【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含经工程化以作为单独分子共表达的多个目的核酸序列的载体如dna质粒，包含这类载体的药物组合物以及这类载体与这类药物组合物在治疗或预防疾病中的用途。
技术介绍
1、免疫应答为防范疾病(例如由病原体如病毒、细菌或寄生虫引起的疾病)所需要。但是，不期望的免疫激活可引起导致自身组织损伤或破坏的过程。例如，不期望的免疫激活发生于自身免疫疾病中，其中抗体和/或t淋巴细胞与自身抗原反应，导致例如组织损伤和病变。不期望的免疫激活还发生于过敏反应中，特征是对环境中一般无害的物质产生过大的免疫反应并且可能产生导致组织破坏的炎症反应。另外，不期望的免疫激活还发生于移植物排斥中，例如对所移植器官或组织的排斥，所述排斥由宿主中存在的同种异体反应性t细胞显著介导，识别捐赠者的同种异体抗原或异种抗原并且导致所移植器官或组织被破坏。
2、免疫耐受性是对能够在给定生物中激发免疫应答的物质或组织不能获得特异性免疫应答。
3、通常，为了诱导针对特定抗原的耐受性，抗原必须由抗原呈递细胞(apc)在活化信号不存在时呈递给其他免疫细胞，导致抗原特异性淋巴细胞的死亡或功能性失活或导致维持耐受性的抗原特异性细胞的产生。这种过程通常解释了对自身抗原的耐受性或自身耐受性。免疫抑制性药物可用于抑制或减少不期望的免疫应答，例如，用于治疗患有自身免疫疾病或具有同种异体移植物的患者。对不利免疫应答生成免疫抑制的常规策略是基于广谱作用的免疫抑制性药物。另外，为了维持免疫抑制，免疫抑制性药物治疗往往持续终生。不幸的是，使用广谱作用的免疫抑制性药物与重度
4、抗原呈递细胞(apc)如树突状细胞在调节免疫应答中发挥关键作用，并且根据apc的活化状态和微环境(细胞因子和生长因子)，它向抗原特异性t细胞发出信号，从而对抗所呈递的抗原(推测的病原体)或使针对所呈递抗原(推测的非致病抗原)的反应沉默并且诱导外周耐受性。开发致耐受性免疫疗法的挑战在于以不触发炎性免疫应答的方式高效递送抗原至apc。
5、本专利技术涉及包含抗原单元和靶向单元的构建体，所述抗原单元包含自身抗原、变应原、同种异体抗原或异种抗原的一个或多个t细胞表位，所述靶向单元以非炎性或致耐受性方式与apc上的表面分子相互作用，导致在不存在炎性活化状态的情况下呈递抗原。
6、疫苗体(vaccibody)构建体是由两个多肽组成的二聚体融合蛋白，所述多肽均包含靶向抗原呈递细胞的靶向单元、二聚化单元和包含一个或多个疾病相关抗原或其部分的抗原性单元。在另一个实施方案中，疫苗体构建体是由多个多肽组成的多聚体融合蛋白，所述多肽均包含靶向apc的靶向单元、多聚化单元和包含一个或多个疾病相关抗原或其部分的抗原性单元–参见例如wo 2004/076489 a1、wo 2011/161244 a1、wo 2013/092875 a1或wo 2017/118695a1。已经证明这些构建体有效针对包含于所述抗原性单元中的抗原或其部分(例如表位)生成免疫应答。
7、疫苗体构建体可以按编码多肽的多核苷酸(例如包含于载体(如dna质粒)中的多核苷酸)的形式施用至受试者。在施用至宿主细胞后，例如施用至受试者(例如人)的肌肉细胞后，所述多肽表达并且因多聚化单元如二聚化单元而形成多聚体融合蛋白，如二聚体蛋白。
8、专利技术人令人惊讶地发现，改良的疫苗体平台可以通过结合apc上的选定表面受体并借助其进行信号转导，以用于诱导选定抗原特异性耐受应答的最佳方式，将疾病相关抗原递送至apc，所述apc内化该构建体并以诱导耐受性的方式对包含于构建体中的抗原进行呈递。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、本专利技术提供了用于共表达构建体和一个或多个免疫抑制性化合物的载体，例如dna质粒。所述载体和包含这类载体的药物组合物用于治疗涉及不期望的免疫反应的病症，如用于自身免疫疾病、过敏性疾病和移植物排斥的预防性或治疗性治疗。
2、在将所述载体施用至受试者后，这种构建体和免疫抑制性化合物将允许以诱导耐受性的方式呈递抗原性单元中的表位，并且本专利技术的载体因此适合用作免疫疾病如自身免疫疾病、过敏性疾病和移植物排斥的预防性或治疗性治疗。
3、由于所述构建体和免疫抑制性化合物使造成所讨论免疫疾病的免疫系统疾病特异性细胞下调，故它们将不抑制整个免疫系统。因此，用本专利技术的载体治疗所讨论免疫疾病不会导致感染易感染性增加和癌症免疫监视降低。
4、所述一个或多个免疫抑制性化合物有助于生成或促进一种环境，所述环境以诱导耐受性的方式或通过例如有利于诱导耐受维持性细胞或帮助维持这类细胞，有利于抗原性单元中表位的呈递。
5、在第一方面，本专利技术涉及载体，所述载体包含：
6、(a)编码第一多肽的第一核酸序列，其中第一多肽包含靶向抗原呈递细胞的靶向单元、多聚化单元(如二聚化单元)以及抗原性单元，其中抗原性单元包含自身抗原、变应原、同种异体抗原或异种抗原的一个或多个t细胞表位；和
7、(b)一个或多个编码一个或多个免疫抑制性化合物的其他核酸序列，
8、其中所述载体允许将第一多肽和所述一个或多个免疫抑制性化合物作为单独分子共表达。
9、在一个实施方案中，本专利技术的载体包含了编码第一多肽的第一核酸序列，其中第一多肽包含靶向而不活化抗原呈递细胞的靶向单元。
10、本专利技术的载体可以，例如以药物组合物即包含所述载体和药学上可接受的运载体(carrier)或稀释剂的组合物的形式，通过将所述载体/药物组合物施用给需要这类预防性或治疗性治疗的受试者，用于免疫疾病的预防性或治疗性治疗。
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1.一种载体，包含：
2.根据权利要求1所述的载体，其中所述一个或多个免疫抑制性化合物诱导免疫耐受性和/或增加免疫耐受性和/或维持免疫耐受性。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的载体，其中所述一个或多个免疫抑制性化合物是抑制性检查点分子的胞外部分，如胞外结构域。
4.根据权利要求3所述的载体，其中所述抑制性检查点分子选自由以下组成的组：CLTA-4、PD-1、BTLA、LAG3、NOX2、SIGLEC7、SIGLEC9和TIM-3，优选地是选自由以下组成的组的人抑制性检查点分子：hCLTA-4、hPD-1、hBTLA、hLAG3、hNOX2、hSIGLEC7、hSIGLEC9和hTIM-3。
5.根据权利要求1至2中任一项所述的载体，其中所述免疫抑制性化合物是选自由以下组成的组的细胞因子：IL-10、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、IL-27、IL-2、GM-CSF、FLT3L、IFN-γ、IL-37和IL-35，优选地是选自由以下组成的组的人细胞因子：hIL-10、hTGF-β1、hTGF-β2、hTGF-β3、hIL
6.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述载体包含多个其他编码多于一个免疫抑制性化合物，如2、3、4、5、6、7或8个免疫抑制性化合物，如2、3、4、5、6、7或8个不同免疫抑制性化合物的核酸序列。
7.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述载体包含一个或多个共表达元件。
8.根据权利要求7所述的载体，其中所述一个或多个共表达元件引起在单一转录物上转录第一多肽和所述一个或多个免疫抑制性化合物以及独立翻译成单独的第一多肽和单独的一个或多个免疫抑制性化合物。
9.根据权利要求7至8中任一项所述的载体，其中所述一个或多个共表达元件是IRES元件或编码2A自剪切肽的核酸序列。
10.根据权利要求9所述的载体，其中所述一个或多个共表达元件引起第一多肽和所述一个或多个免疫抑制性化合物作为单独的转录物而转录。
11.根据权利要求10所述的载体，其中所述一个或多个共表达元件是a)双向启动子或是b)启动子，其中所述载体对于编码第一多肽和所述一个或多个免疫抑制性化合物的核酸序列中每一个包含单独的启动子。
12.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含自身抗原的一个或多个T细胞表位。
13.根据权利要求12所述的载体，其中所述抗原性单元包含一个或多个自身抗原的多个T细胞表位。
14.根据权利要求13所述的载体，其中所述一个或多个自身抗原选自由以下组成的组：与多发性硬化症有关的自身抗原、与1型糖尿病有关的自身抗原、与乳糜泻有关的自身抗原、与类风湿性关节炎有关的自身抗原、与慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经根神经病有关的自身抗原、与桥本氏甲状腺炎有关的自身抗原、与落叶型天疱疮有关的自身抗原、与寻常型天疱疮有关的自身抗原、与甲状腺眼病有关的自身抗原、与Grave病有关的自身抗原、与原发性胆汁性肝硬化有关的自身抗原、与重症肌无力有关的自身抗原、与胰岛素抵抗性糖尿病有关的自身抗原、与溶血性贫血有关的自身抗原和与银屑病有关的自身抗原。
15.根据权利要求1至12中任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含变应原的一个或多个T细胞表位。
16.根据权利要求15所述的载体，其中所述抗原性单元包含一个或多个变应原的多个T细胞表位。
17.根据权利要求16所述的载体，其中所述一个或多个变应原选自由以下组成的组：贝类变应原、牛乳变应原、蛋变应原、鱼类变应原、水果变应原、小麦变应原、花生变应原、木本坚果变应原、大豆变应原、籽实变应原、荞麦变应原、芹菜变应原、大蒜变应原、谷蛋白变应原、燕麦变应原、豆科植物变应原、玉米变应原、乳变应原、芥菜变应原、坚果变应原、家禽变应原、肉变应原、稻变应原、芝麻变应原、蜂毒液变应原、胡蜂变应原、乳胶变应原、尘螨变应原、昆虫变应原、霉菌变应原、真菌变应原、带毛动物变应原、花粉变应原和药物变应原。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含药物的药物变应原的一个或多个T细胞表位，所述药物选自因子VIII、胰岛素和治疗性单克隆抗体。
19.根据权利要求1至12中任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含同种异体抗原或异种抗原的一个或多个T细胞表位。
20.根据权利要求12所述的载体，其中所述抗原性单元包含一个或多个同种异体抗原的多个T细胞表位或者一个或多个异...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种载体，包含：
2.根据权利要求1所述的载体，其中所述一个或多个免疫抑制性化合物诱导免疫耐受性和/或增加免疫耐受性和/或维持免疫耐受性。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的载体，其中所述一个或多个免疫抑制性化合物是抑制性检查点分子的胞外部分，如胞外结构域。
4.根据权利要求3所述的载体，其中所述抑制性检查点分子选自由以下组成的组：clta-4、pd-1、btla、lag3、nox2、siglec7、siglec9和tim-3，优选地是选自由以下组成的组的人抑制性检查点分子：hclta-4、hpd-1、hbtla、hlag3、hnox2、hsiglec7、hsiglec9和htim-3。
5.根据权利要求1至2中任一项所述的载体，其中所述免疫抑制性化合物是选自由以下组成的组的细胞因子：il-10、tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、il-27、il-2、gm-csf、flt3l、ifn-γ、il-37和il-35，优选地是选自由以下组成的组的人细胞因子：hil-10、htgf-β1、htgf-β2、htgf-β3、hil-27、hil-2、hgm-csf、hflt3l、hifn-γ、hil-37和hil-35。
6.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述载体包含多个其他编码多于一个免疫抑制性化合物，如2、3、4、5、6、7或8个免疫抑制性化合物，如2、3、4、5、6、7或8个不同免疫抑制性化合物的核酸序列。
7.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述载体包含一个或多个共表达元件。
8.根据权利要求7所述的载体，其中所述一个或多个共表达元件引起在单一转录物上转录第一多肽和所述一个或多个免疫抑制性化合物以及独立翻译成单独的第一多肽和单独的一个或多个免疫抑制性化合物。
9.根据权利要求7至8中任一项所述的载体，其中所述一个或多个共表达元件是ires元件或编码2a自剪切肽的核酸序列。
10.根据权利要求9所述的载体，其中所述一个或多个共表达元件引起第一多肽和所述一个或多个免疫抑制性化合物作为单独的转录物而转录。
11.根据权利要求10所述的载体，其中所述一个或多个共表达元件是a)双向启动子或是b)启动子，其中所述载体对于编码第一多肽和所述一个或多个免疫抑制性化合物的核酸序列中每一个包含单独的启动子。
12.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含自身抗原的一个或多个t细胞表位。
13.根据权利要求12所述的载体，其中所述抗原性单元包含一个或多个自身抗原的多个t细胞表位。
14.根据权利要求13所述的载体，其中所述一个或多个自身抗原选自由以下组成的组：与多发性硬化症有关的自身抗原、与1型糖尿病有关的自身抗原、与乳糜泻有关的自身抗原、与类风湿性关节炎有关的自身抗原、与慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经根神经病有关的自身抗原、与桥本氏甲状腺炎有关的自身抗原、与落叶型天疱疮有关的自身抗原、与寻常型天疱疮有关的自身抗原、与甲状腺眼病有关的自身抗原、与grave病有关的自身抗原、与原发性胆汁性肝硬化有关的自身抗原、与重症肌无力有关的自身抗原、与胰岛素抵抗性糖尿病有关的自身抗原、与溶血性贫血有关的自身抗原和与银屑病有关的自身抗原。
15.根据权利要求1至12中任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含变应原的一个或多个t细胞表位。
16.根据权利要求15所述的载体，其中所述抗原性单元包含一个或多个变应原的多个t细胞表位。
17.根据权利要求16所述的载体，其中所述一个或多个变应原选自由以下组成的组：贝类变应原、牛乳变应原、蛋变应原、鱼类变应原、水果变应原、小麦变应原、花生变应原、木本坚果变应原、大豆变应原、籽实变应原、荞麦变应原、芹菜变应原、大蒜变应原、谷蛋白变应原、燕麦变应原、豆科植物变应原、玉米变应原、乳变应原、芥菜变应原、坚果变应原、家禽变应原、肉变应原、稻变应原、芝麻变应原、蜂毒液变应原、胡蜂变应原、乳胶变应原、尘螨变应原、昆虫变应原、霉菌变应原、真菌变应原、带毛动物变应原、花粉变应原和药物变应原。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含药物的药物变应原的一个或多个t细胞表位，所述药物选自因子viii、胰岛素和治疗性单克隆抗体。
19.根据权利要求1至12中任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含同种异体抗原或异种抗原的一个或多个t细胞表位。
20.根据权利要求12所述的载体，其中所述抗原性单元包含一个或多个同种异体抗原的多个t细胞表位或者一个或多个异种抗原的多个t细胞表位。
21.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含由t细胞表位接头分隔的多个不连续t细胞表位。
22.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述抗原性单元包含多个t细胞表位，所述多个t细胞表位是包含于一个或多个热点中的最小t细胞表位。
23.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述靶向单元是或包含与抗原呈递细胞上的表面分子相互作用而不活化所述细胞的部分。
24.根据前述权利要求任一项所述的载体，其中所述靶向单元是或包含与抗原呈递细胞上的表面分子相互作用而不诱导所述细胞熟化的部分。
25.根据权利要求23至24中任一项所述的载体，其中所述表面分子选自由以下组成的组：tgfβ受体如tgfβr1、tgfβr2和tgfβr3、il-10r如il-10ra和il-10rb、il-2r、il-4r、il-6r、il-11r、il-13r、il-27r、il-35r、il-37r、gm-csfr、flt3、ccr7、cd11b、cd11c、cd103、cd14、cd36、cd205、cd109、vista、marco、mhcii、cd83、siglec、clec10a(mgl)、asgr(asgr1/asgr2)、cd80、cd86、clec9a、clec12a、clec12b、dcir2、langerin、mr、dc-sign、treml4、dectin-1、pdl1、pdl2、hvem、cd163和cd141。
26.根据权利要求25所述的载体，其中所述表面分子是存在于人抗原呈递细胞上的表面分子，并且其中所述表面分子选自由以下组成的组：htgfβ受体如htgfβr1、htgfβr2和htgfβr3、hil-10r如hil-10ra和hil-10rb、hil-2r、hil-4r、hil...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿涅特·布伦斯维克·弗雷德里克森，A·T·H·伯萨斯，斯蒂因·格拉纳姆，H·迈塞特，
申请(专利权)人：耐考德治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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