抗人制造技术

本发明专利技术提供了抗人

【技术实现步骤摘要】
抗人PD
‑
1鼠单抗及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于抗体领域，具体涉及抗人
PD
‑1鼠单抗及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]程序性死亡受体
‑
1(Programmed death
‑1，
PD
‑
1)
，作为免疫球蛋白超家族中的一员，是一个重要的负性共刺激分子
。
研究表明，
PD
‑1通过向下调节免疫系统对人体细胞的反应，以及通过抑制
T
细胞炎症活动来调节免疫系统并促进自身耐受，在调节
T
细胞衰竭中起核心作用
。
在正常的情况下，
PD
‑
1/PD
‑
L1
免疫检查点的激活可以通过抑制
T
细胞活化而避免自身免疫性疾病的发生，然而，肿瘤细胞表面的
PD
‑
L1
能够与肿瘤浸润
T
细胞表面的
PD
‑1结合，抑制
T
细胞的活化，导致
T
细胞无法识别肿瘤细胞，进而使肿瘤细胞逃避机体免疫系统的监视和杀伤
。PD
‑1不仅在
T
细胞上表达，还在
NK
细胞
、B
淋巴细胞
、
巨噬细胞和树突状细胞上表达
。
[0003]PD
‑1与其配体<br/>PD
‑
L1、PD
‑
L2
相结合，发挥负性调控作用，参与维持机体免疫稳态
。PD
‑
1/PD
‑
Ls
是维持机体免疫平衡的重要机制，也是移植免疫
、
炎症
、
自身免疫性疾病
(I
型糖尿病
、
类风湿性关节炎
、
系统性红斑狼疮等
)、
免疫缺陷性疾病
(
反复肺部肠腔感染等
)、
神经系统疾病
(
缺血性脑卒中
、
多发性硬化症
、
阿尔茨海默症等
)、
慢性病毒感染疾病
(
肺结核
、
乙型肝炎等
)、
肿瘤
(
非小细胞肺癌
、
霍奇金氏淋巴瘤
、
黑色素瘤等
)
等疾病病理过程研究
、
诊断和治疗的重要靶点
[1
‑
3]。
[0004]PD
‑1单克隆抗体作为免疫抑制剂，相比于甾体类激素等常规免疫抑制药物，因其应答之广度
、
深度
、
持久性
、
毒副作用小等优点，成为了近年研究的一大热点
。
目前
PD
‑1单克隆抗体在临床，尤其是在肿瘤自身免疫性疾病治疗中的作用正得到越来越多的关注，已经获得了初步的进展
。
抗
PD
‑1单克隆抗体的独特性和众多优点将使之成为治疗自身免疫性疾病更好的手段和方法
。
[0005]杂交瘤制备技术不仅在生物学和免疫学基础研究中具有重要的价值，而且在实践中的应用范围亦极为广泛
。
然而在利用杂交瘤制备技术制备抗体时，由于杂交瘤不稳定，抗体基因容易丢失，并且传统的杂交瘤制备技术不会对目标抗体的基因序列及蛋白序列进行鉴定，不利于对目标抗体后续的生产
、
制备及研发工作
。
基因工程方法可以很好地解决杂交瘤方法中的问题，并且通过基因工程技术的改造，可以降低甚至消除人体对抗体的排斥反应，基因工程抗体的分子量较小，可以部分降低抗体的鼠源性，更有利于穿透血管壁，进入病灶的核心部位
。
然而通过基因工程方法进行抗体的制备必需的条件是明确抗体的序列，因此，挖掘更适用于
PD
‑1检测的单克隆抗体是当前更为合适的研发方向
。
[0006][1]Kuol N,Stojanovska L,Nurgali K,Apostolopoulos V.PD
‑
1/PD
‑
L1 in disease.Immunotherapy[J].2018 Feb
；
10(2):149
‑
160.
[0007][2]Ghosh C,Luong G,Sun Y.A snapshot of the PD
‑
1/PD
‑
L1 pathway[J].Cancer.2021 Mar 5
；
12(9):2735
‑
2746.
[0008][3]郑小翠
.
鼠抗人
PD
‑1单克隆抗体研制及其生物学功能鉴定
[D].
苏州大学
,
2018.

技术实现思路

[0009]针对上述不足，本专利技术提供了两种新的抗人
PD
‑1鼠单抗，并通过设计基因与蛋白序列，建立该基因的稳转
CHO
细胞株进行重组表达，经验证，表达纯化的抗体能够特异性识别人
PD
‑1抗原，抗体表达产量达到
g/L
级别，远远高于传统的杂交瘤细胞制备抗体的产量
。
[0010]术语：
[0011]本专利技术中，氨基酸包含天然氨基酸
、
合成氨基酸
、
以及以类似于天然氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物
。
天然氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸
。
氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构
。
氨基酸在本文中可以由其通常已知的三字母符号或由
IUPAC
‑
IUB
生物化学命名法委员会所推荐的单字母符号来提及
。
[0012]本专利技术中，互补决定区，本文中又称
CDR。
本文中公开的互补决定区指抗体的重链或轻链可变区内的抗原结合点，即抗体中引起抗原结合的氨基酸残基
。
轻链和重链的互补决定区共同组成抗体的抗原结合部位
。
通常而言，抗体的轻链或重链的通常包含3个决定簇互补区
。
本文中的互补决定区指重链的互补决定区时，简称为
HCDR
，并以数字指代3个不同的互补决定区，例如
HCDR1、HCDR2、HCDR3。
本文中的互补决定区指轻链的互补决定区时，简称为
LCDR
，并以数字指代3个不同的互补决定区，例如
LCDR1、LCDR2、LC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗
PD
‑1抗体，其特征在于，所述的抗体包括重链和轻链，所述的重链包括重链互补决定区，所述的轻链包括轻链互补决定区，其中：所述的抗体重链互补决定区包括如
SEQ ID NO
：
1、SEQ ID NO
：2和
SEQ ID NO
：3所示的
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
；所述抗体的轻链可变区包括如
SEQ ID NO
：
4、SEQ ID NO
：5和
SEQ ID NO
：6所示的
LCDR1、LCDR2
和
LCDR3
；或者，所述的抗体重链互补决定区包括如
SEQ ID NO
：
7、SEQ ID NO
：8和
SEQ ID NO
：9所示的
HCDR1、HCDR2
和
HCDR3
；所述抗体的轻链可变区包括如
SEQ ID NO
：
10、SEQ ID NO
：
11
和
SEQ ID NO
：
12
所示的
LCDR1、LCDR2
和
LCDR3。2.
根据权利要求1所述的抗
PD
‑1抗体，其特征在于，所述的抗
PD
‑1抗体的重链可变区氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
13
，轻链可变区氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
14
；或所述的抗
PD
‑1抗体的重链可变区氨基酸序列为
SEQ ID NO
：
15
，轻链可变区氨基酸序列为
SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洋，张娅，褚冰儿，赵鑫萍，徐飞，施嘉敏，褚建达，汤小彬，
申请(专利权)人：浙江正熙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：