可靠性高的评估干细胞制剂的免疫调控功能的方法技术

本公开提供可靠性高的评估干细胞制剂的免疫调控功能的方法，包括以下步骤：分选将接受干细胞制剂的受体的效应细胞，效应细胞为

【技术实现步骤摘要】
可靠性高的评估干细胞制剂的免疫调控功能的方法
[0001]本申请是申请日为
2020
年3月9日
、
申请号为
202010156994.1、
专利技术名称为一种评估干细胞免疫调控功能的方法的分案申请
。


[0002]本公开涉及生物医学工程产业领域，具体涉及一种可靠性高的评估干细胞制剂的免疫调控功能的方法
。

技术介绍

[0003]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术
。
[0004]干细胞是一类具有自我更新
/
多向分化潜能和独特免疫调控功能的细胞，以干细胞为代表的细胞治疗突破药物
、
手术两种传统治疗方式，已成为生物医学领域最前沿
、
最有前景的疾病干预策略
。
[0005]除自我更新和多向分化潜能之外，干细胞具有独特的免疫学特性，并展示出独特的免疫调控功能
。
目前干细胞已被用于治疗多种类型的免疫异常如自身免疫反应
、
炎症失控所致的疾病，如1型糖尿病
、
系统性红斑狼疮
(SLE)、
急慢性移植物抗宿主反应
(GVHD)
等
。
此外，科研人员正在积极推进包括恢复期血浆
、
干细胞等在重症治疗方面的临床疗效的研究探索，尤其有望在预防r/>、
改善重症“炎症瀑布反应”及肺纤维化方面具有其他治疗都无法替代的优势
。
当前，国内外大量临床前研究已经验证了干细胞治疗自身免疫疾病的有效性和安全性，并有不少研究进入
II
‑
III
期临床试验阶段
。
近年来，国际上逐步将干细胞的免疫调控功能当作干细胞作为治疗产品的关键有效性属性，并形成共识
、
提出了一些建设性意见，如国际细胞治疗协会
(International Society of Cell Therapy
，
ISCT)
于
2013
年建议针对干细胞的各项免疫调控功能建立一套可靠的
、
重复性好的标准化检测技术，用于评价干细胞作为治疗产品的质量
。
而我国在
《
干细胞临床研究管理办法
》
出台的
《
干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则
》
中也明确提出“免疫调控功能作为干细胞生物学有效性的质量评价内容”。
[0006]然而，专利技术人发现，当前国内外针对干细胞制剂的质量检验一般只涉及一般生物学属性
(
数量
、
活性
、
增殖能力等
)、
微生物安全性
(
细菌
、
病毒
、
真菌和内毒性检测等
)、
生物学安全性
(
抗原性
、
致瘤性等检测
)
，针对细胞制剂的生物学有效性的质量检测手段相对缺乏，目前也更多集中在表明分子标记物
、
诱导分化功能检测，尚缺少免疫调控性能这一关键的细胞生物学性能评价
。
尤其是针对用于糖尿病
、
自身免疫性疾病
(
如类风湿关节炎
、
系统性红斑狼疮等
)
及急慢性炎症性疾病
(
如新型冠状病毒
COVID
‑
19、SARS
冠状病毒
、
埃博拉病毒或者
H7N9
流感病毒等感染引起的全身炎症反应
SIRS)
等，免疫调控性能，而不是定向分化能力，才是干细胞最重要的治疗机制
。
对于用于这部分疾病治疗的细胞制剂，科学客观地评估其免疫调控性能至为重要
。

技术实现思路

[0007]因此，本专利技术的目的是提供一种评估干细胞免疫调控功能的标准化方案
。
本方法基于混合淋巴细胞反应的基本原理，能够评价干细胞对总淋巴细胞增殖的抑制能力，作为干细胞免疫调控功能的基本性能评估；也能进一步评估干细胞对
CD4
+
T
淋巴细胞亚群增殖分化的调控效能，以及干细胞对不同免疫细胞释放炎症因子等方面的调控能力
。
本专利技术所述方法是一种可靠
、
重复性好的标准化检测方法，可作为全面综合反映干细胞质量的必要内容，能够反映干细胞制剂的生物学有效性
。
[0008]具体地，本专利技术的技术方案如下所述：
[0009]本专利技术提供了一种评估干细胞免疫调控功能的方法，其包括：基于免疫磁珠分选
(magnetic
‑
activated cell sorting
，
MACS)
分选接受干细胞制剂的受体
(
即接受干细胞治疗的个体
)
或同一标准供体
(
作为参照
)
的效应细胞，采用抗体包被的扩增磁珠进行标准化的效应细胞扩增，基于羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯
(carbo xy fluor esce in diacetate succinimidylester
，
CFSE)
染色标记效应细胞
、
流式细胞术评估在待检测干细胞单细胞混悬液内混合培养的效应细胞的增殖，以效应细胞增殖被抑制率评估待检测干细胞免疫调控功能
。
[0010]具体地，本专利技术所述的评估干细胞免疫调控功能的方法包括步骤：分离制备效应细胞；
CFSE
标记效应细胞；效应细胞接种；效应细胞与待检测干细胞混合培养；流式细胞术检测效应细胞在混合细胞中的增殖情况；以效应细胞增殖被抑制率评估待检测干细胞的免疫调控功能
。
[0011]本专利技术所述效应细胞为
PBMCs(
人外周血单个核细胞
)
或
Tresp
细胞
(
效应性
T
细胞，此处不是指
effector T cell
‑
效应
T
细胞，而是指
T
细胞中可能被干细胞调控的效应细胞
)。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述
PBMCs
的分离方法包括：取分离好的干细胞制剂受体
(
即将接受干细胞输注治疗的个体
)
的
PBMCs
，去除悬浮细胞中的细胞团，离心，弃干上清液去除死细胞，即得；其中，在一些实施方式中，所述去除悬浮细胞中细胞团的方法可采用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种可靠性高的评估干细胞制剂的免疫调控功能的方法，其特征在于，包括以下步骤：分选将接受干细胞制剂的受体的效应细胞，所述效应细胞为
CD4
+
CD25
‑
T
细胞；采用抗体包被的扩增磁珠，对所述分选后的效应细胞进行标准化的效应细胞扩增，所述扩增磁珠为抗人
CD3
抗体
、CD28
抗体预包被的磁珠；检测所述效应细胞的增殖情况，得到效应细胞增殖被抑制率，并评估所述待检测干细胞制剂的免疫调控功能
。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用
CFSE
标记评价法
、
基于
LDH
的检测法
、3H
‑
TdR
掺入法或
BrdU
标记法检测所述效应细胞的增殖情况
。3.
根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用
CFSE
标记评价法检测所述效应细胞的增殖情况
。4.
根据权利要求3所述的方法，其特征在于，
CFSE
标记效应细胞的过程包括：将
CFSE
存储液与
PBS
在避光的条件下混合得到
CFSE
混合液；将所述效应细胞使用
PBS
重悬并与所述
CFSE
混合液进行混匀；进行孵育
、
离心后去上清加入
T
细胞完全培养基中进行重悬，得到
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵汝星，侯新国，陈丽，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：