【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及一种重组致弱的猫传染性腹膜炎病毒及其应用。
技术介绍
1、猫传染性腹膜炎病毒(fipv)是一种可以引起猫慢性、进行性和致死性疾病的病毒，主要以腹膜炎症、脏器结节、胸腔积液以及致死率接近百分之百为主要特征。fipv属于冠状病毒的一种，初期一般在口咽组织和肠道上皮细胞定殖；当猫在刺激因素下导致应激或免疫状态改变时会引起病毒复制和突变从而获得突破肠道屏障的能力，此时病毒具有巨噬细胞嗜性，可以在各种内脏器官中复制最终导致病毒性结节或肉芽肿损伤。同时根据产生血清抗体的不同，fipv被分为两种血清型；i型是在世界范围内主要流行的血清型，ⅱ型在部分亚洲国家呈零星分步。猫传染性腹膜炎(fip)按照临床特征可分为非渗出性(干性)和渗出性(湿性)，两种形式都是由fipv引起的，患病猫的具体表现形式主要取决于病毒以及猫自身的免疫状况。
2、目前对于猫传染性腹膜炎的治疗方式主要有两种：其一是对症治疗，一般使用免疫刺激因子或免疫调节类药物改善机体免疫状况，但该方式只能延缓死亡，并不能降低fip的死亡率；其二是抗病毒药物的使用，主要指病毒复制蛋白酶抑制剂以及核酸类似物等，通过影响病毒本身复制的方式来治疗fip，这种治疗方式可以有效降低死亡率，但受限于药物价格高昂且并未获得生产许可，同样不适合广泛使用。基于以上现状，亟需开发一种具有保护效果的fip疫苗。
3、通过对fipv基因组结构进行分析和研究可发现：fipv基因组主要包括非结构蛋白编码基因(nsp，non-structural protein)，结构
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种重组致弱的猫传染性腹膜炎病毒及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。本专利技术提供的猫传染性腹膜炎病毒对猫具有安全性，对猫传染性腹膜炎病毒强毒株具有保护效果，具有作为弱毒疫苗的潜力。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一种重组猫传染性腹膜炎病毒，构建方法包括：利用反向遗传操作平台，将质粒pbac-fipv-79s的orf7a区域替换成nanoluc序列，之后病毒拯救出所述重组猫传染性腹膜炎病毒；
4、所述质粒pbac-fipv-79s是将qs病毒的全长基因组序列导入bac质粒中，再将spike片段替换为791146s片段；
5、所述qs病毒的全长基因组序列在genbank的登录号为mw030108；
6、所述spike片段的序列如seq id no.1所示；
7、所述791146s片段的序列如seq id no.2所示；
8、所述nanoluc序列如seq id no.3所示。
9、本专利技术还提供所述的重组猫传染性腹膜炎病毒在制备治疗或预防猫传染性腹膜炎病毒的药物中的应用。
10、进一步地，所述预防猫传染性腹膜炎病毒的药物包括猫传染性腹膜炎病毒疫苗。
11、进一步地，所述猫传染性腹膜炎病毒疫苗包括全病毒灭活疫苗、减毒活疫苗或基因工程疫苗。
12、本专利技术还提供一种制备猫传染性腹膜炎病毒疫苗的方法，包括将所述的重组猫传染性腹膜炎病毒与医学上常见的免疫佐剂合并，制备成猫传染性腹膜炎病毒疫苗。
13、进一步地，所述免疫佐剂包括montanide isa 206、montanide isa 201、montanide gel 01st、氢氧化铝胶佐剂、明矾、弗氏佐剂、脂多糖、胆固醇、植物油或细胞因子中的任意一种或几种。
14、本专利技术还提供一种降低猫传染性腹膜炎病毒毒力的方法，包括通过基因编辑技术使猫传染性腹膜炎病毒基因组中的orf7a区域缺失。
15、进一步地，所述使猫传染性腹膜炎病毒基因组中的orf7a区域缺失包括将所述orf7a区域替换为nanoluc序列；所述nanoluc序列如seq id no.3所示。
16、进一步地，所述猫传染性腹膜炎病毒包括重组病毒。
17、进一步地，所述重组病毒包括将qs病毒的spike片段替换为791146s片段后，获得的重组病毒；
18、所述qs病毒的全长基因组序列在genbank的登录号为mw030108；
19、所述spike片段的序列如seq id no.1所示；
20、所述791146s片段的序列如seq id no.2所示。
21、本专利技术公开了以下技术效果：
22、本专利技术利用反向遗传操作平台，将质粒pbac-fipv-79s的orf7a区域替换成nanoluc序列，之后病毒拯救出重组猫传染性腹膜炎病毒fipv-79s-δ7a，通过对该重组病毒的生长特性测定，证实了orf7a的缺失不会对病毒生长特性产生显著影响；该重组病毒的致病性结果证实orf7a缺失显著降低了毒株的致病性，说明orf7a是该毒株比较重要的毒力影响因子之一；免疫后攻毒的结果显示50％的猫在攻毒后一个月仍然存活，这证明了orf7a缺失毒株具有作为弱毒疫苗的潜力。
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1.一种重组猫传染性腹膜炎病毒，其特征在于，构建方法包括：利用反向遗传操作平台，将质粒pBAC-FIPV-79S的ORF7a区域替换成NanoLuc序列，之后病毒拯救出所述重组猫传染性腹膜炎病毒；
2.如权利要求1所述的重组猫传染性腹膜炎病毒在制备治疗或预防猫传染性腹膜炎病毒的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述预防猫传染性腹膜炎病毒的药物包括猫传染性腹膜炎病毒疫苗。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述猫传染性腹膜炎病毒疫苗包括全病毒灭活疫苗、减毒活疫苗或基因工程疫苗。
5.一种制备猫传染性腹膜炎病毒疫苗的方法，其特征在于，包括将权利要求1所述的重组猫传染性腹膜炎病毒与医学上常见的免疫佐剂合并，制备成猫传染性腹膜炎病毒疫苗。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述免疫佐剂包括MONTANIDE ISA206、MONTANIDE ISA 201、MONTANIDE GEL 01ST、氢氧化铝胶佐剂、明矾、弗氏佐剂、脂多糖、胆固醇、植物油或细胞因子中的任意一种或几种。
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