一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，步骤如下：S1、将脂肪间充质干细胞接种到含DMEM/F12、15％FBS、0.1％PS的培养基中；S2、向传代细胞中加入消化酶，消化3

【技术实现步骤摘要】
一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，尤其是涉及一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方法。

技术介绍

[0002]脂肪间充质干细胞(adipose
‑
derivedmesenchymalstemcells，ADSCs)是存在于脂肪组织中的一类具有多向分化潜能的成体干细胞，具有相似于骨髓间充质干细胞的生物学特性，具有自我更新、旁分泌、免疫调控等能力。在体外操作中，ADSCs具有来源广泛、侵入性小、获取方便的特点，体外分离容易，且纯度高。还可通过原位注射与静脉注射的方式进行自体或异体移植，进入体内后可自行靶向归巢、参与组织重建，且抗免疫排斥反应，是进行组织器官修复的理想种子细胞，也是医疗美容中目前应用最广的细胞产品。
[0003]现有技术中，通常采用一步法自体脂肪干细胞丰胸的方法，通过采集自体脂肪细胞分离培养脂肪干细胞，将培养的脂肪干细胞加入脐带间充质干细胞以及再次采集自体脂肪细胞混合，再加入生长因子与转换因子，混合均匀后过滤弃滤渣，取清亮滤液注入乳房的不同位置，从而达到丰胸效果。
[0004]然而，移植后自体脂肪干细胞进入体内后，其成脂分化进程慢、增殖能力低、特异性基因表达水平低、脂肪酸代谢程度低。因此，专利技术一种提高脂肪间充质干细胞成脂分化能力、促进脂肪酸代谢的脂肪间充质干细胞培养方法对于干细胞培养
十分重要。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，增强脂肪间充质干细胞的成脂分化能力，提高细胞增殖速度，促进细胞的脂肪酸代谢。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种棕榈油酸在脂肪间充质干细胞培养方法中的应用。
[0007]一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，步骤如下：
[0008]S1、取培养至1
‑
3代的脂肪间充质干细胞，接种到培养基中；
[0009]S2、向传代细胞中，加入消化酶，消化3
‑
5min，收集细胞，离心，弃上清，按1:3的传代比例将干细胞接种到新的培养皿或孔板中；
[0010]S3、将100mg棕榈油酸溶于DMSO中，制成0.5mol/L的浓储液，再加入到含DMEM/F12、15％FBS、0.1％PS的培养基中，制成棕榈油酸条件培养液；
[0011]S4、预处理：取3
‑
5代的传代细胞，接种至棕榈油酸条件培养液中，培养1
‑
5代；
[0012]S5、诱导成脂分化：添加成脂诱导剂至已接种预处理传代细胞的培养液中，每隔48h换一次培养液，继续培养1
‑
5代。
[0013]优选的，步骤S1中，所述培养基所含成分为DMEM/F12、15％FBS、0.1％PS。
[0014]优选的，步骤S2中，所述传代细胞为汇合度达到85
‑
90％的细胞；所述消化酶为0.25％的胰酶；所述离心速率为1500rpm，离心时间为5min。
[0015]优选的，步骤S3中，所述棕榈油酸条件培养液的浓度为0.01
‑
1mmol/L。
[0016]优选的，步骤S5中，所述成脂诱导剂的成分为10ng/mL胰岛素、1nmol/L地塞米松、0.25mmol/LIBMX、0.2mmol/L吲哚美辛；所述培养液所含成分为DMEM、3％FBS、0.1％PS；培养4天后，所述成脂诱导剂中不再添加IBMX和吲哚美辛。
[0017]因此，本专利技术采用上述一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，具有提高脂肪间充质干细胞的增值能力和成脂分化能力的特点，能促进脂肪酸代谢，从而加快成脂分化进程。
[0018]下面通过附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
[0019]图1是实验测试一中经不同浓度棕榈油酸条件培养液预处理后的细胞生长曲线图(A)和群体倍增时间图(B)；
[0020]图2是实验测试一中经0.1mmol/L棕榈油酸条件培养液预处理1代(B)与5代(C)后的细胞相差图；
[0021]图3是实验测试一中经0.1mmol/L棕榈油酸条件培养液预处理1代与5代后的细胞表面标记分子(A、C)与多能因子(B、D)的表达情况图；
[0022]图4是实验测试一中经0.1mmol/L棕榈油酸条件培养液预处理1代(A
‑
C)与5代(D
‑
F)后的细胞的脂肪酸相关基因表达情况图；
[0023]图5是实验测试一中经0.1mmol/L棕榈油酸条件培养液预处理1代(B)与5代(C)并进行成脂诱导分化后的细胞油红O染色图；
[0024]图6是实验测试一中经0.1mmol/L棕榈油酸条件培养液预处理1代(A)与5代(B)并进行成脂诱导分化后的细胞中甘油三酯含量图；
[0025]图7是实验测试一中经0.1mmol/L棕榈油酸条件培养液预处理1代(A)与5代(B)并进行成脂诱导分化后的脂肪细胞特异性基因表达情况图；
[0026]图8是实验测试二中经不同浓度棕榈油酸条件培养液预处理后的细胞生长曲线图(A)和群体倍增时间图(B)；
[0027]图9是实验测试二中经0.1mmol/L棕榈油酸条件培养液预处理1代后的细胞表面标记分子(A)与多能因子(B)的表达情况图；
[0028]图10是实验测试二中经0.1mmol/L棕榈油酸条件培养液预处理1代后的细胞脂肪酸相关基因表达情况图。
具体实施方式
[0029]以下通过附图和实施例对本专利技术的技术方案作进一步说明。
[0030]实施例一
[0031]一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，步骤如下：
[0032]S1、取培养至1
‑
3代的脂肪间充质干细胞，接种到含DMEM/F12、15％FBS、0.1％PS的培养基中；
[0033]S2、向汇合度达到85
‑
90％的传代细胞中，加入0.25％胰酶，消化3
‑
5min，收集细胞，1500rpm，离心5min，弃上清，按1:3的传代比例将干细胞接种到新的培养皿或孔板中；
[0034]S3、将100mg棕榈油酸溶于DMSO中，制成0.5mol/L的浓储液，再加入到含DMEM/F12、15％FBS、0.1％PS的培养基中，制成0.01mmol/L棕榈油酸条件培养液；
[0035]S4、预处理：取3
‑
5代的传代细胞，接种至棕榈油酸条件培养液中，培养1
‑
5代；
[0036]S5、诱导成脂分化：添加成脂诱导剂至已接种预处理传代细胞的培养液中，其中，成脂诱导剂的成分为10ng/mL胰岛素、1nmol/L地塞米松、0.25mmol/LIBMX、0.2mmol/L吲哚美辛，培养液的成分为DMEM、3％FBS、0.1％PS，每隔48h换一次培养液，培养4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种棕榈油酸在脂肪间充质干细胞培养方法中的应用。2.一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，其特征在于，步骤如下：S1、取培养至1
‑
3代的脂肪间充质干细胞，接种到培养基中；S2、向传代细胞中，加入消化酶，消化3
‑
5min，收集细胞，离心，弃上清，按1:3的传代比例将干细胞接种到新的培养皿或孔板中；S3、将100mg棕榈油酸溶于DMSO中，制成0.5mol/L的浓储液，再加入到含DMEM/F12、15％FBS、0.1％PS的培养基中，制成棕榈油酸条件培养液；S4、预处理：取3
‑
5代的传代细胞，接种至棕榈油酸条件培养液中，培养1
‑
5代；S5、诱导成脂分化：添加成脂诱导剂至已接种预处理传代细胞的培养液中，每隔48h换一次培养液，继续培养1
‑
5代。3.根据权利要求1所述的一种利用棕榈油酸培养脂肪间充质干细胞的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵峻岭，岳永莉，李雪玲，郝瑞峰，黄新朋，
申请(专利权)人：内蒙古大学，
类型：发明
国别省市：