一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有治疗肝损伤作用的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有治疗肝损伤作用的药物中的应用，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：

【技术实现步骤摘要】
一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有治疗肝损伤作用的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有治疗肝损伤作用的药物中的应用
。

技术介绍

[0002]肝脏是人体五大重要器官之一，在人体新陈代谢中起着关键作用
。
病毒感染
、
药物中毒
、
脂质沉积和自身免疫反应各种肝毒性因可导致肝损伤，持续的肝损伤会导致细胞外基质过度累积，从而失去正常结构，进展成肝纤维化
。
[0003]干细胞外泌体是膜衍生的纳米级的囊泡，具有减少细胞凋亡
、
减轻炎症反应和提高组织修复等重要生物学功能，可以通过改变细胞外基质，改变受体细胞的转录组和蛋白质组，来调节细胞凋亡
、
生长
、
增值和分化途径，从而延缓肝脏疾病的发生发展
。
[0004]研究表明，外泌体对肝损伤的治疗相较于细胞移植治疗而言，更具有安全性，治疗效果良好，基于此，如何制备一种含干细胞外泌体组合物的药物成为目前研究的一个方向
。

技术实现思路

[0005]本专利技术首先提供一种含干细胞外泌体的组合物及其在制备具有治疗肝损伤作用的药物中的应用，所述组合物能够协同为肝脏提供所需营养，促进肝细胞再生，有效治疗肝损伤
。
[0006]本专利技术解决技术问题采用如下技术方案：本专利技术提供一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：
0.1
‑
0.5
份脐带间充质干细胞外泌体
、3
‑6份葛根提取物
、0.2
‑1份蜂蜜
、0.06
‑
0.32
份复合维生素
、0.3
‑
0.7
份橄榄油
、0.08
‑
0.2
份淀粉
、0.03
‑
0.15
份谷氨酸
、0.03
‑
0.15
份半胱氨酸
、0.03
‑
0.15
份甘氨酸
、0.05
‑
0.35
份葡萄糖醛酸内酯
、0.05
‑
0.18
份羧甲基纤维素钠
、22
‑
37
份去离子水
。
[0007]优选地，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：
0.2
‑
0.4
份脐带间充质干细胞外泌体
、4
‑5份葛根提取物
、0.4
‑
0.8
份蜂蜜
、0.18
‑
21
份复合维生素
、0.4
‑
0.6
份橄榄油
、0.12
‑
0.16
份淀粉
、0.07
‑
0.11
份谷氨酸
、0.07
‑
0.11
份半胱氨酸
、0.07
‑
0.11
份甘氨酸
、0.17
‑
0.23
份葡萄糖醛酸内酯
、0.09
‑
0.14
份羧甲基纤维素钠
、27
‑
32
份去离子水
。
[0008]优选地，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：
0.3
份脐带间充质干细胞外泌体
、4
份葛根提取物
、0.6
份蜂蜜
、0.2
份复合维生素
、0.5
份橄榄油
、0.14
份淀粉
、0.09
份谷氨酸
、0.09
份半胱氨酸
、0.09
份甘氨酸
、0.21
份葡萄糖醛酸内酯
、0.12
份羧甲基纤维素钠
、29
份去离子水
。
[0009]优选地，所述脐带间充质干细胞外泌体的制备方法为：
S1、
取脐带组织，放入
PBS
缓冲液中清洗3次，每次8‑
10min
，去除动静脉得到沃顿胶，将沃尔顿胶剪碎成4‑
6mm
的组织块，用去离子水冲洗
15
‑
30min,
再用
PBS
缓冲液清洗5次，
每次5‑
8min
，得到组织块；
S2、
将组织块
、
胶原酶
I
溶液按照重量比1：（
0.2
‑
0.28
）混合，反应
15
‑
30min
，得到混合料；
S3、
将混合料置于
800
‑
1200r/min
条件下离心
20
‑
30min
，过
0.4
μ
m
无菌滤膜，得到细胞沉淀，用
PBS
缓冲液洗涤3次；
S4、
用平衡盐缓冲溶液洗涤细胞沉淀3次，再用2倍体积的平衡盐缓冲液重悬细胞，利用密度梯度离心法纯化细胞悬液，得到脐带间充质元代干细胞；
S5、
将脐带间充质元代干细胞以1×
10
个
/ml
的密度接种至培养基中，放置于培养箱中培养2‑
4d
，传代次数控制在
P10
以内，待细胞融合率达到
80
‑
90%
时，收集培养液上清液，即第一清液；
S6、
将第一清液于
4℃、1800r/min
条件下离心
10
‑
30min
，收集上清液，超滤浓缩去除小分子后，过
0.3
μ
m
无菌滤膜过滤除菌，得到脐带间充质细胞沉淀；
S7、
将脐带间充质细胞沉淀用
PBS
缓冲液洗涤3次，以1×
10
个
/ml
的密度接种至无血清培养基中，放置于培养箱中培养
42
‑
48h
，收集培养液上清液，即第二清液；
S8、
将第二清液移至质量浓度为
30%
蔗糖重水密度垫上在
4℃
下，
80000
‑
160000g
密度梯度离心
120min
，收集底部缓冲垫；
S9、
将底部缓冲垫经
PBS
溶液洗涤3次后，超滤浓缩去除小分子后，过
0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：
0.1
‑
0.5
份脐带间充质干细胞外泌体
、3
‑6份葛根提取物
、0.2
‑1份蜂蜜
、0.06
‑
0.32
份复合维生素
、0.3
‑
0.7
份橄榄油
、0.08
‑
0.2
份淀粉
、0.03
‑
0.15
份谷氨酸
、0.03
‑
0.15
份半胱氨酸
、0.03
‑
0.15
份甘氨酸
、0.05
‑
0.35
份葡萄糖醛酸内酯
、0.05
‑
0.18
份羧甲基纤维素钠
、22
‑
37
份去离子水
。2.
根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：
0.2
‑
0.4
份脐带间充质干细胞外泌体
、4
‑5份葛根提取物
、0.4
‑
0.8
份蜂蜜
、0.18
‑
21
份复合维生素
、0.4
‑
0.6
份橄榄油
、0.12
‑
0.16
份淀粉
、0.07
‑
0.11
份谷氨酸
、0.07
‑
0.11
份半胱氨酸
、0.07
‑
0.11
份甘氨酸
、0.17
‑
0.23
份葡萄糖醛酸内酯
、0.09
‑
0.14
份羧甲基纤维素钠
、27
‑
32
份去离子水
。3.
根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述含干细胞外泌体的组合物按重量份计包括：
0.3
份脐带间充质干细胞外泌体
、4
份葛根提取物
、0.6
份蜂蜜
、0.2
份复合维生素
、0.5
份橄榄油
、0.14
份淀粉
、0.09
份谷氨酸
、0.09
份半胱氨酸
、0.09
份甘氨酸
、0.21
份葡萄糖醛酸内酯
、0.12
份羧甲基纤维素钠
、29
份去离子水
。4.
根据权利要求1所述的一种含干细胞外泌体的组合物，其特征在于，所述脐带间充质干细胞外泌体的制备方法为：
S1、
取脐带组织，放入
PBS
缓冲液中清洗3次，每次8‑
10min
，去除动静脉得到沃顿胶，将沃尔顿胶剪碎成4‑
6mm
的组织块，用去离子水冲洗
15
‑
30min,
再用
PBS
缓冲液清洗5次，每次5‑
8min
，得到组织块；
S2、
将组织块
、
胶原酶
I
溶液按照重量比1：（
0.2
‑
0.28
）混合，反应
15
‑
30min
，得到混合料；
S3、
将混合料置于
800
‑
1200r/min
条件下离心
20
‑
30min
，过
0.4
μ
m
无菌滤膜，得到细胞沉淀，用
PBS
缓冲液洗涤3次；
S4、
用平衡盐缓冲溶液洗涤细胞沉淀3次，再用2倍体积的平衡盐缓冲液重悬细胞，利用密度梯度离心法纯化细胞悬液，得到脐带间充质元代干细胞；
S5、
将脐带间充质元代干细胞以1×
10
个
/ml
的密度接种至培养基中，放置于培养箱中培养2‑
4d
，传代次数控制在
P10
以内，待细胞融合率达到
80
‑
90%
时，收集培养液上清液，即第一清液；
S6、
将第一清液于
4℃、1800r/min
条件下离心
10
‑
30min
，收集上清液，超滤浓缩去除小分子后，过
0.3
μ
m
无菌滤膜过滤除菌，得到脐带间充质细胞沉淀；
S7、
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈忠平，
申请(专利权)人：朗姿赛尔生物科技广州有限公司，
类型：发明
国别省市：