TK1抗体、试剂盒及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种TK1抗体、试剂盒及其应用。TK1抗体包含重链可变区，重链可变区包含SEQ ID NO：1氨基酸序列的重链CDR1、SEQ ID NO：2氨基酸序列的重链CDR2以及SEQ ID NO：3氨基酸序列的重链CDR3；以及轻链可变区，轻链可变区包含SEQ ID NO：4氨基酸序列的轻链CDR1、SEQ ID NO：5氨基酸序列的轻链CDR2以及SEQ ID NO：6氨基酸序列的轻链CDR3。本发明专利技术制备了肝细胞肿瘤特异性抗体，其特异性结合肝肿瘤细胞且不阻断正常细胞的正常生存活力，亲和力强且表达稳定，能有意义地降低人肝肿瘤细胞增殖的速率，增加细胞凋亡频率。本发明专利技术的抗体可以用作诊断或治疗用，是一种新的阻断肿瘤细胞增殖的有效靶向治疗药物，特别是肝癌。特别是肝癌。

【技术实现步骤摘要】
TK1抗体、试剂盒及其用途


[0001]本专利技术涉及免疫学领域，特别涉及一种TK1抗体、试剂盒及其用途。

技术介绍

[0002]肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其每年有超过50万的新增病例，且由于 治疗效率的低下，导致几乎同样数目的死亡率。肝细胞癌占所有肝癌的约80％， 且很少能医治。其5年的存活率仅为约10％，且确诊后的存活时间通常少于6 个月。
[0003]关于肝癌的治疗方法，有以可见病灶为对象的外科肝切除、无线电波烧灼 疗法、乙醇注入疗法及微波凝固坏死疗法等，但有时候这些局部疗法并不适合。
[0004]目前，对于不能适应上述疗法和肝动脉栓塞手术的晚期癌症患者、或者经 这些治疗后复发的患者，比较常见使用的化学疗法有CDDP、ADM或5
‑
FU的 动脉内注射(动注)疗法。但是，采用油性造影剂碘化罂粟油和上述药物联用的肝 动注化学疗法，据报道显著有效率为13.0％、有效率为30.0％；排除肝动脉栓 塞疗法与碘化罂粟油联用的化学疗法，据报道显著有效率仅为2.5％，有效率仅 为3.1％，治疗效果不算良好。而且，这种联用疗法还有产生溃疡等并发症的问 题。如上所述，对肝癌能稳定地保证一定程度疗效的标准治疗方法还不存在。特 别地，动脉内注射存在操作手法方面和患者负担方面的问题，所以希望开发取代 这种疗法的化学疗法。进一步地，由于肝癌对化学疗法抵抗性高，甚至通过治疗 达到暂时稳定肿瘤、即不使肿瘤增殖而延长生命都很困难。
[0005]因此，在该领域中仍然需要开发一种能够能特异性结合肝肿瘤细胞从而阻 断肝肿瘤细胞增殖的生物学诊疗手段。

技术实现思路

[0006]针对前述问题，本专利技术提出了一种抗体、试剂盒及其应用。该抗体能特异 性结合肝肿瘤细胞，从而阻断肝肿瘤细胞增殖。
[0007]在第一方面，本专利技术提供了一种TK1抗体，其包含重链可变区，重链可变 区包含SEQ ID NO：1氨基酸序列的重链CDR1、SEQ ID NO：2氨基酸序列的 重链CDR2以及SEQ ID NO：3氨基酸序列的重链CDR3；以及轻链可变区，轻 链可变区包含SEQ ID NO：4氨基酸序列的轻链CDR1、SEQ ID NO：5氨基酸 序列的轻链CDR2以及SEQ ID NO：6氨基酸序列的轻链CDR3。
[0008]本专利技术的TK1抗体能特异性结合肝肿瘤细胞、亲和力强且表达稳定，能有 意义地降低人肝肿瘤细胞增殖的速率，增加了细胞凋亡频率。因此，大量生产本 专利技术的TK1抗体将为患者提供更稳定的中和性抗体，并且伴有更高的亲和性。
[0009]优选地，抗体包含重链可变区，重链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸 序列。
[0010]优选地，抗体包含轻链可变区，轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸 序列。
[0011]在第二方面，本专利技术提供了一种核酸，其编码上述抗体。
[0012]优选地，核酸包含编码重链可变区的第一核酸，第一核酸包含SEQ ID NO： 9的编
码序列。
[0013]优选地，核酸包含编码轻链可变区的第二核酸，第二核酸包含SEQ ID NO： 10的编码序列。
[0014]在第三方面，本专利技术提供了一种载体，其包含上述核酸。
[0015]在第四方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，其包含上述核酸或上述载体。
[0016]在第五方面，本专利技术提供了一种试剂盒，其包含上述抗体。
[0017]在第六方面，本专利技术提供了一种上述抗体在制备用于治疗肝癌的药物/组合 物中的用途。
[0018]综上所述，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术制备了肝细胞肿瘤特异性抗 体，其特异性结合肝肿瘤细胞且不阻断正常细胞的正常生存活力，亲和力强且表 达稳定，能有意义地降低人肝肿瘤细胞增殖的速率，增加细胞凋亡频率。本专利技术 的抗体可以用作诊断或治疗用，是一种新的阻断肿瘤细胞增殖的有效靶向治疗药 物，特别是肝癌。
附图说明
[0019]图1是示出HT29 TK1+和143B TK
‑
细胞裂解液的蛋白质印迹(Western Blot /WB)的示意图；
[0020]图2是纯化后TK1抗原的SDS
‑
PAGE电泳图；
[0021]图3是示出在用不同浓度的胸苷激酶1单克隆抗体(SSTK小鼠杂交瘤细胞 株43#)处理72小时后所培养的肝肿瘤细胞Hep G2的肿瘤细胞生存活力有统 计学意义的降低(p﹤0.05)示意图；
[0022]图4是示出在用不同浓度的胸苷激酶1单克隆抗体(SSTK小鼠杂交瘤细胞 株43#)处理72小时后所培养的肝肿瘤细胞Hep 3B的肿瘤细胞生存活力有统计 学意义的降低(p﹤0.05)示意图；
[0023]图5是43#单克隆抗体TK1免疫组化染色结肠恶性肿瘤的示意图；
[0024]图6是43#单克隆抗体TK1免疫组化染色结肠恶性肿瘤的示意图；
[0025]图7是43#单克隆抗体TK1免疫组化染色乳腺恶性肿瘤的示意图。
具体实施方式
[0026]以下将参考具体实施例对本专利技术进行进一步的说明。本领域的普通技术人 员将会理解，提供这些实施例的目的仅仅是为了举例说明本专利技术的可实现方式， 以便于本领域的普通技术人员能够更好地理解本专利技术，而无意于将本
技术实现思路
限 制于这些具体的实施例。
[0027]在本申请中，术语“特异性结合”是指两分子间的非随机结合反应，例如 抗体或其抗原结合片段将不显示任何显著的与来自除了其特异性结合配偶体之 外的其他分子的结合。
[0028]本专利技术所述的抗体意指任何能够特异性地结合TK1的抗体，包括天然的、 或者部分或全部合成产生的多肽或多肽片段。本专利技术所述的抗体还涵盖了包含抗 体的抗原结合片段的任何多肽或蛋白质。包含抗原结合片段的抗体片段是诸如 Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、scFv、Fv、dAb、Fd、Fd
’
、双特异性抗体分子、或多特异 性抗体分子等。所述抗体可以是单克
隆抗体或多克隆抗体，可以是鼠源或人源或 兔源或羊源或其它动物来源，或者可以是基因工程抗体，如人源抗体、人源化抗 体、嵌合抗体或单链抗体等。在一个具体的实施方式中，本专利技术所述的抗体是单 克隆抗体，例如鼠单克隆抗体。
[0029]本领域技术人员明了，可以采取单克隆抗体和其他抗体并使用重组DNA技 术来产生保留原始抗体的特异性的其他抗体或嵌合分子。例如，可以将编码免疫 球蛋白可变区的DNA与恒定区连接，或将抗体的互补性决定区(CDRs)引入不同 免疫球蛋白的恒定区加框架区内。另外，也可以对酵母细胞、杂交瘤或产生抗体 的其他细胞实施基因突变或其他改变，其可以改变或不可以改变所产生的抗体的 结合特异性。
[0030]胸苷激酶1(TK1)(ATP：胸苷
‑
5'
‑
磷酸转移酶，EC2.7.1.21)是唯一通过补 救途径将胸苷(TdR)磷酸化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TK1抗体，其特征在于，所述抗体包含：重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：1氨基酸序列的重链CDR1、SEQ ID NO：2氨基酸序列的重链CDR2以及SEQ ID NO：3氨基酸序列的重链CDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：4氨基酸序列的轻链CDR1、SEQ ID NO：5氨基酸序列的轻链CDR2以及SEQ ID NO：6氨基酸序列的轻链CDR3。2.根据权利要求1所述的TK1抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的TK1抗体，其特征在于，所述抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列。4.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1

【专利技术属性】
技术研发人员：李劲，张波，李惠军，周际，艾伦，
申请(专利权)人：华瑞同康生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：