【技术实现步骤摘要】
ppt1基因作为筛选标记在营养缺陷筛选中的应用
[0001]本专利技术属于生物
,具体涉及
ppt1
基因作为筛选标记在营养缺陷筛选中的应用
。
技术介绍
[0002]丝状真菌在真菌界中占据重要地位,广泛应用于工业
、
农业
、
医药以及基础生物学研究领域
。
一些重要的工业菌株用于生产酶
、
有机酸等物质,如黑曲霉
、
藤仓赤霉等
。
由于丝状真菌基因组相对简单
、
可操作性强,因此也常用于真核生物的一些生物学特性研究
。
基因工程技术是菌种改造和研究的有效方法
。
在基因工程操作过程中,筛选标记是筛选和获得正确改造菌株的一个重要手段,此类筛选标记主要包括抗生素抗性标记和营养缺陷标记
。
其中,营养缺陷标记筛选用到单一必需营养成分缺失的培养基,相对抗生素抗性标记在使用过程中需要用到抗生素筛选,筛选条件更加温和
。
同时,无论何种筛选标记,在基因工程操作时常常会碰到筛选标记缺乏的现象,尤其在需要对基因组多个位点进行突变的情况下
。
[0003]通常,在一些模式菌种中,如酿酒酵母,由于科研关注度较高,通常会有较多的筛选标记可供选择
。
而在一些关注度较少的菌种中,如很多非模式丝状真菌中,上述的筛选标记十分缺乏
。
这些菌种往往伴随较高的抗生素耐受性,如球孢白僵菌,导致可
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.ppt1
基因作为筛选标记在营养缺陷筛选中的应用
。2.
根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述
ppt1
基因作为丝状真菌的筛选标记
。3.
根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述营养缺陷包括赖氨酸营养缺陷
。4.
根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述丝状真菌包括禾谷镰刀菌
、
串珠镰孢菌
、
藤仓赤霉菌
。5.
根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述应用的方法为:以敲除
ppt1
基因的基因工程菌为出发菌,以赖氨酸营养缺陷作为筛选标记,利用
CRISPR/Cas9
技术敲除目的基因,并替换成
ppt1
基因,筛选得到在不含
L
‑
赖氨酸的培养基中正常生长的转化子
。6.
根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述基因工程菌通过以下方法制备得到:将
Pcas
‑
ppt1
载体和供体片段导入藤仓赤霉菌,利用
CRISPR/Cas9
技术对藤仓赤霉菌
ppt1
基因进行敲...
【专利技术属性】
技术研发人员:柳志强,张佳梦,岑宇科,李明涵,王远山,薛亚平,郑裕国,
申请(专利权)人:浙江工业大学,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。