一种产蒽醌类化合物的Kabatiellabupleuri菌株及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株及应用，一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株TSYW

【技术实现步骤摘要】
一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株及应用


[0001]本专利技术属于植物病原菌防治
，更具体地涉及一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株及应用。

技术介绍

[0002]蒽醌是指在C9，C
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位具有羰基的蒽类化合物，属稠环有机化合物，在纺织印染、医药、农药等行业具有广泛的应用。在工业上，蒽醌类染料在合成染料领域占有重要的地位，其次其可用作造纸蒸煮剂和制造双氧水的原料。在医药领域，蒽醌类化合物普遍具有抗肿瘤、抗菌、抗氧化、利尿、止血等多种药理作用，如番泻苷具有泄下作用，米托蒽醌可用于急性白血病、恶性淋巴瘤的治疗。在农业领域，二氰蒽醌用于果树病虫害的防治。
[0003]蒽醌类化合物常存在于蓼科、豆科、茜草科、鼠李科植物中，同时也是地衣类和菌类的代谢产物。研究表明一些微生物可生产蒽醌类化合物，如大黄素除从药用植物大黄、虎杖中提取外，还可利用赭曲霉或者腐皮镰刀菌生产，但是产量较低；除此之外，具有除草活性的长孺孢素由画眉草弯孢霉合成，从灰绿曲霉中发现的灰绿曲霉素和大黄素甲醚都属于蒽醌类化合物；镰刀霉可产生红镰霉素，黄色镰刀菌还能产生黄色镰刀菌素，尖孢镰刀菌还能产生能抑制其它真菌生长的比卡菌素；绿盘菌能感染死木，使之产生蓝绿色，色素是盘菌木素。但是上述菌株所产的蒽醌类化合物产量较低，直接限制了其生产应用。由于蒽醌类化合物普遍具有抑菌作用，具有开发成为生物农药的潜在价值，从环境中筛选蒽醌类化合物的高产菌株已成为现在研究的热点。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株。
[0005]本专利技术的第二个目的是提供上述一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株TSYW
‑
49CGMCC NO.25421的胞外发酵提取物。
[0006]本专利技术的第三个目的是提供上述胞外发酵提取物在制备植物病原菌抑制剂中的应用。
[0007]本专利技术的技术方案概述如下：
[0008]一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株TSYW
‑
49CGMCC NO.25421。
[0009]上述一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株TSYW
‑
49CGMCC NO.25421的胞外发酵提取物。
[0010]上述胞外发酵提取物在制备植物病原菌抑制剂中的应用。
[0011]植物病原菌优选尖孢炭疽菌、黑线炭疽菌、黑粉菌或红酵母。
[0012]本专利技术的优点：
[0013]实验证明，本专利技术的一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株，能产蒽醌类化合物，其胞外发酵提取物对多种植物病原菌具有显著的抑菌活性，可用于生产生物农
药，具有重要的应用价值。
附图说明
[0014]图1为菌株TSYW
‑
49菌落形态图；
[0015]图2为菌株TSYW
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49显微镜观察形态图；
[0016]图3为菌株TSYW
‑
49胞外提取物Borntrager反应颜色变化图；
[0017]图4为菌株TSYW
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49胞外发酵产物抑菌效果；其中，1
‑
8:0.151g/L、0.188g/L、0.378g/L、0.755g/l、1.51g/L、3.02g/L、6.04g/L、12.08g/L；A：阴性对照；
[0018]图5为菌株TSYW
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49产物分泌至细胞外不溶于水所形成的结晶在显微镜下的照片。
具体实施方式
[0019]本专利技术的一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株，为从自然界中分离筛选获得，通过对其形态特征观察发现该菌株为类酵母，ITS序列分析比对发现该菌株与Kabatiella bupleuri的亲缘关系最近，表明该菌株为Kabatiella bupleuri，将筛选的菌株编号为TSYW
‑
49。于2022年07月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO.25421，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
[0020]实施例1：菌种分离
[0021]从环境中(从中国，浙江省，绍兴市)采集植物叶片为样品。将上述样品浸泡于PBS缓冲液中涡旋振荡洗下表面微生物，获得微生物富集液。使用PBS缓冲液对微生物富集液依次稀释5倍、10倍、50倍、100倍，500倍、1000倍。分别取100μL各个稀释液涂布于YPD固体培养基上，30℃静置培养120h。
[0022]挑选上述平板中颜色为红色，并对周围菌株产生明显抑制作用的单菌落，在上述YPD固体培养基上划线分离纯化，重复此步骤2～3次，直至得到纯培养微生物。
[0023]PBS缓冲液：称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。高压蒸气灭菌(121℃，20min)，室温冷却后加入青霉素和链霉素至终浓度为100ug/ml，保藏于4℃冰箱中。
[0024]YPD固体培养基：1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖，1.5％琼脂粉。
[0025]从浙江省绍兴市上虞区岭南乡覆卮山景区(纬度：29
°
44'58.2"N,经度：120
°
58'24.48"E)植被中筛选到一株产胞外红色素的菌株，命名为TSYW
‑
49，该菌株产生的胞外活性化合物对其周围真菌具有明显抑制作用。
[0026]实施例2：菌落形态观察
[0027]将实施例1获得的菌株TSYW
‑
49在YPD固体培养基平板上划线，置于30℃培养箱中培养4d，菌落直径大小为20～30mm。菌落初期表面光滑、湿润、粘稠，后期外观呈现褶皱形态，质地疏松。并随着培养时间增加，菌落颜色由乳白色逐渐向深红色转变，后期平板背面呈现白红相间或深红色(图1)。显微镜形态观察得知，单细胞菌体形态为酵母状细胞，多细胞形态为有间隔，分支的菌丝(图2)。
[0028]实施例3：菌株分子生物学鉴定
[0029]1)将TSYW
‑
49菌株接种于YPD液体培养基中，30℃，220rpm振荡培养48h，离心收集
菌体；
[0030]2)利用TIANGEN酵母基因组提取试剂盒(DP307)提取基因组DNA；
[0031]3)采用ITS序列通用引物(ITS1：5'
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TCCGTAGGTGAACCTGCGG
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3'SEQ ID NO.2，ITS4：5'本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株TSYW
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49CGMCC NO.25421。2.权利要求1的一种产蒽醌类化合物的Kabatiella bupleuri菌株TSYW
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【专利技术属性】
技术研发人员：乔建军，王凯，张恩鹏，杨海霞，徐俊松，易德伟，
申请(专利权)人：天津大学浙江绍兴研究院，
类型：发明
国别省市：