一种检测凤仙花坏死斑病毒的实时荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ方法及其引物、探针和试剂盒技术

本发明专利技术是一种检测凤仙花坏死斑病毒的实时荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ方法及其引物、探针和试剂盒，属植物病毒分子生物学检测鉴定技术领域。本发明专利技术的上游引物的序列如ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：１所示，下游引物的序列如ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：２所示，目标产物片段长度为１８２ｂｐ，ＴａｑＭａｎ探针的序列如ＳＥＱ?ＩＤ?ＮＯ：３所示。本发明专利技术试剂盒和检测方法包括了上述引物和探针。应用本发明专利技术，可靠性和重复性好，样品三个重复所得的Ｃｔ值差值在０．０１至１．７；稳定性良好，在不同寄主上检测的Ｃｔ平均值差值在０．２５至０．３４；能检测出ＩＮＳＶ病毒含量６．９９拷贝.μｌ－１，具有微量检测的效果；检测的特异性强，只有ＩＮＳＶ有荧光信号。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物病毒分子生物学检测和鉴定
，具体涉及针对凤仙花坏死斑病毒的TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法以及所用的引物和探针。
技术介绍
凤仙花坏死斑病毒(Impatiens necrotic spot virus, INSV)是危害观赏植物的 重要病害之一，也是国外花卉生产中最难解决的问题之一。1998年INSV被欧洲及地中海植 物保护组织列入A2类检疫性有害生物。Killi^X^M'MM (Impatiens necrotic spot virus, INSV) MT^MM^I^^ (Bunyaviridae)番茄斑萎病毒属(Tospovirus)。该病毒粒子为球形，直径80_120nm，病毒 有包膜，其基因组由3个单链RNA分子构成。凤仙花坏死斑病毒最早从有症状的凤仙花上 分离鉴定出来，可以侵染50科648种植物，其中观赏植物39个属、蔬菜6个属。INSV引起 的症状多样，随寄主和侵染时期不同而变化，主要表现为矮化、环斑、叶片或茎部的褐色至 紫色的斑点、茎部变褐(溃疡)、碎色花，病害严重发生时会造成许多观赏植物的矮化，甚至 植株死亡，严重影响观赏植物的经本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于对凤仙花坏死斑病毒进行实时荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检测的引物，所述的引物由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的碱基序列如序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１所示，所述的下游引物的碱基序列如序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２所示，目标产物片段长度为１８２ｂｐ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雅婷，徐小刚，李永忠，孙文涛，仵发静，陈雪娇，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]