【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞免疫治疗，具体涉及特异性靶向bcma的单域抗体、car-t细胞及应用。
技术介绍
1、多发性骨髓瘤(multiple myeloma，mm)是一种单克隆浆细胞异常增殖的恶性疾病，其特征为骨髓浆细胞异常增生，分泌单克隆免疫球蛋白或其片段(m蛋白)，是血液系统常见恶性肿瘤。多发性骨髓瘤常见的症状包括骨髓瘤相关器官功能损伤以及继发淀粉样变性等相关表现，过度分泌的免疫球蛋白以及不受控制的浆细胞引起患者的终末器官的损伤，最终导致患者的死亡。在临床上，mm常规的治疗手段是蛋白酶体抑制剂、免疫抑制剂和anti-cd38单抗，但是往往表现出不良的临床结果，缓解率和生存率都很低。中国多发性骨髓瘤诊治指南(2022年修订)推荐经全身体能状态评分良好的多发性骨髓瘤患者，首选自体造血干细胞移植(autologous hematopoietic stem cell transplantation，asct)，对于年轻的具有高危预后因素且有合适供者的患者，可考虑异基因造血干细胞移植(allo-sct)。
2、目前以bcma(b细胞成熟抗原，b-cell maturation antigen)为靶点的car-t疗法已证明在多发性骨髓瘤中具有临床有效性。bcma(也称为cd269，tnfrsf17)是一种iii型跨膜糖蛋白，属于人类肿瘤坏死因子受体(tnfr)超家族，在b细胞成熟和分化为浆细胞中起主要作用。baff和april是与bcma结合的两种b细胞激活和扩增诱导配体，共同调控b细胞功能。研究表明，bcma普遍表达于多发性骨髓
3、嵌合抗原受体技术是采用基因工程技术修饰免疫细胞，使其表达外源性抗肿瘤基因，使得淋巴细胞等免疫细胞具有识别肿瘤细胞表面抗原的能力，并特异性识别和杀伤肿瘤细胞，没有组织相容复合体(mhc)的限制。嵌合抗原受体(car)的结构主要由细胞外识别肿瘤细胞表面抗原的结构域和细胞内信号转导结构域组成，细胞外的结构域用于特异性地识别肿瘤表面特异性蛋白(抗原)，细胞内的结构域含有共刺激分子结构域，用于在识别肿瘤表面特异性蛋白(抗原)后启动淋巴细胞的免疫应答，针对特异性的靶细胞发挥细胞毒性的作用，从而杀伤肿瘤靶细胞。
4、尽管以bcma为靶点的car-t细胞(bcma car-t细胞)治疗对多发性骨髓瘤表现出持久的缓解率，但是治疗后经常复发和出现耐药性。另外，car-t细胞在体内的增殖能力较差，对肿瘤细胞的杀伤效率较低也会客观上加大car-t细胞的使用剂量，容易造成较强的毒副作用，如炎症因子风暴和中枢神经系统毒性。因此，仍然迫切需要对bcma car-t细胞进行改造，寻找对bcma亲和力好的抗体等，进一步提高bcma car-t细胞疗法的疗效和安全性。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一是提供一种特异性靶向bcma的单域抗体、利用该单域抗体制备的嵌合抗原受体和car-t细胞及其应用。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。
2、为了实现上述目的，本专利技术首先提供了特异性靶向bcma的单域抗体，所述单域抗体包含氨基酸序列分别是seq id no.1的第47-54位的互补决定区cdr1、seq id no.1的第72-79位的互补决定区cdr2和seq id no.1的第118-130位的互补决定区cdr3。
3、进一步地，所述单域抗体的氨基酸序列可为下述任一种：
4、a1)seq id no.1的第22-141位；
5、a2)与a1)所示氨基酸序列具有至少80％的同一性且具有相同的功能的氨基酸序列。
6、本专利技术还提供了嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)，所述嵌合抗原受体包括所述单域抗体。所述单域抗体为所述嵌合抗原受体的抗原结合结构域。
7、进一步地，所述嵌合抗原受体还可包括cd8a铰链区、cd8a跨膜区和胞内信号区，所述胞内信号区可包括共刺激结构域4-1bb和激活结构域cd3ζ。
8、进一步地，所述cd8a铰链区的氨基酸序列可为seq id no.1的第142-186位。
9、进一步地，所述cd8a跨膜区的氨基酸序列可为seq id no.1的第187-210位。
10、进一步地，所述4-1bb的氨基酸序列可为seq id no.1的第211-257位。
11、进一步地，所述cd3ζ的氨基酸序列可为seq id no.1的第258-369位。
12、进一步地，所述嵌合抗原受体可为下述任一种：
13、b1)氨基酸序列是seq id no.1的第22-369位所示的蛋白质；
14、b2)在b1)的n端和/或c端连接标签或信号肽得到的与b1)具有相同功能的融合蛋白质。
15、进一步地，b2)中所述信号肽的氨基酸序列可为seq id no.1的第1-21位。
16、本文所述嵌合抗原受体自n-末端至c-末端依次可包含所述信号肽、所述单域抗体、所述cd8a铰链区、所述cd8a跨膜区、所述共刺激结构域4-1bb和所述激活结构域cd3ζ。
17、本文所述标签包括但不限于：gst(谷胱甘肽巯基转移酶)标签蛋白、his标签蛋白(his-tag)、mbp(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白、flag标签蛋白、sumo标签蛋白、ha标签蛋白、myc标签蛋白、gfp(绿色荧光蛋白)、cfp(青色荧光蛋白)、yfp(黄绿色荧光蛋白)、mcherry(单体红色荧光蛋白)或avitag标签蛋白。
18、本文中，同一性是指氨基酸序列或核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如ncbi主页网站的blast网页。例如，可在高级blast2.1中，通过使用blastp作为程序，将expect值设置为10，将所有filter设置为off，使用blosum62作为matrix，将gap existence cost，per residue gap cost和lambda ratio分别设置为11，1和本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.特异性靶向BCMA的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体包含氨基酸序列分别是SEQID No.1的第47-54位的互补决定区CDR1、SEQ ID No.1的第72-79位的互补决定区CDR2和SEQ ID No.1的第118-130位的互补决定区CDR3。
2.根据权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体的氨基酸序列为下述任一种：
3.嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括权利要求1或2所述的单域抗体。
4.根据权利要求3所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体还包括CD8a铰链区、CD8a跨膜区和胞内信号区，所述胞内信号区包括共刺激结构域4-1BB和激活结构域CD3ζ。
5.根据权利要求3或4所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体为下述任一种：
6.根据权利要求5所述的嵌合抗原受体，其特征在于，B2)中所述信号肽的氨基酸序列为SEQ ID No.1的第1-21位。
7.生物材料，其特征在于，所述生物材料为下述任一种：
8.修饰的免疫效应细胞，其特征在于，所
9.权利要求1或2所述的单域抗体、权利要求3-6中任一所述的嵌合抗原受体、权利要求7所述的生物材料或权利要求8所述的修饰的免疫效应细胞在制备具有如下任一种功能的产品中的应用：
10.一种修饰的免疫效应细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将权利要求3-6中任一所述的嵌合抗原受体的编码基因转入免疫效应细胞中表达，得到所述修饰的免疫效应细胞。
...【技术特征摘要】
1.特异性靶向bcma的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体包含氨基酸序列分别是seqid no.1的第47-54位的互补决定区cdr1、seq id no.1的第72-79位的互补决定区cdr2和seq id no.1的第118-130位的互补决定区cdr3。
2.根据权利要求1所述的单域抗体，其特征在于，所述单域抗体的氨基酸序列为下述任一种：
3.嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括权利要求1或2所述的单域抗体。
4.根据权利要求3所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体还包括cd8a铰链区、cd8a跨膜区和胞内信号区，所述胞内信号区包括共刺激结构域4-1bb和激活结构域cd3ζ。
5.根据权利要求3或4所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨鑫，朱建高，杨文君，俞建东，
申请(专利权)人：浙江康佰裕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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