【技术实现步骤摘要】
一种人脐带源间充质干细胞冻干粉的制备与鉴定方法
[0001]本专利技术涉及人脐带源间充质干细胞的制备
，尤其涉及一种人脐带源间充质干细胞冻干粉的制备与鉴定方法。
技术介绍
[0002]干细胞是一类具有高度自我增殖能力和多向分化潜能的细胞，在一定条件下可以分化为多种细胞与组织，同时还具有免疫调节、再生修复受损细胞与组织的生物学功能。目前科学研究与临床应用中使用最多的是间充质干细胞，间充质干细胞的主要来源有骨髓、围产期胎儿组织（主要为脐带血和脐带组织）、牙髓组织、脂肪组织，其中脐带来源的间充质干细胞由于来源容易获得，对供体基本无伤害，成为干细胞研究与治疗中的理想细胞。
[0003]但是目前人脐带来源的间充质干细胞制备技术并无统一标准，不同实验室制备的细胞质量各异，不利于细胞产品的规模化应用；另外间充质干细胞的保存方式主要为
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196℃液氮，需要特别的装置，不利于细胞的远距离运输与储存。与传统的
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196℃液氮储存相比，将间充质干细胞通过冷冻干燥的方法制备成冻干粉，且复溶后细胞生物...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种人脐带源间充质干细胞冻干粉的制备与鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：A1：选取健康产妇顺产分娩的足月产儿采集脐带血标本；A2：对采集的脐带血标本进行病原体检测；A3：选取健康产妇顺产分娩足月产儿采集脐带样本；A4：从采集的脐带中分离间充质干细胞；A5：对分离的人脐带源间充质干细胞进行培养；A6: 用流式细胞仪对分离培养的人脐带源间充质干细胞进行鉴定；A7: 取培养至P3代的人脐带源间充质干细胞进行冷冻干燥：A8: 取经过冷冻干燥的人脐带源间充质干细胞进行外观鉴定；A9: 取冷冻干燥的人脐带源间充质干细胞进行复溶；A10：用流式细胞仪对复溶后的人脐带源间充质干细胞进行表面标志物鉴定。2.根据权利要求1所述一种人脐带源间充质干细胞冻干粉的制备与鉴定方法，其特征在于，所述A1中选取健康产妇顺产分娩的足月产儿脐带血采集：距胎儿5
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7cm的脐带处进行双结扎，然后剪断脐带，用75%浓度的医用酒精消毒母侧脐带断端，穿刺脐静脉抽取30
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50ml脐血于EDTA抗凝管中。3.根据权利要求1所述一种人脐带源间充质干细胞冻干粉的制备与鉴定方法，其特征在于A2中对采集的脐血进行病原体分析，内容包括：乙肝病毒DNA、丙肝病毒RNA、人类疫缺陷病毒RNA、巨细胞病毒DNA和梅毒螺旋体DNA和细菌、热源。4.根据权利要求1中一种人脐带源间充质干细胞冻干粉的制备与鉴定方法，其特征在于所述A3选取健康产妇顺产分娩足月产儿脐带样本采集：胎儿娩出后5分钟内断脐，选取中间段8cm左右放入细胞培养皿，细胞培养皿中预先加入经37℃水浴预热20分钟的无血清培养基，无血清培养基以赛默飞公司STEMPRO hMSC SFM培养基为基础培养基，加入浓度为10
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20ng/ml的转化生长因子
ß
,10
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20 ng/ml肝细胞生长因子, 20
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30 ng/ml的Ⅰ型胶原蛋白，20
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30 ng/ml的Ⅱ型胶原蛋白制成。5.根据权利要求1所述一种人脐带源间充质干细胞冻干粉的制备与鉴定方法，其特征在于A4所述，从采集的脐带标本中分离间充质干细胞：用含有0.1%青霉素和0.1%链霉素的无血清培养基(以赛默飞公司STEMPRO hMSC SFM培养基为基础培养基，加入浓度为10
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20ng/ml的转化生长因子
ß
,10
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20 ng/ml肝细胞生长因子, 20
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30 ng/ml的Ⅰ型胶原蛋白，20
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30 ng/ml的Ⅱ型胶原蛋白制成)洗涤除去残存血，去除外包膜与脐动静脉血管，用经外科消毒的眼科剪将剩余组织剪碎至1mm3大小，转入6孔细胞培养板，培养板每孔预先加入37℃水浴预热20分钟的上述无血清培养基5ml，每孔用上述无血清培养基补足至10ml。6.根据权利要求1所述一种人脐带源间充质干细胞冻干粉的制备与鉴定方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄宇东，陈震球，
申请(专利权)人：广东瑞昊生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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