一种细胞残留制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及

【技术实现步骤摘要】
一种细胞残留p24 ELISA检测试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及
IPCG01N33
领域，更具体地，本专利技术及一种细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒及其使用方法
。

技术介绍

[0002]细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒就是利用
p24
蛋白作为检测指标，通过检测样品中
p24
蛋白的含量来确定慢病毒的滴度
。
目前，
HIV
‑
1p24
蛋白检测多基于免疫吸附
ELISA
的检测方法
。
[0003]然而目前的
ELISA
实验操作存在处理复杂，检测结果受外界
、
人工等因素影响导致出错率高的问题，同时不适宜处理样品数量大的情况，会出现样品与样品之间混淆，加样时孔与孔之间重复或者跳孔等
。
此外，目前还存在检测范围低，灵敏度低，精密度低的问题
。
[0004]因此，需要提供一种细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒及其使用方法解决上述问题
。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中存在的一些问题，本专利技术第一个方面提供了一种细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒，包括：包被酶标板
、
检测抗体
、
检测抗体稀释液
、
酶结合物
、
酶结合物稀释液
、
标准品
、
病毒裂解液
、
样本稀释液
、
洗液
、
终止液
。
[0006]优选的，所述包被酶标板为
HIV
‑
1p24
包被板
。
[0007]本专利技术中包被酶标板随用随配
。
[0008]在一种实施方式中，包被酶标板的制备方法包括：使用包被缓冲液包被抗体之后的混合包被液包被，然后进行洗板
、
封闭
、
洗板
、
保护后，即得
。
[0009]在一种实施方式中，包被酶标板的制备方法如下：
[0010]1.
包被：使用包被缓冲液包被抗体稀释至2μ
g/mL
，然后以
100
μ
L/
孔混合包被液于
4℃
过夜
。
[0011]2.
洗板：弃去各孔内液体，用1×
PBST
注满微孔
(350
μ
L/
孔
)
，静置
30
秒后弃去孔内液体；重复2次，最后一次洗板完成后在面巾纸上拍干
。
[0012]3.
封闭：每孔中加入
200
μ
L 0.5wt
％
Casein
‑
Na
，
37℃
温箱放置
1.5h。
[0013]4.
洗板：弃去各孔内液体，用1×
PBST
注满微孔
(350
μ
L/
孔
)
，静置
30
秒后弃去孔内液体；重复1次，最后一次洗板完成后在面巾纸上拍干
。
[0014]5.
保护：每孔中加入
200
μ
L 10wt
％蔗糖溶液，室温温育
1h
；弃去各孔内液体，尽量拍干，置于干燥环境进行干燥
。
[0015]在一种实施方式中，所述检测抗体为
p24
抗体
。
[0016]使用本专利技术所述检测抗体稀释液将检测抗体稀释
100
倍
。
[0017]在一种实施方式中，酶结合物为辣根过氧化物酶标记的链和亲霉素
。
[0018]在一种实施方式中，酶结合物稀释液为
HRP
稀释液，使用该稀释液将酶结合物稀释
100
倍
。
[0019]在一种实施方式中，所述标准品为
HIV
‑
1p24。
[0020]使用过程中，将标准品进行稀释2倍
。
[0021]在一种实施方式中，所述病毒裂解液为
Ttiton
‑
100。
[0022]优选的，所述病毒裂解液为
0.25vol
％
Ttiton
‑
100。
[0023]在一种实施方式中，所述样本稀释液为
0.5vol
％
Casein
‑
Na。
[0024]在一种实施方式中，所述洗液为
10xPBST。
[0025]本专利技术洗液使用时，使用去离子水稀释
10
倍
。
[0026]在一种实施方式中，所述终止液为硫酸
。
[0027]优选的，硫酸的浓度为
0.1
‑
1M
，更优选的，硫酸的浓度为
0.5M。
[0028]在一种实施方式中，所述细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒还包括封板膜
、
说明书
。
[0029]本专利技术第二个方面提供了一种细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒的使用方法，包括：在包被酶标板上，添加病毒裂解液
、
标准品
、
稀释的样品
、
检测抗体，然后封板后震荡孵育；接着使用洗液洗涤后添加酶结合物后，封板震荡孵育，然后继续洗涤，接着显色之后测定
。
[0030]在一种实施方式中，细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒的使用方法，包括：
[0031](1)
使用前，将所有试剂充分混匀，避免产生气泡
。
[0032](2)
根据实验孔数量，确定所需的板条数目，剩余板条放回铝箔袋，密封
。
[0033](3)
加样：在包被酶标板上，每孔加入
50
μ
l
病毒裂解液，再加入
50
μ
L
标准品
、50
μ
L
稀释的样品；然后每孔加
50
μ
l
检测抗体，之后用封板膜封板后置于室温振荡器，以
500rpm
的震荡速度孵育
60
分钟
。
[0034](4)
洗涤：弃去各孔内液体，使用洗液以
300
μ
L/<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒，其特征在于，包括：包被酶标板
、
检测抗体
、
检测抗体稀释液
、
酶结合物
、
酶结合物稀释液
、
标准品
、
病毒裂解液
、
样本稀释液
、
洗液
、
终止液
。2.
根据权利要求1所述细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒，其特征在于，所述包被酶标板为
HIV
‑
1p24
包被板
。3.
根据权利要求2所述细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒，其特征在于，包被酶标板的制备方法包括：使用包被缓冲液包被抗体之后的混合包被液包被，然后进行洗板
、
封闭
、
洗板
、
保护后，即得
。4.
根据权利要求1‑3任一项所述细胞残留
p24 ELISA
检测试剂盒，其特征在于，所述检测抗体为
p24
抗体
。5.
根据权利要求4所述细胞残留
p2...

【专利技术属性】
技术研发人员：许金超，栗红建，张丹，李永锋，刘丽美，张伟男，蔡宇卿，郭彬彬，
申请(专利权)人：江苏谱新生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：