8*106个/ML。
[0008]优选的，所述间充质干细胞的培养方法，包括如下步骤：
[0009]S1：取出培养皿，并对培养皿进行灭菌，同时向培养基的内部添加适量的生理盐水，与此同时，取出需要培养的间充质干细胞，首先将间充质干细胞放入恒温水浴箱的内部进行水浴结冻，从而使得间充质干细胞回复活力，再将结冻完毕的间充质干细胞移动至培养皿的内部；
[0010]S2：通过贴壁培养的方式对间充质干细胞进行培养，且保持间充质干细胞的密度为：1*104‑
10*104个/CM2；
[0011]S3：此时将培养完毕的间充质干细胞放置在水浴恒温箱的内部，保持水浴恒温箱的温度为37摄氏度。
[0012]优选的，上述步骤S1中所述的灭菌为通过紫外线进行照射，且照射时间为30分钟。
[0013]优选的，所述透明质酸通过D
‑
葡萄糖醛酸与N
‑
乙酰葡糖胺混合制备，所述填充剂通过透明质酸与胶原蛋白混合制备。
[0014]优选的，包括如下步骤：
[0015]S1：按照上述步骤称重填充剂、间充质干细胞与培养基，并将D
‑
葡萄糖醛酸与N
‑
乙酰葡糖胺混合搅拌，同时对其加热，使其融合在以及，将D
‑
葡萄糖醛酸与N
‑
乙酰葡糖胺融合制备成透明质酸，此时向透明质酸的内部添加适量的胶原蛋白，并对混合物进行搅拌，进而
制备上述所需的填充剂；
[0016]S2：首先取出一组六孔板，并向其内部添加基质液，同时轻微的摇晃六孔板，使得基质液均匀的覆盖多孔板，此时将多孔板放入培养箱中进行恒温孵育，孵育温度保持37摄氏度，孵育时间为1
‑
3小时，培养箱为二氧化碳培养箱；
[0017]S3：孵育完毕后，取出六孔板，并将其放置在工作台静置半小时，同时取出干细胞，将其放置在工作台进行静置平衡，平衡时间为一小时，同时静置条件为避光平衡；
[0018]S4：此时向六孔板的内部均与滴入干细胞消化液，使得干细胞消化液均匀的覆盖六孔板的底部，并将六孔板放置在培养箱中进行培养，培养时间为五分钟，培养箱为二氧化碳培养箱；
[0019]S5：取出培养后的六孔板，并将将静置平衡后的干细胞均匀的移动至六孔板的内部，同时将六孔板放入恒温水浴箱的内部，水浴箱的温度保持在37摄氏度，通过消化液进行消化处理，消化时间为四分钟；
[0020]S6：取下六孔板，将六孔板内部多余的消化液通过吹打的方式去除；
[0021]S7：向六孔板的内部添加制备完成的填充剂、间充质干细胞以及培养基，通过混合液对干细胞进行培养，并将六孔板放入二氧化碳恒温培养箱的内部进行恒温培养，温度为37摄氏度，时间为24小时；
[0022]S8：取出六孔板，观察六孔板内部干细胞的贴壁情况以及干细胞的活性，并对其进行换液，换液完毕后，重复上述步骤S6。
[0023]优选的，上述步骤S3中所述的工作台，通过紫外线照明灯照明杀菌，照明时间为一小时。
[0024]优选的，上述步骤S4中所述的干细胞消化液用于促进干细胞生长与消化。
[0025]优选的，上述步骤S6中所述的吹打方式采用移液枪扇形吹打的方式去除培养基。
[0026]优选的，上述步骤S8中所述的换液时间间隔为24小时。
[0027]本专利技术的有益效果为：
[0028]1、本专利技术内部设置的培养基配合填充剂便于增加干细胞的活性，同时便于干细胞的生长。
[0029]2、本专利技术内部设置的间充质干细胞便于增加干细胞的活性，同时便于干细胞的生长以及培育。
[0030]综上所述，本专利技术内部设置的间充质干细胞便于增加干细胞生长培育的同时，还可增加干细胞的活性，同时本专利技术内部设置的填充剂以及培养基便于辅助间充质干细胞增加干细胞的活性。
具体实施方式
[0031]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0032]一种提高干细胞活性的培育方法，包括培养基、间充质干细胞与填充剂，填充剂包括胶原蛋白与透明质酸，培养基包括培养基干粉、谷氨酰胺、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、碳酸氢钠与水，其称重比例如下：培养基干粉10份，谷氨酰胺1份，4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸0.8份、碳酸氢钠1.4份，余量为水。
[0033]间充质干细胞的密度为3*106‑
8*106个/ML。
[0034]间充质干细胞的培养方法，包括如下步骤：
[0035]S1：取出培养皿，并对培养皿进行灭菌，同时向培养基的内部添加适量的生理盐水，与此同时，取出需要培养的间充质干细胞，首先将间充质干细胞放入恒温水浴箱的内部进行水浴结冻，从而使得间充质干细胞回复活力，再将结冻完毕的间充质干细胞移动至培养皿的内部；步骤S1中的灭菌为通过紫外线进行照射，且照射时间为30分钟，透明质酸通过D
‑
葡萄糖醛酸与N
‑
乙酰葡糖胺混合制备，填充剂通过透明质酸与胶原蛋白混合制备。
[0036]S2：通过贴壁培养的方式对间充质干细胞进行培养，且保持间充质干细胞的密度为：1*104‑
10*104个/CM2；
[0037]S3：此时将培养完毕的间充质干细胞放置在水浴恒温箱的内部，保持水浴恒温箱的温度为37摄氏度。
[0038]一种提高干细胞活性的培育方法，包括如下步骤：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高干细胞活性的培育方法，包括培养基、间充质干细胞与填充剂，其特征在于，所述填充剂包括胶原蛋白与透明质酸，所述培养基包括培养基干粉、谷氨酰胺、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、碳酸氢钠与水，其称重比例如下：培养基干粉10份，谷氨酰胺1份，4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸0.8份、碳酸氢钠1.4份，余量为水。2.根据权利要求1所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，所述间充质干细胞的密度为3*106‑
8*106个/ML。3.根据权利要求1所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，所述间充质干细胞的培养方法，包括如下步骤：S1：取出培养皿，并对培养皿进行灭菌，同时向培养基的内部添加适量的生理盐水，与此同时，取出需要培养的间充质干细胞，首先将间充质干细胞放入恒温水浴箱的内部进行水浴结冻，从而使得间充质干细胞回复活力，再将结冻完毕的间充质干细胞移动至培养皿的内部；S2：通过贴壁培养的方式对间充质干细胞进行培养，且保持间充质干细胞的密度为：1*104‑
10*104个/CM2；S3：此时将培养完毕的间充质干细胞放置在水浴恒温箱的内部，保持水浴恒温箱的温度为37摄氏度。4.根据权利要求3所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，上述步骤S1中所述的灭菌为通过紫外线进行照射，且照射时间为30分钟。5.根据权利要求1所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，所述透明质酸通过D
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葡萄糖醛酸与N
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乙酰葡糖胺混合制备，所述填充剂通过透明质酸与胶原蛋白混合制备。6.根据权利要求1所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：按照上述步骤称重填充剂、间充质干细胞与培养基，并将D
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葡萄糖醛酸与N
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乙酰葡糖胺混合搅拌，同时对其加热，使其融合在以及，将D
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葡萄糖醛酸与N
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈忠平，
申请(专利权)人：朗姿赛尔生物科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：