抗SARS-CoV-2及变异株感染的腺病毒疫苗制造技术

本发明专利技术涉及抗SARS

【技术实现步骤摘要】
抗SARS
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CoV
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2及变异株感染的腺病毒疫苗


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及抗SARS
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CoV
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2及变异株感染的腺病毒疫苗。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(SARS
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Cov
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2)是由世界卫生组织命名的一种新型的β属的冠状病毒。该病毒有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60
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140nm。其基因特征与SARS
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CoV和MERS
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CoV有明显区别，是一种以前尚未在人类中发现的新冠状病毒分支。目前，变异新冠病毒主要有五大种类：Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron，Omicron变异株又分为BA.1、BA.2、BA.2.12.1、BA4和BA5等几种亚系。截止目前为止，新型冠状病毒SARS
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CoV
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2已导致全球5.45亿人感染，其中死亡人数已超630万人。
[0003]SARS
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CoV
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2的主要结构蛋白包括刺突蛋白(Spike，S)、信使蛋白(Envelop，E)、膜蛋白(Membrane，M)和核衣壳蛋白(Nucleocapsid，N)，其中，S蛋白在病毒的感染和毒力中起着关键作用，常被用来作为疫苗的抗原。由于SARS
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CoV
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2变异株含有多个突变位点，病毒的S蛋白也含有多个突变位点，导致变异株一定程度上能够逃逸新冠原型株(即“新冠病毒野生株”)疫苗激发的抗体，导致新冠疫苗失效或保护力降低，为疫情防控工作带来巨大压力。因此，开发针对各变异的SARS
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CoV
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2病毒的疫苗，特别对各变异的SARS
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CoV
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2病毒的广谱疫苗，对于新型冠状病毒的防治非常重要。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的目的在于提供抗SARS
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CoV
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2及变异株感染的腺病毒载体。本专利技术的另一目的在于提供利用所述腺病毒载体制备的用于预防和/或治疗SARS
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CoV
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2或其变异株感染的疫苗。
[0005]本专利技术首先提供了编码SARS
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CoV
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2或变异株S蛋白基因的多核苷酸，所述的多核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；或者在SEQ ID No.3核苷酸序列经取代和/或缺失和/或插入至少一个核苷酸获得的，且与SEQ ID No.3具有相同或相似的生物学活性的核苷酸序列。
[0006]进一步地，所述多核苷酸序列包括S蛋白或其突变体自身的信号肽，所述自身信号肽核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0007]优选地，所述多核苷酸序列包括S蛋白或其突变体自身的信号肽和在自身信号肽前额外添加的人tPA信号肽。
[0008]其中，所述S蛋白或其突变体自身的信号肽可被其他信号肽替代。
[0009]进一步地，所述的多核苷酸序列编码的SARS
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CoV
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2变异株S蛋白是将编码SARS
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CoV
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2的S蛋白氨基酸中的第986位K替换为P，将987位V替换为P；所述编码SARS
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CoV
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2的S蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
[0010]在一个优选实施方案中，所述的多核苷酸序列编码的SARS
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CoV
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2变异株S蛋白还包括对Furin蛋白酶切位点RRAR突变成GSAS。
[0011]进一步地，所述多核苷酸序列选自新冠病毒野生型、Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron毒株中的S蛋白核苷酸序列中的至少一种。
[0012]进一步地，所述多核苷酸序列选自SEQ ID No.3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7、SEQ IDNo.9、SEQ ID No.11、SEQ ID No.13、SEQ ID No.15或SEQ ID No.17中的至少一种。
[0013]进一步地，上述多核苷酸序列编码的SARS
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CoV
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2及变异株S蛋白的氨基酸序列选自SEQ ID No.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10、SEQ ID No.12、SEQ ID No.14、SEQ IDNo.16或SEQ ID No.18中的至少一种。
[0014]优选地，所述氨基酸序列是在Beta变异株的S蛋白突变位点的基础上加上Delta变异株S蛋白RBD的突变位点。
[0015]更优选地，所述多核苷酸序列选自SEQ ID No.9、SEQ ID No.11、SEQ ID No.13、SEQ IDNo.15或SEQ ID No.17中的至少一种。
[0016]更优选地，所述多核苷酸序列编码的SARS
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CoV
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2变异株S蛋白的氨基酸序列选自SEQ ID No.10、SEQ ID No.12、SEQ ID No.14、SEQ ID No.16或SEQ ID No.18中的至少一种。
[0017]本专利技术还提供能够表达上述多核苷酸的复制缺陷型重组腺病毒载体。
[0018]优选地，所述人复制缺陷型重组腺病毒载体选自人5型、35型、26型或/和黑猩猩AdC68型、AdC7型的复制缺陷型腺病毒，但不限于以上类型的腺病毒病毒载体。更优选地，选自E1、E3联合缺失的人5型复制缺陷型腺病毒。
[0019]本专利技术还提供预防和/或治疗SARS
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CoV
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2或其变异株感染的疫苗，其包括能够表达上述多核苷酸的人复制缺陷型重组腺病毒载体。
[0020]所述疫苗还包括药学上可接受的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂。
[0021]进一步地，所述的佐剂为免疫佐剂。
[0022]优选地，所述的免疫佐剂选自如下至少一种：铝盐、钙盐、植物皂苷、植物多糖、单磷酸脂质A、胞壁酰二肽、胞壁酰三肽、角鲨烯水包油乳剂、重组霍乱毒素、GM
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CSF细胞因子、脂质、阳离子脂质体材料、CpG ODN。
[0023]进一步地，所述的铝盐选自氢氧化铝、明矾中至少一种。
[0024]进一步地，所述的钙盐为磷酸三钙。
[0025]进一步地，所述的植物皂苷为QS
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21或ISCOM。
[0026]进一步地，所述的植物多糖为黄芪多糖。
[0027]进一步地，所述的脂质选自如下至少一种：磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、胆固醇、二油酰基磷脂酰乙醇胺。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.编码SARS
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CoV
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2或变异株S蛋白基因的多核苷酸，其特征在于：所述的多核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；或者在SEQ ID No.3核苷酸序列上经取代和/或缺失和/或插入至少一个核苷酸，且与SEQ ID No.3具有相同或相似的生物学活性的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于：所述多核苷酸序列包括S蛋白或其突变体自身的信号肽，所述自身的信号肽核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；优选地，所述多核苷酸序列包括S蛋白或其突变体自身的信号肽和在自身信号肽前额外添加的人tPA信号肽。3.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于：所述的多核苷酸序列编码的SARS
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CoV
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2变异株S蛋白是将编码SARS
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CoV
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2的S蛋白氨基酸中的第986位K替换为P，第987位V替换为P；所述编码SARS
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CoV
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2的S蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；优选地，所述的多核苷酸序列编码的SARS
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CoV
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2变异株S蛋白还包括将Furin蛋白酶切位点RRAR突变成GSAS。4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于：所述多核苷酸序列选自新冠病毒野生型、Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron毒株中的S蛋白核苷酸序列中的至少一种。5.如权利要求4所述的多核苷酸，其特征在于：所述多核苷酸序列选自SEQ ID No.3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7、SEQ ID No.9、SEQ ID No.11、SEQ ID No.13、SEQ ID No.15或SEQ ID No.17中的至少一种；优选地，所述多核苷酸序列选自SEQ ID No.9、SEQ ID No.11、SEQ ID No.13、SEQ ID No.15或SEQ ID No.17中的至少一种。6.如权利要求4所述的多核苷酸，其特征在于：所述的多核苷酸序列编码的SARS
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Cov
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2及变异株S蛋白的氨基酸序列选自SEQ ID No.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10、SEQ ID No.12、SEQ ID No.14、SEQ ID No.16或SEQ ID No.18中的至少一种；优选地，所述的多核苷酸序列编码的SARS
‑
Cov

【专利技术属性】
技术研发人员：魏霞蔚，程平，杨莉，魏于全，
申请(专利权)人：成都威斯克生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：