一种HEK293T细胞的悬浮驯化方法技术

技术编号:39929601 阅读:41 留言:0更新日期:2024-01-08 21:43
本申请公开了一种HEK293T细胞的悬浮驯化方法,包括:a.将HEK293T贴壁细胞用驯化培养基重悬;b.摇床震荡培养;所述震荡培养的转速为50rpm~130rpm;所述震荡培养的前3天用斜颈瓶培养;所述震荡培养3天后换用摇瓶培养;所述震荡培养6h后,向培养瓶中加入EDTA PBS溶液;所述震荡培养24h~96h时,补加驯化培养基。本申请还公开了上述的方法在制备HEK293T悬浮细胞中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本说明书涉及生物医药领域,特别涉及一种hek293t细胞的悬浮驯化方法。


技术介绍

1、293t贴壁细胞除了可用于各类基因表达及蛋白生产,还可用于高滴度逆转录病毒及其他病毒生产,如腺病毒及其他哺乳动物病毒。

2、然而使用贴壁细胞包装慢病毒,工艺难以放大,产量难以提升,成本难以下降,且对劳动力消耗巨大;贴壁细胞培养和消化使用动物来源的血清和胰蛋白酶,可能引入外源病毒因子,增加质控难度等等问题。

3、传统上针对细胞悬浮驯化多采用先断血清后悬浮驯化的方法,但是,往往在方瓶中将血清含量由5%降至0%时,逐渐出现细胞生长速率变慢的现象,导致此驯化过程进展缓慢,驯化周期一般在6个月以上。血清每降一个梯度细胞往往需要适应5代以上的时间;特别是当血清含量降至1%至0%时,细胞贴壁性能下降,代谢缓慢,极易出现细胞成团死亡的情况导致驯化失败。因此,亟需一种驯化周期短,并且不影响细胞生长和功能的驯化方法。


技术实现思路

1、为了解决上述技术问题,本申请提供了一种hek293t细胞的悬浮驯化方法,所述方法是先本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种HEK293T细胞的悬浮驯化方法,其特征在于,包括:

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述EDTA PBS溶液浓度为0.1M,所述EDTAPBS溶液的加入量为驯化培养基体积的0.05%~0.07%;

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述补加驯化培养基或驯化培养基为无血清培养基;以补加驯化培养基或驯化培养基体积总量为基准计,所述补加驯化培养基或驯化培养基包含2%(v/v)的200mM谷氨酰胺溶液。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述补加驯化培养基或驯化培养基选自293TS基础培养基、OptiVitro 293Cell M...

【技术特征摘要】

1.一种hek293t细胞的悬浮驯化方法,其特征在于,包括:

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述edta pbs溶液浓度为0.1m,所述edtapbs溶液的加入量为驯化培养基体积的0.05%~0.07%;

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述补加驯化培养基或驯化培养基为无血清培养基;以补加驯化培养基或驯化培养基体积总量为基准计,所述补加驯化培养基或驯化培养基包含2%(v/v)的200mm谷氨酰胺溶液。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述补加驯化培养基或驯化培养基选自293ts基础培养基、optivitro 293cell medium sf he01、transpro cd01、celer-s101、hek293maxx、wayne293 transfection medium或innomedia 293cd302中至少一种。

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述293ts基础培养基中含有293tii培养基和...

【专利技术属性】
技术研发人员:周静雨栗红建张丹
申请(专利权)人:江苏谱新生物医药有限公司
类型:发明
国别省市:

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