自体骨髓间充质干细胞的扩增方法技术

本发明专利技术涉及一种骨髓间充质干细胞培养扩增方法，具体地说是利用培养基与少量自体血清的复配，找出细胞生长最佳的环境，以及在方法中对细胞融合度的严格控制，最终实现快速培养骨髓间充质干细胞的目的，并且自体血清的使用弥补了胎牛血清存在的缺陷。骨髓间充质干细胞培养时间大大缩短，有利于临床应用。同时，本发明专利技术建立的方法用于培养骨髓间充质干细胞，抽取５ｍｌ骨髓，在约２０天的内，可以扩增收获间充质干细胞的１．５～２×１０７个细胞。大大减少的血清的用量，从而加少采集患者的血液量。得到的骨髓间充质干细胞，从细胞形态、生长周期、表型、诱导分化能力方面等都具有干细胞的特征。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种自体骨髓间充质干细胞的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：　　（１）淋巴细胞分离液分离骨髓并收集单个核细胞；　　（２）步骤（１）收集的细胞用添加有０．５％－２％自体血清的培养基混悬均匀，３７℃接种培养；　　（３）细胞培养４８ｈ换液，去除非贴壁细胞，继续培养，３～４ｄ换液一次；　　（４）细胞达５０～６０％融合时，用０．２５％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡ消化３分钟，收集细胞，按１∶２传代培养；　　（５）细胞达６０～８０％融合时，用同步骤（４）的方法消化收集细胞，按１×１０↑［４］／ｍｌ传代，继续培养；　　（６）培养１５～２０ｄ，至８０～９０％融合时，收获细胞。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵亚力，郝好杰，韩为东，司艺玲，伍志强，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]