鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体及其制药用途制造技术

本发明专利技术涉及鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体和产生该单克隆抗体的SSTK小鼠杂交瘤细胞株057M，以及它们的制药用途。本发明专利技术还涉及相应的核酸、载体、重组细胞、药物组合物和制备抗体的方法。本发明专利技术的单克隆抗体能够与人肿瘤细胞中胸苷激酶1发生免疫应答反应，阻断肿瘤细胞的生存活力，增加肿瘤细胞凋亡率，但不阻断正常细胞的正常生存活力，可用于治疗肿瘤，尤其是胃肿瘤。是胃肿瘤。

【技术实现步骤摘要】
鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体及其制药用途


[0001]本专利技术涉及单克隆抗体领域，尤其是鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体(来源于SSTK小鼠杂交瘤细胞株057M）。该单克隆抗体与人肿瘤细胞结合发生免疫应答反应，阻断肿瘤细胞生存活力，增加肿瘤细胞凋亡率，但不阻断正常细胞生存活力，可用于治疗肿瘤，尤其是胃肿瘤。

技术介绍

[0002]癌症的治疗主要基于手术，放射治疗和化学治疗。手术切除肿瘤，而放疗和/或化疗杀伤肿瘤细胞，导致肿瘤死亡。近年来，已被确立的其他类型的治疗方法有免疫疗法，在过去的10年中，肿瘤免疫学新的理论和认识发展出很多肿瘤治疗的新策略，并运用到临床实践中，将作为最终攻克肿瘤的希望之一，其中包括肿瘤相关抗原的发现和重要研究进展，肿瘤相关抗原作为临床免疫治疗的靶分子的研究进展，例如抗体治疗，主要是单克隆抗体，肿瘤疫苗及其它主动免疫治疗。虽然这些治疗短时间内不会杀死肿瘤细胞，但与放疗和化学疗法比较，确实能够控制肿瘤细胞增殖。它可以通过抑制肿瘤生长，有效地控制肿瘤进展。
[0003]在过去的40年中大量研究证明，抗原与细胞表面受体结合，引发免疫系统生成对应的抗体，从而靶向杀死细胞，因此靶向癌细胞中某个受体的抗体药物，能靶向杀死癌细胞，同时激活免疫应答。单克隆抗体是目前肿瘤免疫治疗中最广泛应用的方法，主要采用大量合成的人造抗体来引发免疫应答，由于并非是自身所产生的抗体，因此从狭义上被认为是被动免疫的一种。不同类型的抗体已经在各种类型的恶性肿瘤患者中进行了测试。目前在乳腺癌和结肠癌治疗方面，利用这种方法研制的新型抗肿瘤药物已经发挥出了越来越重要的作用，例如，使用最广泛的就是用于治疗HER2阳性乳腺癌的trastuzumab (Herceptin)，以及用于治疗某些特殊淋巴瘤和白血病的rituximab (Rituxan)。现抗皮肤癌（人类黑色素瘤）的单克隆抗体显示出可靠的效果，这种药物能阻挡针对黑色素瘤的免疫应答关闭，帮助机体建立长期针对癌症的保护作用。针对宫颈癌的疫苗已经开发出来，现在已经在年轻女性中用于常规使用，预防宫颈癌发生。虽然免疫治疗取得了跨时代的进步，但尚无针对肿瘤细胞增殖密切相关的靶标，因此，研究与肿瘤细胞增殖密切相关的新型抗体用于临床肿瘤治疗是免疫学研究至关重要的课题。
[0004]肿瘤是一种慢性漫长的异常增殖性疾病。与细胞生长调节相关的多个基因突变导致正常细胞生长失控，细胞异常增殖，最终进展为恶性肿瘤，历时可达10-30年。找到与肿瘤增殖相关的靶标是关键点。大量临床研究表明，TK1是一种评定肿瘤细胞增殖的可信的标志物，在评估人肿瘤增殖速率方面具有重要价值。
[0005]胸苷激酶1（TK1）（ATP：胸苷-5'-磷酸转移酶，EC2.7.1.21）是唯一通过替补途径将胸苷（TdR）磷酸化成单磷酸胸苷（dTMP）的激酶，单磷酸胸苷进一步磷酸化为二磷酸胸苷（dTDP）和三磷酸胸苷（dTTP），为合成DNA提供所需要的dTTP，确保DNA的合成。因此，TK1是调控DNA合成密切相关的关键酶之一，与细胞的增殖速度密切相关，也称为细胞周期的S期的
特殊酶。胸苷（TdR）是DNA合成的重要前体之一。已显示TdR在细胞内的浓度与细胞活力相关。细胞中TK1酶的活性/浓度是可以通过TdR/TTP浓度方法进行检测。TK1基因已被认为是自杀基因。
[0006]TK1是一细胞周期依赖酶，与细胞增殖密切相关。在哺乳动物细胞中，TK1的 C 端是细胞生长依赖性调节所必需的肽段。当删除C 端40个或30个氨基酸残基后，TK1
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这个细胞周期依赖酶调控细胞的生长密切相关的功能完全被消除。在本专利技术中，选择人TK1靠近C端的195-225位氨基酸（GQPAGPDNKENCPVP GKPGEAVAARKLFAPQ）做免疫抗原，经严格筛选和鉴定，成功地制备得到特异性的鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体(来源于SSTK小鼠杂交瘤细胞株057M）。可用于治疗肿瘤，尤其是胃肿瘤和乳腺癌。可用于临床肿瘤免疫组化评估患者预后的验证。TK1的染色指数真实地提供了患者的肿瘤增殖速率，是评定肿瘤患者复发和生存的重要预后因素。例如TK1染色指数在良性乳腺组织、乳腺非典型性导管增生、原位导管癌和浸润性导管癌中的表达与患者疾病进程相关性，TK1在pT1 期肺腺癌间质浸润中的表达与肿瘤患者的生存预后相关性，TK1是宫颈癌前病变患者预后和监测疗效评估的一优选的细胞增殖生物标志物，评估肿瘤患者的生存预后，TK1是一新的肿瘤细胞增殖标志物对卵巢浆液性腺癌患者复发风险和生存率的预后优于Ki-67。
[0007]本专利技术人首次发现，鼠抗人胸苷激酶1单克隆抗体(来源于SSTK小鼠杂交瘤细胞株057M）是一新型靶向药物，它阻断人肿瘤细胞增殖，但不阻断正常细胞的正常生存活力，将是治疗胃肿瘤有效靶向治疗有效药物。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种鼠抗人胸苷激酶1-IgG单克隆抗体或其抗原结合片段，其重链三个CDR的序列依次为：CDR1: GFTFSDYY；CDR2: IRNKEYGNTA；CDR3: ARDGAFDY；其轻链三个CDR的序列依次为：CDR1: KSVSTSGYSY；CDR2: LAS；CDR3: QESREFPT。
[0009]本专利技术提供了一种鼠抗人胸苷激酶1-IgG单克隆抗体或其抗原结合片段，其重链和轻链可变区序列分别为：EVKLVESGGGLAQPGGSLRLSCATSGFTFSDYYMNWVRQPPGKAFEWLGFIRNKEYGNTAEYNPSLKGRFTISRDDSQSILYLQMNTLRVEDSAIYYCARDGAFDYWGQGTSLTVSS；和DIVMTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQESREFPTVGGGTNLEIK。
[0010]本专利技术提供了一种单克隆抗体或其抗原结合片段，编码重链和轻链可变区的基因序列分别为：GAGGTGAAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGGCACAGCCTGGGGGCTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAACTTCTGGGTTCACCTTCAGTGATTATTATATGAATTGGGTCCGCCAGCCTCCAGGAAAGGCTTTTGAGTGGTTGGGTTTTATTAGAAACAAAGAATATGGCAACACAGCAGAGTACAATCCATCTCTGAAGGGTCGATTCACCATCTCCAGAGATGATTCCCAAAGCATCCTCTATCTTCAAATGAACACCCTGAGAGTTGAGGACAGTGCCATTTATTATTGTGCAAGAGATGGCGCCTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACTTCTCTCACAGTCTCCTCA；和GACATTGTGATGACCCAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鼠抗人胸苷激酶1-IgG单克隆抗体或其抗原结合片段，其重链三个CDR的序列依次为：CDR1: GFTFSDYY；CDR2: IRNKEYGNTA；CDR3: ARDGAFDY；其轻链三个CDR的序列依次为：CDR1: KSVSTSGYSY；CDR2: LAS；CDR3: QESREFPT。2.权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段，其重链和轻链可变区序列分别为：EVKLVESGGGLAQPGGSLRLSCATSGFTFSDYYMNWVRQPPGKAFEWLGFIRNKEYGNTAEYNPSLKGRFTISRDDSQSILYLQMNTLRVEDSAIYYCARDGAFDYWGQGTSLTVSS；和DIVMTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQESREFPTVGGGTNLEIK。3.权利要求2的单克隆抗体或其抗原结合片段，编码重链和轻链可变区的基因序列分别为：GAGGTGAAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGGCACAGCCTGGGGGCTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAACTTCTGGGTTCACCTTCAGTGATTATTATATGAATTGGGTCCGCCAGCCTCCAGGAAAGGCTTTTGAGTGGTTGGGTTTTATTAGAAACAAAGAATATGGCAACACAGCAGAGTACAATCCATCTCTGAAGGGTCGATTCACCATCTCCAGAGATGATTCCCAAAGCATCCTCTATCTTCAAATGAACACCCTGAGAGTTGAGGACAGTGCCATTTATTATTGTGCAAGAGATGGCGCCTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACTTCTCTCACAGTCTCCTCA；和GACATTGTGATGACCCAGTCTCCTGCTTCCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘永萍，李惠军，陈湖，李作生，李劲，艾伦，
申请(专利权)人：华瑞同康生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：