一种转导ｉＡＳＰＰｓｖ癌基因在造血系统特异性高表达的小鼠模型及其制备方法和用途技术方案

本发明专利技术公开了一种转导ｉＡＳＰＰｓｖ癌基因在造血系统特异性高表达的小鼠模型及其制备方法和用途，构建ｈＭ?ＨＳ２１／４５ｖａｖ－ｉＡＳＰＰｓｖ质粒，将此质粒经Ｈｉｎｄ?ＩＩＩ酶切后移除载体中的原核表达载体部分，完成线性化后，低电压电泳过夜，切胶回收，纯化，调整核酸浓度。通过显微注射的方法把转基因载体ｈＭ?ＨＳ２１／４５ｖａｖ－ｉＡＳＰＰｓｖ注射入Ｃ５７小鼠受精卵内，植入假孕小鼠子宫内，手术后１９～２１天仔鼠分娩，待仔鼠３周后，剪耳、编号，剪尾，自尾部提取ＤＮＡ使用ＰＣＲ检测目的基因ｉＡＳＰＰｓｖ的整合。采用分子生物学、实验动物学等方法获得了造血系统特异性高表达ｉＡＳＰＰｓｖ转基因小鼠模型，成功建立检测造血干祖细胞增殖、定向分化、迁移和凋亡等方面的实验方法，为进一步阐述正常造血干祖细胞向肿瘤细胞转化的机制研究以及靶向治疗奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及小鼠模型，具体涉及一种转导iASPPsv癌基因在造血系统特异性高表 达的小鼠模型及其制备方法和用途。
技术介绍
目前，恶性肿瘤已成为威胁人类健康的最严重疾病之一。随着社会经济的发展，肿 瘤的发病率呈上升趋势。所以针对各种肿瘤的预防、发病机制、诊断、治疗和预后的相关研 究成为迫切亟待解决的问题。越来越多的研究发现，肿瘤的发生可能起源于最初的肿瘤干 细胞，而肿瘤干细胞的可能来源于调控异常的正常干细胞，这两者之间的转化研究，对各种 肿瘤的预防、发病机制、诊断、治疗和预后的相关研究为肿瘤的治疗，预防提供了新的思路， 成为目前临床与基础研究的热点课题。多能造血干细胞的生长发育与分化成各系功能血细 胞的过程受许多不同基因表达调控，当这些调控信号或造血干祖细胞所处的微环境的发生 改变，都可能对造血干细胞的功能和发育产生影响。造血干祖细胞受到遗传学损伤累积，引 起增殖失控，分化与凋亡之间的平衡被打破后就可能会导致恶性血液系统肿瘤的发生。造 血细胞的增殖失控、分化能力的丧失将可能导致细胞的恶性转化及白血病的发生。p53作为迄今为止发现的最重要的抑癌基因，被称作“基因组的护卫者”，通过激本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种转导ｉＡＳＰＰｓｖ癌基因在造血系统特异性高表达的小鼠模型的制备方法，包括以下步骤：　　１）载体构建：自ｐｃＤＮＡ３．０－ＦＬＡＧ－ｉＡＳＰＰｓｖ中，ＰＣＲ扩增ｉＡＳＰＰｓｖ，引入所需的Ｎｏｔ　Ⅰ和Ｓｆｉ　Ⅰ酶切位点：　　上游引物为５’－ＧＣＡＧＧＣＣＣＧＴＡＣＧＧＣＣＡＴＧＴＧＣＴＧＧＴＴＧ－３’　　下划线为引入Ｓｆｉ　Ⅰ酶切位点　下游引物为５’－ＣＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＡＧＡＣＴＴＴＡＣＴＣＣＴＴＴＧ－３’划线为引入Ｎｏｔ　Ⅰ酶切位点　　反应条件为９８℃预变性１ｍｉｎ，９８℃１０ｓ，６８℃４ｍｉｎ，２７个循环后４℃保存，扩增片段长度为１２４５ｂｐ，ＰＣＲ扩增后加入Ａ尾，电泳定量并进行...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王建祥，彭磊文，王敏，饶青，刘家卓，邢海燕，田征，
申请(专利权)人：中国医学科学院血液病医院血液学研究所，
类型：发明
国别省市：12