一种抗TK1原核重组单链抗体及制备方法技术

本发明专利技术公开了单链抗体、单克隆抗体及其制备方法和应用。其中，该单链抗体含有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。该抗TK1单链抗体的免疫反应性好、特异性和灵敏性高，并且易于分离纯化。

A recombinant scFv Against TK1 and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种抗TK1原核重组单链抗体及制备方法
本专利技术涉及生物工程领域，具体地，涉及单链抗体、单克隆抗体及其制备方法和应用，更具体地，涉及单克隆抗体、分离的核酸、载体、重组细胞、制备单克隆抗体的方法、免疫偶联物、检测条或检测试剂盒，以及单克隆抗体、免疫偶联物和检测条或检测试剂盒在检测细胞异常增殖的用途。
技术介绍
人胸苷激酶1(HumanThymidineKinase,hTK1)是人细胞增殖过程中DNA合成过程中的一种关键酶，与细胞异常增值速率相关。其蛋白单体分子由234个氨基酸组成，活性型式为由4个单体组成的四聚体。目前已经有大量研究指出，检测人血清hTK1含量可以预测发生早期肿瘤的发生风险，为肿瘤早发现早治疗提供有效辅助手段。目前抗TK1单克隆抗体大多特异性差，而特异性和灵敏度较好的鸡抗TK1多克隆抗体因为制备周期长，纯化困难，一直限制着hTK1在人群中大量检测应用。由此，抗TK1单克隆抗体有待研究。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种单克隆抗体，该单克隆抗体为抗TK1单克隆抗体，该单克隆抗体的免疫反应性好、特异性和灵敏性高，并且易于分离纯化。需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列工作而完成的：专利技术人通过其之前研究筛选得到的一株鸡源抗TK1重组单链抗体基因序列(具有SEQIDNO：3所示序列)，进行密码子优化以及加入SBP-tag后，得到了SEQIDNO：2所示的核苷酸序列，并通过构建重组pET22b表达载体，在BL21(DE3)在细胞周质间隙表达可溶性的单链抗体蛋白，并通过TK1-31aa偶联多肽抗原的琼脂糖凝胶柱亲和层析提取纯化，制备得到高纯度的、高活性的、高特异性的重组抗TK1单链抗体蛋白。其中，SEQIDNO：3所示序列如下：GCAGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCGATTATGGCATGAACTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAGTTCGTCGCTGGTATTGAGAATGATGGTAGTAGCACATGGTACGCGACGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGCCACCTACTTCTGCGCCAAAGATTTTAGTAGTGGTTATGGTGGTTGGAGTGCTTCTGGTGGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCTGGTGGAGGATCAGGTGGAGGAGGATCCGGAGGTGGTGGTTCTGGAGGTGGTTCTGCGCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGATCGGAGCAGCTACTATGGTTACTATGGCTGGTATCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTCTCACTGTGATCTATTACAGCAGCAACAGACCCACGAACATCCCTTCACGATTCTCTGGTTCCAAATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTACTGTGGGAGTGCAGAAGACAGCAGCTATGCTGCTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTG(SEQIDNO：3)因而，根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种单链抗体。根据本专利技术的实施例，该链克隆抗体含有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列，其中，SEQIDNO：1所示的氨基酸序列如下：AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFTFSDYGMNWVRQAPGKGLEFVAGIENDGSSTWYATAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTATYFCAKDFSSGYGGWSASGGIDAWGHGTEVIVSSGGGSGGGGSGGGGSGGGSALTQPSSVSANPGETVKITCSGDRSSYYGYYGWYQQKAPGSAPLTVIYYSSNRPTNIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYYCGSAEDSSYAAIFGAGTTL(SEQIDNO：1)专利技术人惊奇地发现，该抗TK1单链抗体的免疫反应性好、特异性和灵敏性高，并且易于分离纯化。根据本专利技术的第二方面，本专利技术提供了一种单克隆抗体。根据本专利技术的实施例，该单克隆抗体含有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。专利技术人惊奇地发现，该抗TK1单克隆抗体的免疫反应性好、特异性和灵敏性高，并且易于分离纯化。根据本专利技术的第三方面，本专利技术提供了一种分离的核酸。所述核酸编码前述的单克隆抗体。根据本专利技术实施例的核酸编码的单克隆抗体，具有免疫反应性好、特异性和灵敏性高，并且易于分离纯化等优点。根据本专利技术的实施例，该核酸含有SEQIDNO：2所示的核苷酸序列，其中，SEQIDNO：2所示的核苷酸序列如下：ATCCATGGATGCTGTTACCCTGGACGAATCTGGTGGTGGTCTGCAGACCCCGGGTGGTACCCTGTCTCTGGTTTGCAAAGCTTCTGGTTTCACCTTCTCTGACTACGGTATGAACTGGGTTCGTCAGGCTCCGGGTAAAGGTCTGGAATTCGTTGCTGGTATCGAAAACGACGGTTCTTCTACCTGGTACGCTACCGCTGTTAAAGGTCGTGCTACCATCTCTCGTGACAACGGTCAGTCTACCGTTCGTCTGCAGCTGAACAACCTGCGTGCTGAAGACACCGCTACCTACTTCTGCGCTAAAGACTTCTCTTCTGGTTACGGTGGTTGGTCTGCTTCTGGTGGTATCGACGCTTGGGGTCACGGTACCGAAGTTATCGTTTCTTCTGGTGGTGGTTCTGGTGGTGGTGGTTCTGGTGGTGGTGGTTCTGGTGGTGGTTCTGCTCTGACCCAGCCGTCTTCTGTTTCTGCTAACCCGGGTGAAACCGTTAAAATCACCTGCTCTGGTGACCGTTCTTCTTACTACGGTTACTACGGTTGGTACCAGCAGAAAGCTCCGGGTTCTGCTCCGCTGACCGTTATCTACTACTCTTCTAACCGTCCGACCAACATCCCGTCTCGTTTCTCTGGTTCTAAATCTGGTTCTACCGCTACCCTGACCATCACCGGTGTTCGTGCTGAAGACGAAGCTGTTTACTACTGCGGTTCTGCTGAAGACTCTTCTTACGCTGCTATCTTCGGTGCTGGTACCACCCTGGCT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单链抗体，其特征在于，所述单链抗体含有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种单链抗体，其特征在于，所述单链抗体含有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。


2.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体含有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。


3.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1所述的单链抗体或权利要求2所述的单克隆抗体，
任选地，所述核酸含有SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。


4.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求3所述的核酸。


5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体为原核表达载体。


6.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求3或4所述的载体。


7.一种制备权利要求1所述的单克隆抗体的方法，其特征在于，包...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈湖，李作生，李惠军，梁丽雯，党利，刘森波，方聪，高鹏，艾伦·何，斯文·斯库格，周际，
申请(专利权)人：华瑞同康生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44