一种幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB及其制备方法与应用，该重组抗原蛋白TatB的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，该重组抗原蛋白TatB编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明专利技术通过质粒构建、诱导表达、亲和层析和交换层析纯化等步骤得到高纯度的抗原蛋白，纯化工艺简单、成本低、可操作性强，经过纯化制备后的抗原具有较高免疫原性和免疫效价，可以用作基因工程亚单位疫苗。而作为幽门螺杆菌膜转运蛋白中的重要组成蛋白，重组抗原蛋白TatB将成为幽门螺杆菌基因工程疫苗研制过程中最有希望的候选抗原之一。过程中最有希望的候选抗原之一。过程中最有希望的候选抗原之一。

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物制药
，涉及重组抗原蛋白，具体涉及一种幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)是一种呈螺旋形或S形的革兰氏阴性微需氧细菌。幽门螺杆菌感染是全球最常见的感染疾病之一，在一些发展中国家，一半以上的人口感染了幽门螺杆菌。流行病学研究显示，幽门螺杆菌感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃淋巴瘤以及胃癌等疾病密切相关。1994年，世界卫生组织已经将幽门螺杆菌列为第Ⅰ类生物致癌因子。现今治疗幽门螺杆菌感染引发的相关疾病主要采用抗生素结合的“三联”或“四联”疗法来抑制或者清除患者体内的幽门螺杆菌，虽然早期治疗效果显著，但是对再次感染患者的治疗效果就明显降低，并且停药后极易出现复发现象。
[0003]就感染幽门螺杆菌后，在治疗上遇到的问题，人们不得不寻找新的解决途径，以期做到既不会增加菌的耐药性，又可以提高临床治疗的效果。经过数十年的科学研究，已有大量的实验证明，免疫接种可以有效预防甚至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB，其特征在于：所述重组抗原蛋白TatB的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB，其特征在于：所述重组抗原蛋白TatB的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。3.一种幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、质粒构建将核苷酸序列为SEQ ID NO:2的基因作为目的基因片段，将该目的基因片段连接在表达载体质粒中构建含有所述目的基因片段的重组表达质粒；S2、诱导表达将所述重组表达质粒转化至重组蛋白表达的宿主菌中进行诱导表达，收集诱导表达后的菌体，破碎处理后离心并收集上清液；S3、产物纯化将上清液依次经镍柱亲和层析、阴离子柱交换层析纯化后，获得幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB，所述重组抗原蛋白TatB的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。4.根据权利要求3所述的幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB的制备方法，其特征在于：所述步骤S1包括以下步骤：S11、筛选获得幽门螺杆菌抗原TatB编码氨基酸序列，根据氨基酸序列，进行大肠杆菌偏嗜性密码子优化，获得目的基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；S12、对目的基因进行全基因合成，通过Xho I和Nco I的酶切位点连接到表达载体质粒中构建重组表达质粒。5.根据权利要求3所述的幽门螺杆菌重组抗原蛋白TatB的制备方法，其特征在于：所述步骤S2包括以下步骤：S21、将重组表达质粒转化至表达宿主菌中获得可以表达重组抗原蛋白TatB的重组菌株，对重组菌株进行培养至OD
600 0.6
‑
0.8，再于30
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37℃、180
‑
240rpm条件下，使用浓度为0.3
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0.5mM异丙基硫代半乳糖苷诱导表达4
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8h；S22、将诱导表达后的菌液离心弃去上清液得沉淀菌体，沉淀菌体加入缓冲液A混悬均匀，破碎菌体处理后，离心弃沉淀，上清液经抽滤瓶过0.45μm滤膜抽滤备用。6.根据权利要求3所述的幽...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘开云，郭刚，谭润卿，王宁，孙敏，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：