【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本文提出的公开内容提供了通过包括在升压下使有机流与水性流正面碰撞的方法来产生脂质载体分散体(例如脂质体或脂质纳米颗粒)的方法。
技术介绍
1、制药和生物技术行业对能够安全且成功地为各种疾病应用(包括疫苗接种和基因治疗)提供活性药物成分(特别是核酸)的技术的需求日益增长和迫切。目前，该需求尚未得到完全满足，这从sars-cov-2疫苗供应能力的限制以及对腺病毒技术在人体应用的一些担忧可见一斑。
2、脂质载体(例如脂质纳米颗粒(lnp))及相关技术提供了经过验证、高效且安全的活性药物成分递送方法。lnp的主要问题之一是其商业化所需的足量生产和批次重现性标准。在lnp中递送活性药物成分有多种策略，其中射流撞击技术已成功应用于产生核酸疫苗，但其效率和效用还远未优化。
3、术语“脂质体”和“脂质纳米颗粒”(lnp)有时可以互换使用；然而，前者通常是指由磷脂组成并含有至少一个脂质双层的球形囊泡，而lnp的结构可能不太有序。lnp被描述为“新一代脂质体，具有更复杂的内部脂质结构，内部含水量低或极低，其非常适合稳定有效地包封各种遗传有效负载”。此外，还有其他脂质载体或脂质纳米颗粒结构，例如脂质复合物、脂多聚复合物、多层脂质体或固体脂质纳米颗粒。
4、脂质体被定义为纳米级囊泡结构，其粒径范围为30nm至数微米，由至少一个磷脂双层包围的水性核心组成。由于其尺寸以及疏水性和亲水性特征(除了生物相容性)，脂质体是有前景的药物递送系统。在脂质体中，水溶性药物可以被包封在水性核心中，而脂质双层负责捕获水不溶性药物。脂质体
5、已知难溶性活性药物成分的口服生物利用度可以通过减小活性药物成分的粒径来增加。此外，应用纳米技术对难溶性活性药物进行纳米尺寸化和/或包封，以及对水溶性活性药物进行包封，例如用于药物治疗。肠胃外施用在以下方面显示出优势：例如增加生物利用度、减少副作用、通过渗漏连接增强渗透来被动靶向肿瘤部位等。
6、在设计药品时，能够自由设定粒径是有利的，因为被动药物靶向成为可能。此外，药品，特别是当肠胃外施用时，必须是无菌的。因此，对于肠胃外产品，实现无菌过滤的小粒径是有用的。其他类型的灭菌(例如高压灭菌)很可能破坏脂质体，因此不使用。
7、脂质载体系统的产生采用多种技术。
8、已发现溶剂/非溶剂沉淀方法可用于产生纳米颗粒，特别是基于脂质的纳米颗粒。溶剂/非溶剂沉淀意指将物质溶解于溶剂中并作为液体射流与含有非溶剂的第二液体射流撞击，由此使溶解的物质沉淀。微射流反应器技术用于通过溶剂/非溶剂沉淀方法自动、连续地合成纳米颗粒。它创建了溶剂和非溶剂的湍流混合区，因此特别适合纳米范围内颗粒的沉淀。
9、ep 2395978 b1描述了根据ep 1 165 224 b1使用微射流反应器在表面活性分子存在下的溶剂/非溶剂沉淀。这种微射流反应器具有至少两个彼此相对定位的喷嘴(针孔)，其各自具有相关联的泵和进料管线，用于在由反应器壳体封闭的反应室中的共同碰撞点处喷射液体介质。反应器壳体中提供另一个开口，气体、蒸发液体、冷却液体或冷却气体可以通过该开口以维持反应室中的气体气氛或用于冷却。提供另一个开口用于从反应室中除去所得产物和过量气体。因此，将气体、蒸发液体或冷却气体通过开口引入反应室中，以维持反应器内部的气体气氛或冷却所得产物，并通过气体入口侧的过压或产物和气体出口侧的负压通过该开口将所得产物和过量气体从反应器中除去。如果在这种微射流反应器中进行溶剂/非溶剂沉淀，则获得沉淀颗粒的分散体。
10、特别是对于脂质纳米颗粒的商业应用，例如对于治疗方法或疫苗接种，提供可以轻松扩大规模并快速产生期望产品的稳健产生方法非常重要。此外，产生过程能够适应产品开发过程或升级过程中可能出现的不同需求和要求也很重要。由于脂质纳米颗粒可能是核酸或核酸构建体的合适载体或递送载体，其可能与治疗应用(例如疫苗接种和基因治疗)相关，因此产生过程也必须适合处理这些类型的活性成分和分子。
11、因此，本专利技术的目的是提供用于产生基于脂质的纳米颗粒的方法，该方法在适应不同种类的产品方面具有灵活性，并且能够稳健、快速且可靠地产生期望的产品。另一个目的是提供用于产生基于脂质的纳米颗粒的方法，该方法对于工艺开发是通用的。还一个目的是提供基于使用撞击反应器来产生所述颗粒的方法，该方法可以克服现有技术中射流撞击反应器的一个或更多个缺点或限制。基于本专利技术的以下描述、实施例和权利要求，本专利技术的进一步的目的将变得清楚。
技术实现思路
1、在第一方面，本专利技术涉及用于产生包含至少一种两亲性脂质的纳米颗粒分散体的方法，其中该方法包括以下步骤：a)提供第一流，该第一流包含有机溶剂和至少两亲性脂质；b)提供第二流，该第二流包含水性溶剂；c)在升压下将第一流泵送通过第一喷嘴并且在升压下将第二流泵送通过第二喷嘴进入反应室；其中第一喷嘴与第二喷嘴成约180°的角度定位；d)使第一流和第二流在反应室中正面碰撞；和其中第一流与第二流之间的流量比在约1:1.5至低于约1:4.5的范围内。
2、在另一方面，本文公开了通过本专利技术的第一方面的方法产生的纳米颗粒分散体。
3、在另一方面，本文公开了包含通过本专利技术的第一方面的方法产生的纳米颗粒分散体的药物组合物。
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1.一种用于产生包含至少一种两亲性脂质的纳米颗粒分散体的方法，其中所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一流与所述第二流之间的流量比在1:1.5至1:4、或1:2至1:4.5、或1:2至1:4的范围内，或其中所述第一流与所述第二流之间的流量比为约1:1.5、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4或1:4.5。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述总流量在1ml/min至1,000ml/min、或5ml/min至800ml/min的范围内。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述总流量在100ml/min至500ml/min的范围内，并且其中所述第一流与所述第二流之间的流量比在1:1.2至1:2.5的范围内，或在1:2至1:4的范围内。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述第一喷嘴包含第一开口并且所述第二喷嘴包括第二开口，其中所述第一开口和所述第二开口的直径在40μm至800μm的范围内。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述第一开口或所述第二开口的直径比
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一流的压力低于或等于所述第二流的压力。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒选自由单层脂质体、多层脂质体、单双层脂质体、双双层脂质体、多囊泡脂质体、脂质纳米颗粒、脂质复合物和脂多聚复合物的组。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述两亲性脂质选自以下的组：脂肪酸、甘油脂、甘油单酯、甘油二酯、甘油磷脂、磷脂、磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱(SPC)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、鞘脂、甾醇、胆固醇、异戊烯醇、类胡萝卜素、视黄醇、视黄醛、视黄酸、β-胡萝卜素、生育酚、糖脂、LIPOID S100、聚乙二醇化脂质和1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇(DMG-PEG)。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述第一流进一步包含至少一种另外的两亲性脂质。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一流包含两亲性脂质或选自以下的脂质的组合：脂肪酸、甘油脂、甘油单酯、甘油二酯、甘油磷脂、磷脂、磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱(SPC)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、鞘脂、甾醇、胆固醇、异戊烯醇、类胡萝卜素、视黄醇、视黄醛、视黄酸、β-胡萝卜素、生育酚、糖脂、LIPOID S100、聚乙二醇化脂质、1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇(DMG-PEG)及其任何组合。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一流包含聚乙二醇化脂质、胆固醇和阳离子脂质以及磷脂。
13.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述第一流包含有机溶剂，所述有机溶剂选自醇、酮、卤化溶剂、酰胺或醚；任选地其中所述溶剂是醇，优选乙醇。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述第一流包含浓度在0.1mol％至2mol％范围内的聚乙二醇化脂质。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述第一流或所述第二流进一步包含活性药物成分。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述活性药物成分选自小分子、肽和核酸的组。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述第二流进一步包含核酸，优选地选自由DNA和RNA组成的组，任选地其中所述RNA选自由mRNA、miRNA、pre-miRNA、saRNA、shRNA、siRNA、核酶和反义核糖核酸组成的组；并且进一步任选地来自编码抗原的DNA和mRNA。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，进一步包括以下步骤：
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒的平均粒径为20nm至100nm。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，包括提供射流撞击反应器的步骤，所述射流撞击反应器包含所述反应室、所述第一喷嘴和所述第二喷嘴。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述第一喷嘴和所述第二喷嘴中的每一个与进料管线连接，并且其中每个进料管线任选地与泵相关联，所述泵被布置成将在升压下的所述第一流和所述第二流提供至相应的喷嘴。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个流的压力独立地选自0.1至120bar范围内的值，并且任选地选自1至40bar范围内的值。
23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中反应室(6)由反应室壁(3)的内表面(2)限定，...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于产生包含至少一种两亲性脂质的纳米颗粒分散体的方法，其中所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一流与所述第二流之间的流量比在1:1.5至1:4、或1:2至1:4.5、或1:2至1:4的范围内，或其中所述第一流与所述第二流之间的流量比为约1:1.5、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4或1:4.5。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述总流量在1ml/min至1,000ml/min、或5ml/min至800ml/min的范围内。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述总流量在100ml/min至500ml/min的范围内，并且其中所述第一流与所述第二流之间的流量比在1:1.2至1:2.5的范围内，或在1:2至1:4的范围内。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述第一喷嘴包含第一开口并且所述第二喷嘴包括第二开口，其中所述第一开口和所述第二开口的直径在40μm至800μm的范围内。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述第一开口或所述第二开口的直径比另一个开口的直径大至少约50％。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第一流的压力低于或等于所述第二流的压力。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒选自由单层脂质体、多层脂质体、单双层脂质体、双双层脂质体、多囊泡脂质体、脂质纳米颗粒、脂质复合物和脂多聚复合物的组。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述两亲性脂质选自以下的组：脂肪酸、甘油脂、甘油单酯、甘油二酯、甘油磷脂、磷脂、磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱(spc)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、鞘脂、甾醇、胆固醇、异戊烯醇、类胡萝卜素、视黄醇、视黄醛、视黄酸、β-胡萝卜素、生育酚、糖脂、lipoid s100、聚乙二醇化脂质和1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇(dmg-peg)。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述第一流进一步包含至少一种另外的两亲性脂质。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一流包含两亲性脂质或选自以下的脂质的组合：脂肪酸、甘油脂、甘油单酯、甘油二酯、甘油磷脂、磷脂、磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱(spc)、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、鞘脂、甾醇、胆固醇、异戊烯醇、类胡萝卜素、视黄醇、视黄醛、视黄酸、β-胡萝卜素、生育酚、糖脂、lipoid s100、聚乙二醇化脂质、1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇(dmg-peg)及其任何组合。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一流包含聚乙二醇化脂质、胆固醇和阳离子脂质以及磷脂。
13.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述第一流包含有机溶剂，所述有机溶剂选自醇、酮、卤化溶剂、酰胺或醚；任选地其中所述溶剂是醇，优选乙醇。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述第一流包含浓度在0.1mol％至2mol％范围内的聚乙二醇化脂质。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述第一流或所述第二流进一步包含活性药物成分。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述活性药物成分选自小分子、肽和核酸的组。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述第二流进一步包含核酸，优选地选自由dna和rna组成的组，任选地其中所述rna选自由mrna、mirna、pre-mirna、sarna、shrna、sirna、核酶和反义核糖核酸组成的组；并且进一步任选地来自编码抗原的dna和mrna。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，进一步包括以下步骤：
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒的平均粒径为20nm至100nm。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，包括提供射流撞击反应器的步骤，...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·杜比埃拉，J·沃格勒，P·克莱蒙特，F·斯蒂内克尔，
申请(专利权)人：莱昂纳米药物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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