【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体工程，具体涉及一种鸡源抗人tk1重组全长单克隆igy抗体及其应用。
技术介绍
1、胸苷激酶1（tk1）是嘧啶补救途径的一种激酶，在镁离子和atp参与下，它催化脱氧胸苷（dt）转化为脱氧胸苷单磷酸（dtmp），参与细胞周期s期dna的合成，是细胞周期调控的关键酶。正常成人细胞中tk1含量极低（<2pmol/l），只有细胞过度增殖的情况下tk1浓度才会升高释放至体液，导致血清胸苷激酶1（serumthymidinekinase1，stk1）水平增加。tk1是在细胞周期中参与dna合成的关键酶，与细胞增殖速度密切相关。tk1在无任何肿瘤疾病的正常健康个体血清中含量极低，但在肿瘤患者细胞异常增殖下，血清和组织中tk1均易被检测到。tk1的升高与恶性肿瘤患者肿瘤细胞增殖速度有显著相关性，是一个公认的评估肿瘤细胞增殖度的精准生物标志物，用于不同类型恶性肿瘤的早期风险筛查、手术、放化疗治疗效果评估、肿瘤复发风险预测等。
2、目前市面上已有一系列小鼠抗人tk1 igg单克隆抗体（mab），例如瑞典arocell公司（www.arocell.com），以及兔源抗人tk1重组单克隆抗体，例如美国abcam公司（https：//www.abcam.com）。但是，这些抗体在血清学tk1检测上，大部分仅用于科学研究，缺乏血清学大规模临床检测性能验证。利用这些mab，通过血清学tk1水平可以评估癌症患者治疗效果，但由于这些mab特异性和灵敏度尚差，不能作为健康体检筛查中早期肿瘤的发现和风险进程评估，也不适用于肿瘤患者的
3、华瑞同康生物技术（深圳）有限公司开发的商用型增强免疫点印迹化学发光法（ecl-dotblot）是采用人tk1的c端肽（195-225），开发的鸡抗人tk1-igy多克隆抗体（tk1-igy-pabs），已成功地用于检测人血清中胸苷激酶1蛋白浓度（stk1p），在临床肿瘤和体检筛查的应用实践已超过15年，验证了tk1-igy-pabs不仅作为评估肿瘤患者转归和预后的可信性精准靶标，也可用于肿瘤患者预后和复发风险和生存效果的评估，尤其特别的是，可用于早期肿瘤进程的风险预警评估。基于2005-2016年在我国的四个独立的常规健康检查中心的160,086名体检者的数据，采用tk1-igy-pabs检测的stk1p高值可以在出现影像学异常之前，提示良、恶性肿瘤风险程度，即低风险或高风险人群，适用于不同的职业和群体，特别是在癌症高发地域，进行肿瘤早期风险筛查和健康管理有重要的价值，如接触致癌化学品的行业等，实现“肿瘤早筛查，早预防，早发现、早治疗”的目标。
4、对于上一代产品，由于接受免疫的母鸡的个体差异和生活环境，需要定期检测每个母鸡是否产生稳定性高、特异性好和灵敏度高的抗体，以控制每个生产批号抗体的检测性能。这些控制工作不但需要有精细的制备工艺和经验丰富的技术人员，同时耗费时间周期长，费用投入高。因此，基于上一代传统免疫母鸡获取igy多克隆抗体产品，急需进一步改进。
技术实现思路
1、为了提高抗体批间的稳定性，本申请提供一种鸡源抗人tk1重组全长单克隆igy抗体及其应用。
2、第一方面，本申请提供一种鸡源抗人tk1重组igy单链抗体，所述单链抗体由重链、连接肽和轻链构成，所述重链包括第一重链可变区域、第二重链可变区域和第三重链可变区域，所述单链抗体的轻链包括第一轻链可变区域、第二轻链可变区域和第三轻链可变区域；所述第一重链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：1至seqid no：3中的一种，所述第二重链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：4至seqid no：6中的一种，所述第三重链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：7至seqid no：9中的一种；所述第一轻链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：10至seqid no：14中的一种，所述第二轻链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：15至seqid no：19中的一种，所述第三轻链可变区域的氨基酸序列选自seqidno：20至seqid no：23中的一种
3、优选的，同一所述单链抗体的可变区域由重链的seqid no：1、seqid no：4、seqidno：7和轻链的seqid no：10、seqid no：15、seqid no：20组成，或者由重链的seqid no：2、seqid no：5、seqid no：8和轻链的seqid no：11、seqid no：16、seqid no：21组成，或者由重链的seqid no：1、seqid no：4、seqid no：7和轻链的seqid no：12、seqid no：17、seqid no：20组成，或者由重链的seqid no：3、seqid no：6、seqid no：9和轻链的seqid no：13、seqidno：18、seqid no：22组成，或者由重链的seqid no：2、seqid no：5、seqid no：8和轻链的seqid no：14、seqid no：19、seqid no：23组成。
4、seqid no：1 drgmg；
5、seqid no：2 nhgmg；
6、seqid no：3 rhgmg；
7、seqid no：4 gvddsgssrdyapavkgrat；
8、seqid no：5 ginsgagsytnygaavkgrat；
9、seqid no：6 sinsggsytnygaavqgrat；
10、seqid no：7 gsvvgfida；
11、seqid no：8 svyggsislitdvidt；
12、seqid no：9 dagctgggtcyayadrida；
13、seqid no：10 sgggsyagsyy；
14、seqid no：11 sgganyygsyyyg；
15、seqid no：12 sgggrfagsyyyg
16、seqid no：13 sgssgsyg；
17、seqid no：14 sgsysnyyg；
18、seqid no：15 nnnnrp；
19、seqid no：16 dntkrp；
20、seqid no：17 dstnrp；
21、seqid no：18 yngkrp；
22、seqid no：19 ennnrp；
23、seqid no：20 gsidssyvgi；
24、seqid no：21 gsydssagyag；
25、seqid no：22 gsrdssydgi；
26、seqid no：23 ggyddstdsgi;
27、第二方面，本申请提供一种鸡源抗人tk1重组全长单克本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鸡源抗人TK1重组IgY单链抗体，其特征在于：所述单链抗体由重链、连接肽和轻链构成，所述重链包括第一重链可变区域、第二重链可变区域和第三重链可变区域，所述单链抗体的轻链包括第一轻链可变区域、第二轻链可变区域和第三轻链可变区域；所述第一重链可变区域的氨基酸序列选自SEQID NO：1至SEQID NO：3中的一种，所述第二重链可变区域的氨基酸序列选自SEQID NO：4至SEQID NO：6中的一种，所述第三重链可变区域的氨基酸序列选自SEQID NO：7至SEQID NO：9中的一种；所述第一轻链可变区域的氨基酸序列选自SEQID NO：10至SEQID NO：14中的一种，所述第二轻链可变区域的氨基酸序列选自SEQIDNO：15至SEQID NO：19中的一种，所述第三轻链可变区域的氨基酸序列选自SEQID NO：20至SEQID NO：23中的一种。
2.根据权利要求1所述的鸡源抗人TK1重组IgY单链抗体，其特征在于：同一所述单链抗体的可变区域由重链的SEQID NO：1、SEQID NO：4、SEQID NO：7和轻链的SEQID NO：10、SEQI
3.一种鸡源抗人TK1重组全长单克隆IgY抗体，其特征在于：包含权利要求1-2任一重链和轻链，共有5种单克隆抗体，分别为SEQID NO：24至SEQID NO：28的氨基酸序列。
4.根据权利要求3所述的优选鸡源抗人TK1重组全长单克隆IgY抗体，其特征在于：所述单克隆抗体的氨基酸序列为SEQID NO：28。
5.一种重组载体，其特征在于：所述重组载体包含编码权利要求1-4所述氨基酸序列的核酸，构建所述重组载体的为PTT5质粒。
6.一种含重组载体的细胞，其特征在于：所述细胞含有权利要求5所述的重组载体，并使用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞构建稳定细胞系。
7.一种检测卡、检测条或检测试剂盒，其特征在于：所述检测卡、检测条或检测试剂盒含有权利要求1-4任一所述的抗体。
8.一种药物，其特征在于：含有权利要求1-4任一所述的抗体。
9.一种鸡源抗人TK1重组IgY抗体的噬菌体抗体展示文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：所述权利要求1-4中任一抗体是通过步骤1）从母鸡脾细胞中分离mRMA、步骤2）PCR反转录、步骤3）PCR重叠获得全长scFv基因、步骤4）拼接浓缩scFv、步骤5）高活性细菌感受态中电转化、步骤6）噬菌体抗体包装以及步骤7）筛选，能够在三周内快速构建大容量噬菌体抗体展示文库；鸡源抗人TK1重组IgY抗体含权利要求1-4任一所述的抗体。
10.根据权利要求9所述的鸡源抗人TK1重组IgY抗体的筛选方法，其特征在于：
11.一种使用鸡源抗人TK1重组IgY抗体的检测方法，其特征在于：应用权利要求1-4任一抗体，通过增强型化学发光（ECL）斑点印迹法或化学发光免疫分析法手动或全自动检测体液（包括血液、尿液、唾液、脑脊液、腔积液等）样本中TK1浓度。
...【技术特征摘要】
1.一种鸡源抗人tk1重组igy单链抗体，其特征在于：所述单链抗体由重链、连接肽和轻链构成，所述重链包括第一重链可变区域、第二重链可变区域和第三重链可变区域，所述单链抗体的轻链包括第一轻链可变区域、第二轻链可变区域和第三轻链可变区域；所述第一重链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：1至seqid no：3中的一种，所述第二重链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：4至seqid no：6中的一种，所述第三重链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：7至seqid no：9中的一种；所述第一轻链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：10至seqid no：14中的一种，所述第二轻链可变区域的氨基酸序列选自seqidno：15至seqid no：19中的一种，所述第三轻链可变区域的氨基酸序列选自seqid no：20至seqid no：23中的一种。
2.根据权利要求1所述的鸡源抗人tk1重组igy单链抗体，其特征在于：同一所述单链抗体的可变区域由重链的seqid no：1、seqid no：4、seqid no：7和轻链的seqid no：10、seqidno：15、seqid no：20组成；或者由重链的seqid no：2、seqid no：5、seqid no：8和轻链的seqid no：11、seqid no：16、seqid no：21组成；或者由重链的seqid no：1、seqid no：4、seqid no：7和轻链的seqid no：12、seqid no：17、seqid no：20组成；或者由重链的seqidno：3、seqid no：6、seqid no：9和轻链的seqid no：13、seqid no：18、seqid no：22组成；或者由重链的seqid no：2、seqid no：5、seqid no：8和轻链的seqid no：14、seqid n...
【专利技术属性】
技术研发人员：黑爱莲，李劲，李珊，艾伦何，斯文斯库格，周际，
申请(专利权)人：华瑞同康生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：
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