乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA制造技术

本发明专利技术公开了乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA，所述转录调控因子YthA的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码上述乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA的基因ythA，所述基因ythA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。实验结果表明，与对照菌株相比，摇瓶发酵实验中，本发明专利技术的重组乳酸乳球菌在酸性发酵液中的存活率提高，nisin耐受能力增强，nisin稳定性增加，从而提高了nisin产量。从而提高了nisin产量。从而提高了nisin产量。

【技术实现步骤摘要】
乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA


[0001]本专利技术涉及细菌转录调控因子，特别是涉及一个乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA及编码转录该调控因子的基因，含有乳酸乳球菌乳亚种YF11的转录调控因子YthA基因ythA的载体，含有该载体的重组乳酸乳球菌及应用。

技术介绍

[0002]转录调控因子是一类能与基因上特殊序列特异性结合，从而在特定的时间与空间控制基因转录量的蛋白质分子。在细菌的生长死亡以及对外界环境的反应过程中，转录因子对DNA进行的转录水平的调控是十分关键的因素。大肠杆菌基因组中有300多个基因编码这样的蛋白质，大多是序列特异性的DNA结合蛋白，能够与特定的启动子结合。一个给定的转录因子可以调控一个或多个靶基因的转录,而一个基因也可以被一个或多个转录因子所调控。同时，不同的转录因子之间也可以相互调控,于是这些基因和转录因子共同构成了一个复杂的基因转录调控网络。转录因子能够识别的特殊DNA碱基序列称为转录因子结合位点(transcription factor binding sites,TFBS)，通常位于启动子中或者上游区域，长度一般为5
‑
20bp。转录因子通常能够调控多个基因，每个基因的结合位点各不相同但会有一定的相似性。
[0003]乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是一种无芽孢、革兰氏染色阳性细菌。它具有代谢相对简单、不产生内毒素或者毒性物质、生长快速、不形成包涵体等特点，具有很好的生物安全性，适合于表达和分泌外源蛋白，可以作为活载体制作疫苗，在食品工业、生物制药及疫苗研究领域具有重要应用前景。作为一种常用的工业菌株，乳酸乳球菌随着发酵产生的乳酸会导致发酵液pH下降，影响菌株的生长甚至死亡，进而影响重要产物的产量。乳链菌肽(nisin)是一个由34个氨基酸组成的具有抑菌作用的小肽，对于大多数革兰氏阳性菌具有抑菌效果，与化学合成防腐剂相比更是具有高效、安全、无毒、无副作用的优点。Nisin生产的困境在于乳酸乳球菌在发酵过程中，菌体生长的最适环境与nisin稳定的pH之间存在矛盾。乳酸乳球菌在pH中性环境下生长势头良好，但随着发酵时间的延长，自身代谢的乳酸使发酵液的pH持续降低，抑制菌体的生长，而且乳酸大量积累本身还会抑制nisin的合成；而nisin则在pH2.0条件下非常稳定，随着pH值的升高，稳定性变差，活性降低。故构建耐酸菌株使其在低pH下正常生长生产具有很好的工业价值和研究意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA。
[0005]本专利技术的第二个目的是提供一种编码上述乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA基因ythA。
[0006]本专利技术的第三个目的是提供一种含有上述基因ythA的载体。
[0007]本专利技术的第四个目的是提供一种含有上述载体的重组乳酸乳球菌。
[0008]本专利技术的第五个目的是提供一种上述重组乳酸乳球菌在发酵生产nisin中的应用。
[0009]本专利技术的技术方案概述如下：
[0010]乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA，所述转录调控因子YthA的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0011]编码上述乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA的基因ythA，所述基因ythA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0012]含有上述基因ythA的载体。
[0013]含有上述载体的重组乳酸乳球菌。
[0014]上述重组乳酸乳球菌在发酵生产nisin中的应用。
[0015]本专利技术优点：
[0016]实验结果表明，与对照菌株相比，摇瓶发酵实验中，本专利技术的重组乳酸乳球菌在酸性发酵液中的存活率提高，nisin耐受能力增强，nisin稳定性增加，从而提高了nisin产量。
附图说明
[0017]图1为含有空质粒pLEB124的乳酸乳球菌乳亚种YF11+和本专利技术的重组乳酸乳球菌在pH＝3.0条件下应激2h后的存活率；
[0018]图2为含有空质粒pLEB124的乳酸乳球菌乳亚种YF11+和本专利技术的重组乳酸乳球菌的生长曲线；
[0019]图3为含有空质粒pLEB124的乳酸乳球菌乳亚种YF11+和本专利技术的重组乳酸乳球菌nisin生产曲线。
[0020](在各图中，含有空质粒pLEB124的乳酸乳球菌乳亚种YF11简写为YF11+；本专利技术的重组乳酸乳球菌简写为YF11
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ythA)
具体实施方式
[0021]下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明。
[0022]乳酸乳球菌乳亚种YF11(Lactococcus lactis subsp.lactis)于2016年5月10日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101，保藏号为CGMCC NO.12429。
[0023]所用质粒pLEB124购买于苏州金唯智生物科技有限公司。
[0024]本专利技术转录调控因子YthA基因ythA来源于乳酸乳球菌乳亚种YF11。
[0025]本专利技术以乳酸乳球菌乳亚种YF11为例，实验证明乳酸乳球菌乳亚种属的其它菌株也可以用于本专利技术。
[0026]实施例1
[0027]含有编码乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA的基因ythA的载体的重组乳酸乳球菌的构建方法，包括如下步骤：
[0028](1)以乳酸乳球菌乳亚种YF11(保藏号CGMCC NO.12429)的基因组为模版，根据编码乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA的基因ythA的核苷酸序列设计引物，对基因ythA进行扩增；
[0029]用细菌基因组提取试剂盒提取乳酸乳球菌乳亚种YF11基因组，并根据转录调控因子YthA的基因ythA的核苷酸序列设计引物ythA
‑
F(SEQ ID NO.3)和ythA
‑
R(SEQ ID NO.4)。以乳酸乳球菌乳亚种YF11基因组为模板，以ythA
‑
F和ythA
‑
R分别为上下游引物，PCR扩增出目的片段ythA。ythA的PRT序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，用于扩增ythA基因的上、下游引物序列为：
[0030]ythA
‑
F：5
’‑
CGCGGATCCCACAAGGTTAATTCAACGAT
‑3’
(SEQ ID NO.3)
[0031]ythA
‑
R：5
’‑
TCCCCCGGGTTAGAAATCTGACCAGTCATCTT
‑3’
(SEQ ID NO.4)
[0032](2)使用通用型DNA纯化回收试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA，其特征是所述转录调控因子YthA的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.编码权利要求1的乳酸乳球菌乳亚种YF11转录调控因子YthA的基因ythA，其特征是所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔建军，吴昊，刘金贵，熊慧，赵秀丽，
申请(专利权)人：天津大学浙江绍兴研究院，
类型：发明
国别省市：