【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本文披露了与人gpc3和人cd137结合的多特异性抗体或其抗原结合片段、包含所述抗体的组合物、以及用于治疗癌症的使用方法。
技术介绍
1、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)属于硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(hspg)家族，包括60-70kd核心蛋白，其通过糖化肌醇磷脂锚蛋白(gpi)连接至细胞膜表面，并且羧基末端被硫酸乙酰肝素侧链修饰(filmus j等人，j.clin.inv[临床研究杂志].2001；108:497-501)。
2、gpc3在肿瘤细胞中的特异性表达受到广泛关注。gpc3在肝细胞癌(hcc)中表达，肝细胞癌是最常见的肝癌类型。值得注意的是，在非恶性组织中未检测到其表达。在肝母细胞瘤、肺鳞状细胞癌(lscc)和其他癌症中也报告了gpc3的过表达。这表明gpc3适合作为肿瘤抗原进行靶向疗法。(li n等人,trends cancer[癌症趋势]2018；4:741-54；ho m等人,eurj cancer[欧洲癌症杂志]2011；47:333-8；moek等人,am.j.pathol.[美国病理学杂志]2018；188(9):1973-1981)。
3、cd137(也称为tnfrsf9/41bb)是属于tnfrsf家族的共刺激分子。它是通过对由伴刀豆球蛋白a刺激的小鼠辅助细胞和细胞毒性细胞进行t细胞因子筛选发现的，并在1989年被鉴定为一种诱导型基因，该诱导型基因在抗原引发的t细胞上表达但在静息t细胞上不表达(kwon等人,proc.natl.acad.sci.usa.[美国国家科学院学报]198
4、与cd137的crd i结合的抗cd137抗体乌瑞鲁单抗(urelumab)(bms-663513)以及与cd137的crd iii和iv结合的乌托鲁单抗(utomilumab)(pf-05082566)因它们能够激活细胞毒性t细胞并增加干扰素γ(ifn-γ)的产生而显示出作为癌症治疗剂的潜力。这些抗体使肿瘤消退的潜在机制是影响免疫细胞对癌细胞的反应。抗cd137抗体刺激并激活效应t淋巴细胞(例如，刺激cd8 t淋巴细胞产生infγ)、nkt和apc(例如，巨噬细胞)。
5、乌瑞鲁单抗在临床前实验和早期临床研究中显示出有前景的结果(sznol等人,clin.oncol.[临床肿瘤学]2008；26(增刊15))。然而，在后来的研究中，乌瑞鲁单抗表现出肝毒性，导致抗体的开发暂停直到2012年2月(segal等人,clin.cancer res.[临床癌症研究]2017；23:1929-1936)。肝毒性主要是由于肿瘤和基质细胞分泌的s100a4蛋白所致，而将乌瑞鲁单抗的剂量限制为每位患者每3周8mg或0.1mg/kg的研究恢复了对该抗体的兴趣(segal等人,clin.cancer res.[临床癌症研究]2017；23:1929-1936)。
6、与乌瑞鲁单抗相比，乌托鲁单抗显示出更好的安全性特征，并且初步研究显示没有肝毒性或其他剂量限制因素(segal等人,j.clin.oncol.[临床肿瘤学杂志]2014；32(增刊15))。乌托鲁单抗作为单一疗法的i期试验的报告结果表明具有良好的安全性特征(segal等人,clin.cancer res.[临床癌症研究]2018；24:1816-1823)。推测这两种抗体之间的差异是由于它们在cd137受体上的结合位点不同。
7、鉴于这两个靶标的独特生物学，将免疫细胞募集至表达gpc3的癌症的抗gpc3 xcd137多特异性抗体可用于治疗癌症。
技术实现思路
1、本披露涉及多特异性抗gpc3 x cd137抗体及其抗原结合片段。本披露涵盖以下实施例。
2、一种多特异性抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含与人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(gpc3)特异性结合的第一抗原结合结构域和与人cd137特异性结合的第二抗原结合结构域。
3、该多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人cd137特异性结合的第二抗原结合结构域包含：
4、(i)来自seq id no:84所示的重链可变区(vh)的hcdr1(重链互补决定区1)、hcdr2和hcdr3；
5、(ii)来自seq id no:75所示的重链可变区(vh)的hcdr1、hcdr2和hcdr3；
6、(iii)来自seq id no:70所示的重链可变区(vh)的hcdr1、hcdr2和hcdr3；或者
7、(iv)来自seq id no:60所示的重链可变区(vh)的hcdr1、hcdr2和hcdr3。
8、该多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人cd137特异性结合的第二抗原结合结构域包含：
9、(i)重链可变区(vh)，该重链可变区包含(a)seq id no:65的hcdr1、(b)seq idno:80的hcdr2、(c)seq id no:81的hcdr3；
10、(ii)重链可变区(vh)，该重链可变区包含(a)seq id no:65的hcdr1、(b)seq idno:73的hcdr2、(c)seq id no:67的hcdr3；
11、(iii)重链可变区(vh)，该重链可变区包含(a)seq id no:65的hcdr1、(b)seq idno:66的hcdr2、(c)seq id no:67的hcdr3；或者
12、(iv)重链可变区(vh)，该重链可变区包含(a)seq id no:55的hcdr1、(b)seq idno:56的hcdr2、(c)seq id no:57的hcdr3，
13、根据kabat编号。
14、该多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人cd137特异性结合的第二抗原结合结构域包含：
15、(i)重链可变区(vh)，该重链可变区包含与seq id no:84至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；
16、(ii)重链可变区(vh)，该重链可变区包含与seq id no:86至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；
17、(iii)重链可变区(vh)，该重链可变区包含与seq id no:7本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多特异性抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含与人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)特异性结合的第一抗原结合结构域和与人CD137特异性结合的第二抗原结合结构域。
2.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人CD137特异性结合的第二抗原结合结构域包含：
3.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人CD137特异性结合的第二抗原结合结构域包含：
4.如权利要求3所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中SEQ ID NO:84、SEQ IDNO:86、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:70或SEQ ID NO:60中已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。
5.如权利要求1-3中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人CD137特异性结合的第二抗原结合结构域包含：
6.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人CD137特异性结合的第二抗原结合结构域与包含氨基
7.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人GPC3特异性结合的第一抗原结合结构域包含：
8.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人GPC3特异性结合的第一抗原结合结构域包含：
9.如权利要求8所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:7中已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。
10.如权利要求1-9中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人GPC3特异性结合的第一抗原结合结构域包含：
11.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，
12.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，
13.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或抗原结合片段是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
14.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人GPC3特异性结合的第一抗原结合结构域是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、单链抗体(scFv)、单结构域抗体、Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段，并且
15.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体。
16.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或抗原结合片段含有来自SEQ ID NO:16至SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:88至SEQ IDNO:93的接头。
17.如权利要求16所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该接头是SEQ ID NO:23。
18.如权利要求16所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该接头是SEQ ID NO:28。
19.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或抗原结合片段包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的重链恒定区和/或κ或λ类型的轻链恒定区，并且
20.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。
21.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段具有降低的糖基化或无糖基化或是低岩藻糖基化的。
22.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含增加的二等分GlcNac结构。
23.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含Fc结构域，并且其中该Fc结构域是具有降低的效应子功能的IgG1，任选地该Fc结构域包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
24.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段包含Fc结构域，并且其中该Fc结构域是IgG4。
25.如前述权利要求中任一项所述的多特异性...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种多特异性抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含与人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(gpc3)特异性结合的第一抗原结合结构域和与人cd137特异性结合的第二抗原结合结构域。
2.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人cd137特异性结合的第二抗原结合结构域包含：
3.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人cd137特异性结合的第二抗原结合结构域包含：
4.如权利要求3所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中seq id no:84、seq idno:86、seq id no:75、seq id no:70或seq id no:60中已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。
5.如权利要求1-3中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人cd137特异性结合的第二抗原结合结构域包含：
6.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人cd137特异性结合的第二抗原结合结构域与包含氨基酸f36、p47和p49的人cd137的表位结合。
7.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人gpc3特异性结合的第一抗原结合结构域包含：
8.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人gpc3特异性结合的第一抗原结合结构域包含：
9.如权利要求8所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中seq id no:5或seq idno:7中已插入、缺失或取代一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸。
10.如权利要求1-9中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人gpc3特异性结合的第一抗原结合结构域包含：
11.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，
12.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，
13.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或抗原结合片段是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、单链抗体(scfv)、fab片段、fab'片段或f(ab')2片段。
14.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该与人gpc3特异性结合的第一抗原结合结构域是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、单链抗体(scfv)、单结构域抗体、fab片段、fab'片段或f(ab')2片段，并且
15.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或其抗原结合片段是双特异性抗体。
16.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或抗原结合片段含有来自seq id no:16至seq id no:51和seq id no:88至seq idno:93的接头。
17.如权利要求16所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该接头是seq id no:23。
18.如权利要求16所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该接头是seq id no:28。
19.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多特异性抗体或抗原结合片段包含igg1、igg2、igg3或igg4亚类的重链恒定区和/或κ或λ类型的轻链恒定区，并且
20.如前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体或其抗原结合片段，其中该多...
【专利技术属性】
技术研发人员：李丹，袁溪，李杰，谢圆圆，李卓，曲亮，张彤，孙建，李学慧，宋兢，宋晓敏，
申请(专利权)人：百济神州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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