药物可调控的转录因子制造技术

本文提供了能够被同源配体

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】药物可调控的转录因子
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求
2021
年4月
19
日提交的美国临时申请第
63/176,801
号和
2021
年4月
19
日提交的美国临时申请第
63/176,848
号的权益和优先权，每一个申请据此以全文引用的方式并入用于所有目的
。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，该序列表已经由
EFS
‑
Web
提交并且据此通过引用以其整体并入
。
所述
ASCII
副本创建于
20XX
年
XX
月
XX
日，命名为
XXXXXUS_sequencelisting.txt
，大小为
X,XXX,XXX
字节
。


[0005]本申请涉及可以被同源配体
(
例如，咖啡因
、
大麻素
、
尼古丁
、
雷帕霉素
(rapamycin)
或米非司酮
(mifepristone))
激活的合成诱导型转录因子以及表达诱导型转录因子的分离的细胞
。
还提供了使用诱导型转录因子调节目标基因的转录的方法
。

技术介绍

[0006]目前可用的细胞和基因治疗产品可能缺乏表达控制，导致安全性问题，诸如接受此类治疗的受试者体内的毒性
。
因此，这些疗法需要额外的表达控制和调控方法
。

技术实现思路

[0007]在一个方面，本文提供了一种包含诱导型转录因子
(ITF)
的工程化细胞，其中所述
ITF
包含：第一单体，其中所述第一单体包含
DNA
结合结构域和第一配体结合结构域；以及
[0008]第二单体，其中所述第二单体包含转录效应子结构域和第二配体结合结构域，其中每个单体能够经由与每个配体结合结构域结合的同源配体而寡聚化，其中配体诱导的寡聚化形成所述
ITF
，其中所述同源配体选自由以下组成的组：咖啡因
、
大麻二酚
(CBD)、
植物大麻素和尼古丁，任选地其中所述
DNA
结合结构域包含锌指
(ZF)
蛋白结构域，任选地其中每个配体结合结构域包含单结构域抗体，其中所述单结构域抗体包含
V
H
H
，并且任选地其中所述
ITF
能够调节与
ITF
反应性启动子可操作地连接的目标基因的转录
。
[0009]在一些实施方案中，
[0010]a.
所述
V
H
H
是抗咖啡因
V
H
H(ac V
H
H)
，任选地其中所述抗咖啡因
V
H
H(ac V
H
H)
包含
SEQ ID NO:52
的氨基酸序列，并且
/
或者任选地其中所述第一配体结合结构域和所述第二配体结合结构域中的每一个包含所述
ac V
H
H
；或者
[0011]b.
所述同源配体是大麻二酚或植物大麻素，并且所述
V
H
H
包含选自由
SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56
和
SEQ ID NO:57(
分别为
CA
‑
14、DB
‑
6、DB
‑
11、DB
‑
18
和
DB
‑
21)
组成的组的氨基酸序列，任选地其中所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的一个包含含有
SEQ ID NO:53(CA
‑
14)
的氨基酸序列的
V
H
H
，并且所述第一结合结构域或所述第二结合结构域中的另一个包含含有选自由以下组成的组的氨基
ID NO:3
和
SEQ ID NO:4
；并且
/
或者
[0023]b.
所述第二单体还包含核输出信号
(NES)
，任选地其中所述
NES
包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：
SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13
和
SEQ ID NO:14。
[0024]在另一方面，本文提供了一种包含诱导型转录因子
(ITF)
的工程化细胞，其中所述
ITF
包含
DNA
结合结构域
、
转录效应子结构域和配体结合结构域，其中所述
ITF
在所述配体结合结构域与所述同源配体结合时经历核定位，其中当定位于细胞核时，所述
ITF
能够调节与
ITF
反应性启动子可操作地连接的目标基因的转录，其中所述同源配体是米非司酮或其衍生物，任选地其中所述配体结合结构域包含孕酮受体结构域，并且所述孕酮受体结构域包含
SEQ ID NO:68
的氨基酸序列，任选地其中所述
DNA
结合结构域包含锌指
(ZF)
蛋白结构域，任选地其中所述
ITF
还包含位于所述
DNA
结合结构域和所述转录效应子结构域之间的肽接头，任选地其中所述
DNA
结合结构域与所述
ITF
反应性启动子结合，并且任选地其中所述细胞还包含表达盒，所述表达盒包含与编码所述目标基因的外源多核苷酸序列可操作地连接的所述
ITF
反应性启动子，任选地其中所述
ITF
反应性启动子包含
ITF
结合结构域序列和核心启动子序列，任选地其中所述核心启动子序列包含最小启动子，并且所述最小启动子选自由以下组成的组：
minP、minCMV、YB_TATA、minTATA
和
minTK
，或者其中所述核心启动子序列源自组成型启动子，并且所述核心启动子序列源自选自由以下组成的组的组成型启动子：
CMV、EFS、SFFV、SV40、MND、PGK、UbC、EF1a、hCAGG、hACTb、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种包含诱导型转录因子
(ITF)
的工程化细胞，其中所述
ITF
包含：第一单体，其中所述第一单体包含
DNA
结合结构域和第一配体结合结构域；以及第二单体，其中所述第二单体包含转录效应子结构域和第二配体结合结构域，其中每个单体能够经由与每个配体结合结构域结合的同源配体寡聚化，其中配体诱导的寡聚化形成所述
ITF
，其中所述同源配体选自由以下组成的组：咖啡因
、
大麻二酚
(CBD)、
植物大麻素和尼古丁，任选地其中所述
DNA
结合结构域包含锌指
(ZF)
蛋白结构域，任选地其中每个配体结合结构域包含单结构域抗体，其中所述单结构域抗体包含
V
H
H
，并且任选地其中所述
ITF
能够调节与
ITF
反应性启动子可操作地连接的目标基因的转录
。2.
如权利要求1所述的工程化细胞，其中：
a.
所述
V
H
H
是抗咖啡因
V
H
H(ac V
H
H)
，任选地其中所述抗咖啡因
V
H
H(ac V
H
H)
包含
SEQ ID NO:52
的氨基酸序列，并且
/
或者任选地其中所述第一配体结合结构域和所述第二配体结合结构域中的每一个包含所述
ac V
H
H
；或者
b.
所述同源配体是大麻二酚或植物大麻素，并且所述
V
H
H
包含选自由
SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56
和
SEQ IDNO:57(
分别为
CA
‑
14、DB
‑
6、DB
‑
11、DB
‑
18
和
DB
‑
21)
组成的组的氨基酸序列，任选地其中所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的一个包含含有
SEQ ID NO:53(CA
‑
14)
的氨基酸序列的
V
H
H
，并且所述第一结合结构域或所述第二结合结构域中的另一个包含含有选自由以下组成的组的氨基酸序列的
V
H
H
：
SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56
和
SEQID NO:57(
分别为
DB
‑
6、DB
‑
11、DB
‑
18
和
DB
‑
21)
，任选地其中所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的一个包含含有
SEQ ID NO:53(CA
‑
14)
的氨基酸序列的
V
H
H
，并且所述第一结合结构域或所述第二结合结构域中的另一个包含含有选自由以下组成的组的氨基酸序列的
V
H
H
：
SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56
和
SEQ ID NO:57(
分别为
DB
‑
6、DB
‑
11、DB
‑
18
和
DB
‑
21)
，任选地其中所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的一个包含含有
SEQ ID NO:53(CA
‑
14)
的氨基酸序列的
V
H
H
，并且所述第一结合结构域或所述第二结合结构域中的另一个包含含有
SEQ ID NO:57(DB
‑
21)
的氨基酸序列的
V
H
H
：或者
c.
每个配体结合结构域包含抗尼古丁抗体重链可变结构域
(
抗
Nic VH)
或抗尼古丁抗体轻链可变结构域
(
抗
Nic VL)
，任选地其中所述抗
Nic VH
包含
SEQ ID NO:58
的氨基酸序列，并且所述抗
Nic VL
包含
SEQ ID NO:59
的氨基酸序列，任选地其中所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的一个包含所述抗
Nic VH
，并且所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的另一个包含所述抗
Nic VL。3.
一种包含诱导型转录因子
(ITF)
的工程化细胞，其中所述
ITF
包含：第一单体，其中所述第一单体包含
DNA
结合结构域和第一配体结合结构域；以及第二单体，其中所述第二单体包含转录效应子结构域和第二配体结合结构域，其中每个单体能够经由与每个配体结合结构域结合的同源配体的结合而寡聚化，其中配体诱导的寡聚化形成所述
ITF
，其中所述
DNA
结合结构域包含锌指
(ZF)
蛋白结构域，所述锌指蛋白结构域是模块化的
并且包含六个
ZF
基序的阵列，其中所述同源配体选自由以下组成的组：雷帕霉素
、AP1903、AP20187、FK1012、
其衍生物及其类似物，任选地其中所述
ITF
能够调节与
ITF
反应性启动子可操作地连接的目标基因的转录
。4.
如权利要求3所述的工程化细胞，其中：
a.
所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的一个包含
FKBP
结构域，并且所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的另一个包含
FRB
结构域，任选地其中所述
FKBP
包含
SEQ ID NO:60
的氨基酸序列，任选地其中所述
FRB
结构域包含
SEQ ID NO:61
的氨基酸序列；或者
b.
所述第一配体结合结构域包含所述
FKBP
结构域，并且所述第二配体结合结构域包含所述
FRB
结构域，任选地其中所述
FKBP
包含
SEQ ID NO:60
的氨基酸序列，任选地其中所述
FRB
结构域包含
SEQ ID NO:61
的氨基酸序列；或者
c.
所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的一个包含所述
FRB
结构域，并且所述第一配体结合结构域或所述第二配体结合结构域中的另一个包含所述
FKBP
结构域，任选地其中所述
FKBP
包含
SEQ ID NO:60
的氨基酸序列，任选地其中所述
FRB
结构域包含
SEQ ID NO:61
的氨基酸序列；或者
d.
所述第一配体结合结构域包含所述
FRB
结构域，并且所述第二配体结合结构域包含所述
FKBP
结构域，任选地其中所述
FKBP
包含
SEQ ID NO:60
的氨基酸序列，任选地其中所述
FRB
结构域包含
SEQ ID NO:61
的氨基酸序列
。5.
如权利要求1至4中任一项所述的工程化细胞，其中：
a.
所述第一单体和
/
或所述第二单体还包含核定位信号
(NLS)
，任选地其中所述
NLS
包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：
SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3
和
SEQ ID NO:4
；并且
/
或者
b.
所述第二单体还包含核输出信号
(NES)
，任选地其中所述
NES
包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：
SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13
和
SEQ ID NO:14。6.
一种包含诱导型转录因子
(ITF)
的工程化细胞，其中所述
ITF
包含
DNA
结合结构域
、
转录效应子结构域和配体结合结构域，其中所述
ITF
在所述配体结合结构域与同源配体结合时经历核定位，其中当定位于细胞核时，所述
ITF
能够调节与
ITF
反应性启动子可操作地连接的目标基因的转录，其中所述同源配体是米非司酮或其衍生物，任选地其中所述配体结合结构域包含孕酮受体结构域，并且所述孕酮受体结构域包含
SEQ ID NO:68
的氨基酸序列，任选地其中所述
DNA
结合结构域包含锌指
(ZF)
蛋白结构域，任选地其中所述
ITF
还包含所述
DNA
结合结构域和所述转录效应子结构域之间的肽接头，任选地其中所述
DNA
结合结构域与所述
ITF
反应性启动子结合，并且任选地其中所述细胞还包含表达盒，所述表达盒包含与编码所述目标基因的外源多核
苷酸序列可操作地连接的所述
ITF
反应性启动子，任选地其中所述
ITF
反应性启动子包含
ITF
结合结构域序列和核心启动子序列，任选地其中所述核心启动子序列包含最小启动子，并且所述最小启动子选自由以下组成的组：
minP、minCMV、YB_TATA、minTATA
和
minTK
，或者其中所述核心启动子序列源自组成型启动子，并且所述核心启动子序列源自选自由以下组成的组的组成型启动子：
CMV、EFS、SFFV、SV40、MND、PGK、UbC、EF1a、hCAGG、hACTb、heIF4A1、hGAPDH、hGRP78、hGRP94、hHSP70、hKINb
和
hUBIb。7.
如权利要求1至6中任一项所述的工程化细胞，其中：
a.
所述
ZF
蛋白结构域在设计上是模块化的，并且由一个或多个锌指阵列
(ZFA)
构成；
b.
所述
ZF
蛋白结构域包含一至十个锌指基序的阵列；并且
/
或者
c.
所述
ZF
蛋白结构域包含六个锌指基序的阵列
。8.
如权利要求1至7中任一项所述的工程化细胞，其中：
a.
所述转录效应子结构域包含转录激活结构域，任选地其中所述转录激活结构域选自由以下组成的组：单纯疱疹病毒蛋白
16(VP16)
激活结构域；包含
VP16
的四个串联拷贝的激活结构域；
VP64
激活结构域；
NF
κ
B
的
p65
激活结构域；爱泼斯坦
‑
巴尔病毒
R
反式激活因子
(Rta)<...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：森迪生物科学公司，
类型：发明
国别省市：