【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、雌激素受体(er)是一种配体依赖性转录因子，它结合内源性激素配体(诸如雌激素和雌二醇)。结合至er的合成配体已经被开发用于治疗er阳性癌症(诸如er阳性乳腺癌)。例如，药物他莫昔芬的活性代谢物诱导er的核易位并且以组织选择性方式拮抗er。他莫昔芬及其活性代谢物也被用作研究环境中控制核定位的工具。例如，称为ert2的er配体结合结构域变体已经被广泛用作具有cre重组酶的融合蛋白，该cre重组酶调控动物模型系统中的基于cre重组酶的基因编辑。使用合成配体来操纵核定位的能力也可用于治疗应用，诸如用于治疗性基因的调控。因此，具有改善的针对合成配体的敏感性和/或选择性的基于ert2的系统可用于在临床环境中采用基于ert2的基因调控。
技术实现思路
1、在一些实施方案中，本文提供了具有改善的针对非内源性配体(诸如他莫昔芬及其代谢物)的敏感性和/或选择性的经修饰的雌激素受体配体结合结构域(er-lbd)。在一些实施方案中，本文还提供了包含如本文所述的经修饰的er-lbd的嵌合蛋白，基因开关，编码如本文所述的经修饰的er-lbd和嵌合蛋白的多核苷酸分子，编码如本文所述的多核苷酸分子或表达如本文所述的经修饰的er-lbd和嵌合蛋白的细胞，以及如本文所述的经修饰的er-lbd、嵌合蛋白、多核苷酸分子、基因开关或细胞的使用方法。
2、与ert2相比，本文所述的经修饰的er-lbd和嵌合蛋白具有更高的针对非内源性配体(例如，4-羟基他莫昔芬，也称为“4-oht”)的敏感性和/或
3、本文提供了经修饰的雌激素受体配体结合结构域(er-lbd)，所述经修饰的er-lbd包含对应于seq id no:1的氨基酸282-595的氨基酸序列，其中所述经修饰的er-lbd包含g400v氨基酸取代、m543a氨基酸取代和l544a氨基酸取代以及一个或多个另外的氨基酸取代，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代在seq id no:1的区域内，所述区域选自由以下组成的组：位置343-354、位置380-392、位置404-463和位置517-540以及位置547，并且其中与包含seq id no:2的氨基酸序列的er-lbd相比，或者由于一个或多个另外的氨基酸取代，与内源性配体相比，经修饰的er-lbd具有更高的针对非内源性配体的敏感性和/或选择性。在一些方面，经修饰的er-lbd还包含v595a氨基酸取代。在一些方面，非内源性配体选自由以下组成的组：4-羟基他莫昔芬、n-去甲基他莫昔芬、他莫昔芬-n-氧化物和因多昔芬。
4、在一些方面，所述一个或多个另外的氨基酸取代处于seq id no:1的一个或多个位置，所述一个或多个位置选自由以下组成的组：343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、354、380、384、386、387、388、389、391、392、404、407、409、413、414、417、418、420、421、422、424、428、463、517、521、522、524、525、526、527、528、533、534、536、537、538、539、540和547。
5、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置343。在一些方面，seqid no:1的位置343处的氨基酸取代选自由以下组成的组：m343f、m343i、m343l和m343v。
6、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置344。在一些方面，seqid no:1的位置344处的氨基酸取代是g344m。
7、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置345。在一些方面，seqid no:1的位置345处的氨基酸取代是l345s。
8、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置346。在一些方面，seqid no:1的位置346处的氨基酸取代选自由以下组成的组：l346i、l346m、l346f和l346v。
9、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置347。在一些方面，seqid no:1的位置347处的氨基酸取代选自由以下组成的组：t347d、t347e、t347f、t347i、t347k、t347l、t347m、t347n、t347q、t347r、t347s和t347v。
10、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置348。在一些方面，seqid no:1的位置348处的氨基酸取代是n348k。
11、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置349。在一些方面，seqid no:1的位置349处的氨基酸取代选自由以下组成的组：l349i、l349m、l349f和l349v。
12、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置350。在一些方面，seqid no:1的位置350处的氨基酸取代选自由以下组成的组：a350f、a350i、a350l、a350m和a350v。
13、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置351。在一些方面，seqid no:1的位置351处的氨基酸取代选自由以下组成的组：d351e、d351f、d351i、d351l、d351m、d351n、d351q和d351v。
14、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置352。在一些方面，seqid no:1的位置352处的氨基酸取代是r352k。
15、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置354。在一些方面，seqid no:1的位置354处的氨基酸取代选自由以下组成的组：l354i、l354m、l354f和l354v。
16、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置380。在一些方面，seqid no:1的位置380处的氨基酸取代是e380q。
17、在一些方面，所述一个或多个位置包括seq id no:1的位置384。在一些方面，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种经修饰的雌激素受体配体结合结构域(ER-LBD)，所述经修饰的ER-LBD包含对应于SEQ ID NO:1的氨基酸282-595的氨基酸序列，其中所述经修饰的ER-LBD包含G400V氨基酸取代、M543A氨基酸取代和L544A氨基酸取代以及一个或多个另外的氨基酸取代，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代在SEQ ID NO:1的区域内，所述区域选自由以下组成的组：位置343-354、位置380-392、位置404-463和位置517-540以及位置547，并且其中与包含SEQID NO:2的氨基酸序列的ER-LBD相比，或者由于所述一个或多个另外的氨基酸取代，与内源性配体相比，所述经修饰的ER-LBD具有更高的针对非内源性配体的敏感性和/或选择性，
2.如权利要求1所述的经修饰的ER-LBD，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代处于SEQ ID NO:1的一个或多个位置，所述一个或多个位置选自由以下组成的组：343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、354、380、384、386、387、388、389、391、392、40
3.如权利要求2所述的经修饰的ER-LBD，其中：
4.如权利要求1至3中任一项所述的经修饰的ER-LBD，其中：
5.一种嵌合蛋白，所述嵌合蛋白包含融合至如权利要求1至4中任一项所述的经修饰的ER-LBD的所关注的多肽，
6.一种分离的多核苷酸分子，所述分离的多核苷酸分子包含编码如权利要求1至4中任一项所述的经修饰的ER-LBD或编码如权利要求5所述的嵌合蛋白的核苷酸序列。
7.一种异源性构建体，所述异源性构建体包含可操作地连接至如权利要求6所述的多核苷酸分子的启动子。
8.一种质粒，所述质粒包含如权利要求7所述的异源性构建体。
9.一种细胞，所述细胞包含如权利要求7所述的异源性构建体或如权利要求8所述的质粒。
10.一种用于调控所关注的基因的转录的基因开关，所述基因开关包含：
11.如权利要求10所述的基因开关，其中：
12.一种调控所关注的基因的转录的方法，所述方法包括：用(i)编码如权利要求5所述的嵌合蛋白的异源性构建体和(ii)包含嵌合转录因子响应性(CTF响应性)启动子的靶标表达盒来转化细胞，所述启动子可操作地连接至所述所关注的基因，以及通过使经转化的细胞与非内源性配体接触来诱导所述嵌合蛋白调控所述所关注的基因的转录，
13.一种调控嵌合蛋白的定位的方法，所述方法包括用编码如权利要求5所述的嵌合蛋白的异源性构建体来转化细胞，以及通过使经转化的细胞与非内源性配体接触来诱导所述嵌合蛋白的核定位，
14.如权利要求12或权利要求13所述的方法，其中所述经转化的细胞在人或动物中，并且其中使所述经转化的细胞与所述非内源性配体接触包括将药理学剂量的所述配体施用于所述人或动物。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述非内源性配体以所述非内源性配体对SEQ IDNO:1的野生型雌激素受体α基本上无活性的浓度施用。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种经修饰的雌激素受体配体结合结构域(er-lbd)，所述经修饰的er-lbd包含对应于seq id no:1的氨基酸282-595的氨基酸序列，其中所述经修饰的er-lbd包含g400v氨基酸取代、m543a氨基酸取代和l544a氨基酸取代以及一个或多个另外的氨基酸取代，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代在seq id no:1的区域内，所述区域选自由以下组成的组：位置343-354、位置380-392、位置404-463和位置517-540以及位置547，并且其中与包含seqid no:2的氨基酸序列的er-lbd相比，或者由于所述一个或多个另外的氨基酸取代，与内源性配体相比，所述经修饰的er-lbd具有更高的针对非内源性配体的敏感性和/或选择性，
2.如权利要求1所述的经修饰的er-lbd，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代处于seq id no:1的一个或多个位置，所述一个或多个位置选自由以下组成的组：343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、354、380、384、386、387、388、389、391、392、404、407、409、413、414、417、418、420、421、422、424、428、463、517、521、522、524、525、526、527、528、533、534、536、537、538、539、540和547。
3.如权利要求2所述的经修饰的er-lbd，其中：
4.如权利要求1至3中任一项所述的经修饰的er-lbd，其中：
5.一种嵌合蛋白，所述嵌合蛋白包含融合至如权利要求1至4中任一项所述的经修饰的er...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·E·鸿，R·T·科特曼，R·M·格德莱，G·李，T·KT·卢，S·卡南，C·S·维玛，
申请(专利权)人：森迪生物科学公司，
类型：发明
国别省市：
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