【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，尤其涉及ipc g01n 33，更具体地涉及，一种benzonase核酸酶elisa检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
1、benzonase作为一种经过基因工程改造的核酸内切酶，可高效降解任何形式的核酸，广泛用于蛋白等生物制品中核酸的去除。在处理过的生物制品中，可能存在微量benzonase残留，这些微量残留会对后续生物制品的应用造成一定的影响。生物制品中benzonase的残留量是衡量生物制品质量的重要指标之一。
2、现有专利cn202111330085.6公开了一种全能核酸酶benzonaseelisa检测试剂盒，含有：兔来源的benzonase多克隆抗体；生物素标记的兔来源benzonase多克隆抗体；亲和素标记的hrp；标准品benzonase；显色液、终止液、封闭液和洗涤液。本专利技术的检测试剂盒检测下限为24pg/ml，定量检测范围为0.047-3ng/ml可检测不同厂家的benzonase；但检测的范围偏小，不能定量检测某些范围内的benzonase的残留量。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中的问题，本专利技术第一方面提供了一种benzonase核酸酶elisa检测试剂盒，包括benzonase包被酶标板、benzonase标准品、benzonase酶标抗体、样品稀释液、20×洗液、显色液a、显色液b、终止液、封板膜。
2、优选的，所述的benzonase包被酶标板被benzonase第一抗体包被；
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4、s1：包被：将包被缓冲液和293t hcp第一抗体混合，使benzonase第一抗体的浓度为1μg/ml，混匀后按100μl/孔加入酶标板中，封板膜封板后，4℃包被8～12小时；
5、s2：洗板：包被结束后，用洗液洗涤2次，在含有293t hcp第一抗体的酶标板中加入150μl/孔保护液，25℃孵育100min；
6、s3：封闭：洗液洗涤后，按300μl/孔加入封闭液，37℃孵育1h；
7、s4：保护：封闭结束后，洗液洗涤，按150μl/孔加入保护液，室温孵育90min；
8、s5：烘板、塑封保存：甩干酶标板中的液体，干燥5h；抽真空塑封，4℃保存。
9、优选的，所述包被缓冲液为10mm磷酸盐缓冲液，ph 7.4。
10、优选的，所述保护液为质量分数为1％的bsa溶液。
11、优选的，所述洗液为1×pbs-t；
12、优选的，所述封闭液为质量分数为5％的bsa溶液。
13、本专利技术中，将benzonase第一抗体包被在酶包被板上形成固相抗体，无需提前一天进行包被，减少了使用者的使用试剂盒的时间，简化了使用步骤，从而提高了效率。本专利技术人创造性地发现，通过不同试剂处理形成的固相抗体，在保持高灵敏度、准确性的同时，还保持了稳定性，能够长时间保存。
14、优选的，所述benzonase标准品为0.3～0.8μg/ml benzonase核酸酶重组蛋白；进一步优选的，为0.5μg/ml benzonase核酸酶重组蛋白。
15、优选的，所述样品稀释液为3％bsa溶液，溶剂pbs。
16、优选的，所述20×洗液包括150～180g/l的nacl，还包括50～80g/l的na2hpo4·12h2o，3～5g/l的kcl，3～8g/l的kh2po4和1～2ml/l tween；进一步优选的，所述20×洗液包括163.6g/l的nacl，还包括71.6g/l的na2hpo4·12h2o，4g/l的kcl，5g/l的kh2po4和2ml/ltween。
17、优选的，所述显色液a包括25～30g/l的醋酸钠、2～4g/l的柠檬酸和0.5～0.8ml/l双氧水；进一步优选的，为27.2g/l的醋酸钠、3.2g/l的柠檬酸和0.6ml/l双氧水。
18、优选的，所述双氧水为质量分数为30％的双氧水水溶液。
19、优选的，所述的显色液b包括0.2～0.6g/l的乙二胺四乙酸二钠，1.8～2.0g/l的柠檬酸，80～120ml/l的甘油和0.2～0.4g/l的tmb(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)；进一步优选的，为0.4g/l的乙二胺四乙酸二钠，1.9g/l的柠檬酸，100ml/l的甘油和0.3g/l的tmb。
20、优选的，所述终止液为0.5m硫酸。
21、优选的，所述的显色液a、显示液b应避光保存。
22、优选的，所述benzonase第一抗体、benzonase核酸酶重组蛋白、benzonase标准品、pbs、氯化钠、十二水磷酸氢二钠、氯化钾、磷酸二氢钾、醋酸钠、柠檬酸、双氧水、乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸、甘油、tmb、硫酸均可市售获得。
23、优选的，所述吐温市售可得。
24、本专利技术第二方面提供了一种benzonase核酸酶elisa检测试剂盒的使用方法，包括准备、标准品的配制、样品温育、洗板、benzonase酶标抗体温育、洗板、显色、终止和读数。
25、优选的，所述benzonase核酸酶elisa检测试剂盒的具体使用方法，包括以下步骤：
26、s1：准备：试剂准备；将各试剂置于室温平衡25～35min，取出需要的板条，将剩余板条用封板膜封板后重新放入2～8℃保存；
27、s2：标准品的配制：用样品稀释液将benzonase标准品用2.5倍倍比稀释的方法配制不同浓度的标准品；
28、s3：样品温育：设置标准品孔、空白孔和样本孔，在标准品孔按顺序加入不同浓度的标准品，在空白孔加入1×洗液，在样本孔中加入待测样本，孔中加入量均为80～120μl/孔，用封板膜封板，然后37℃静置温育1h；
29、s4：洗板：弃去孔中液体，用1×洗液清洗3～5次(200～300μl/孔)，每次清洗后拍干孔中的残留液体；
30、s5：benzonase酶标抗体温育：按80～120μl/孔加入benzonase酶标抗体，封板膜封板，37℃静置温育0.8～1.2h；
31、s6：洗板：同步骤4；
32、s7：显色：将显色液a、显色液b等体积混合，加入benzonase包被酶标板中，按80～120μl/孔混匀，用封板膜封板，37℃避光温育10～20min；
33、s8：终止：加入终止液，80～120μl/孔；
34、s9：读数：在酶标仪中测定双波长450/630nm处的od值，测定应在终止后20min内完成。
35、优选的，试剂准备包括1×洗液的制备；进一步优选的，所述1×洗液的制备方法为：取20×洗液，加19份去离子水配制成1×洗液，未用完的洗液密封置于2～8℃保存。
36、有益效果
37、1、本专利技术中，将ben本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Benzonase核酸酶ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括Benzonase包被酶标板、Benzonase标准品、Benzonase酶标抗体、样品稀释液、20×洗液、显色液A、显色液B、终止液、封板膜。
2.根据权利要求1所述的Benzonase核酸酶ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的Benzonase包被酶标板被Benzonase第一抗体包被。
3.根据权利要求1所述的Benzonase核酸酶ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述Benzonase标准品为0.3～0.8μg/mL Benzonase核酸酶重组蛋白。
4.根据权利要求1所述的Benzonase核酸酶ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述20×洗液包括150～180g/L的NaCl。
5.根据权利要求4所述的Benzonase核酸酶ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述20×洗液还包括50～80g/L的Na2HPO4·12H2O，3～5g/L的KCl，3～8g/L的KH2PO4和1～2mL/L Tween。
6.根据权利要求1所述的Ben
7.根据权利要求6所述的Benzonase核酸酶ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述双氧水为质量分数为30％的双氧水水溶液。
8.根据权利要求1所述的Benzonase核酸酶ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的显色液B包括0.2～0.6g/L的乙二胺四乙酸二钠，1.8～2.0g/L的柠檬酸，80～120mL/L的甘油和0.2～0.4g/L的TMB。
9.根据权利要求1所述的Benzonase核酸酶ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为0.5M硫酸。
10.一种根据权利要求1～9任一项所述的Benzonase核酸酶ELISA检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括准备、标准品的配制、样品温育、洗板、Benzonase酶标抗体温育、洗板、显色、终止和读数。
...【技术特征摘要】
1.一种benzonase核酸酶elisa检测试剂盒，其特征在于，包括benzonase包被酶标板、benzonase标准品、benzonase酶标抗体、样品稀释液、20×洗液、显色液a、显色液b、终止液、封板膜。
2.根据权利要求1所述的benzonase核酸酶elisa检测试剂盒，其特征在于，所述的benzonase包被酶标板被benzonase第一抗体包被。
3.根据权利要求1所述的benzonase核酸酶elisa检测试剂盒，其特征在于，所述benzonase标准品为0.3～0.8μg/ml benzonase核酸酶重组蛋白。
4.根据权利要求1所述的benzonase核酸酶elisa检测试剂盒，其特征在于，所述20×洗液包括150～180g/l的nacl。
5.根据权利要求4所述的benzonase核酸酶elisa检测试剂盒，其特征在于，所述20×洗液还包括50～80g/l的na2hpo4·12h2o，3～5g/l的kcl，3～8g/l的kh2po4和1～2ml...
【专利技术属性】
技术研发人员：许金超，栗红建，张丹，李永锋，刘丽美，张伟男，蔡宇卿，郭彬彬，
申请(专利权)人：江苏谱新生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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