一种检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法及其检测试剂盒技术

技术编号：41233249 阅读：3 留言：0更新日期：2024-05-09 23:48

本发明专利技术涉及分析检测技术领域，具体涉及一种检测体液中4‑羟基‑2‑壬烯醛的方法及其检测试剂盒。检测方法：待测体液样品中加入内标工作液，第一次涡旋混匀，第一次离心，取上层清液，氮吹至干；加入衍生液N<subgt;2</subgt;,N<subgt;2</subgt;,N<subgt;4</subgt;,N<subgt;4</subgt;‑四乙基‑6‑肼基‑3,6‑二氢‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二胺溶液，第二次涡旋混匀后孵育，后补充甲醇，第三次涡旋混匀，第二次离心后取上清液为待测样品溶液；通过液相色谱‑质谱联用检测待测样品溶液，同位素内标法定量。本发明专利技术中建立检测速度快、高准确度和精密度检测血液中4‑羟基‑2‑壬烯醛的方法，可以高效灵敏地实现对血液中4‑羟基‑2‑壬烯醛的定量检测。

全部详细技术资料下载

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分析检测，具体涉及一种检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法及其检测试剂盒。

技术介绍

1、4-羟基-2-壬烯醛(4-hydroxy-2-nonenal，4-hne)是一种α,β-不饱和醛。生理水平4-hne发挥生理保护作用，病理水平4-hne参与疾病发生发展。健康人体血液中4-hne的生理水平约为0.3～0.7μmol/l，生理浓度的4-hne可通过加合p38-mapk、pkc和erk等多种上游激酶，进而启动nrf2的激活，从而引起抗氧化系统分子表达增加，如akrs、gcl、gpx、gsts、nqo1、ho-1等，激活抗氧化防御系统。高浓度4-hne(大于10μmol/l)则可直接导致细胞凋亡、程序性坏死、铁死亡等细胞命运。同时，研究发现，4-hne能与半胱氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸发生加成反应，因此形成的修饰蛋白与心脏疾病如，动脉硬化和糖尿病综合征，和神经变性疾病如，阿尔茨海默病、帕金森综合征和脑局部缺血的发生和发展有关。因此，定量检测机体循环系统中4-hne对于阐明急危重症疾病的发病机理研究、诊断和治疗具有重要的意义。现有技术中虽然公开了检测食品中4-hne的方法，但是血液中4-hne的含量较低，因此该类方法不适用于体液中4-hne的检测，因此亟需一种检测体液中4-hne的方法。

技术实现思路

1、为了克服上述问题，本专利技术提供了一种检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法及其检测试剂盒。

2、为实现上述技术目的，本专利技术采用如下技术方案：

<p>3、本专利技术的第一个方面，提供了一种检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，包括：

4、(1)待测体液样品中加入内标工作液，第一次涡旋混匀，第一次离心，取上层清液，氮吹至干；加入衍生液n2,n2,n4,n4-四乙基-6-肼基-3,6-二氢-1,3,5-三嗪-2,4-二胺(美拉肼)溶液，第二次涡旋混匀后孵育，后补充甲醇，第三次涡旋混匀，第二次离心后取上清液为待测样品溶液；

5、(2)通过液相色谱-质谱联用检测待测样品溶液，同位素内标法定量。

6、本专利技术的第二个方面，提供一种检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的检测试剂盒，包括：

7、试剂ⅰ：含有甲酸的甲醇溶液，其中甲酸与甲醇的体积比为0.05％～0.5％：1，用于内标工作液以及衍生液美拉肼溶液的制备；

8、试剂ⅱ：含有甲酸的甲醇溶液，其中甲酸与甲醇的体积比为1％～5％：1，

9、试剂ⅲ：甲醇溶液，用于补充衍生孵育后的样本体积；

10、试剂ⅳ：甲酸水溶液，其中甲酸与水的体积比为0.2％：1，作为液相色谱分离的流动相a；

11、试剂ⅴ：含有甲酸的乙腈溶液，其中甲酸与乙腈的体积比为0.2％：1，作为液相色谱分离的流动相b；

12、试剂ⅵ：4-羟基-2-壬烯醛-d3同位素内标，浓度为1～50ng/ml；

13、试剂ⅶ：美拉肼，浓度为0.1～10mg/ml。

14、本专利技术的第三个方面，提供上述检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的检测试剂盒用于定性或定量检测体液中4-羟基-2-壬烯醛。

15、本专利技术的有益效果在于：

16、(1)本专利技术中通过优化衍生液中美拉肼的浓度，优化血液样品与蛋白沉淀液的体积比，优化蛋白沉淀液中甲酸的浓度，优化液相色谱柱以及优化液相色谱梯度洗脱的条件，建立检测速度快、高准确度和精密度检测血液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，可以高效灵敏地实现对血液中4-羟基-2-壬烯醛的定量检测，在心脏疾病和神经变性疾病的研究、诊断和治疗具有重要的意义。

17、(2)利用美拉肼对4-羟基-2-壬烯醛进行衍生化的方法，能够快速高效温和的衍生化生物样本中的4-羟基-2-壬烯醛，衍生化效率高达99％。

18、(3)本专利技术提供的检测血液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，最终4-羟基-2-壬烯醛定量限为0.25ng/ml，定量限检出限为0.1ng/ml。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，所述体液包括全血、血浆、血清、尿液以及组织液。

3.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，所述内标工作液的溶质为4-羟基-2-壬烯醛-D3同位素内标，溶剂为含有甲酸的甲醇溶液，其中甲酸与甲醇的体积比为0.05％～0.5％：1；

4.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，体液样品与内标工作液的体积比为1:3～10。

5.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，所述衍生液美拉肼溶液的溶剂为含有甲酸的甲醇溶液，其中甲酸与甲醇的体积比为1％～5％：1；

6.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，所述体液样品与衍生液美拉肼溶液的体积比为1～20:1；

7.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，液相色谱条件为：色谱柱：2.1*50mm，2.

8.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，质谱条件为：电喷雾离子源，正离子MRM扫描分析，EP:10V；CXP:6.0V。

9.一种检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的检测试剂盒，其特征在于，包括：

10.权利要求9所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的检测试剂盒用于定性或定量检测体液中4-羟基-2-壬烯醛。

...

【技术特征摘要】

1.一种检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，所述体液包括全血、血浆、血清、尿液以及组织液。

3.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，所述内标工作液的溶质为4-羟基-2-壬烯醛-d3同位素内标，溶剂为含有甲酸的甲醇溶液，其中甲酸与甲醇的体积比为0.05％～0.5％：1；

4.如权利要求1所述的检测体液中4-羟基-2-壬烯醛的方法，其特征在于，体液样品与内标工作液的体积比为1:3～10。

6.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉国，徐峰，张义，庞佼佼，张欣，薛丽，吴文晓，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人