β冠状病毒温度敏感性株和疫苗制造技术

本发明专利技术提供了一种有效的毒株，作为针对β冠状病毒的疫苗的有效成分。SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】β
冠状病毒温度敏感性株和疫苗


[0001]本专利技术涉及β冠状病毒的温度敏感性株及使用其的疫苗。

技术介绍

[0002]目前，针对SARS
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CoV
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2的疫苗开发在全世界迅速推进。2020年10月目前批准的疫苗仅是由俄罗斯批准的卫星
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V(Sputnik V)(非专利文献1)。现有技术文献非专利文献
[0003]非专利文献1：THE LANCET，VOLUME 396，ISSUE 10255，P887
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897，SEPTEMBER 26，2020

技术实现思路

专利技术所要解决的技术问题
[0004]然而，卫星
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V仍然是实施临床试验的阶段，在安全性、有效性上疑问的声音也在提高。此外，即使假设开始接种疫苗，也依然存在效果小、或发现严重副作用的风险，不清楚是否成为抑制感染症流行的决定性手段。因此，对于针对SARS
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CoV
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2病毒的疫苗，期望进一步的选择项。
[0005]因此，本专利技术的目的至少在于提供一种有效的毒株，作为针对SARS
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CoV
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2病毒的疫苗的有效成分。此外，在如SARS
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CoV
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2病毒那样的β冠状病毒中，有除了SARS
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CoV
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2病毒以外还有可能存在的病毒，因此本专利技术的目的在于提供一种有效的毒株，作为针对一般的β冠状病毒的疫苗的有效成分。用于解决技术问题的手段
[0006]本专利技术人进行了深入研究，结果发现，关于SARS
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CoV
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2病毒的规定的突变株，人的体温(所谓的下呼吸道温度)下的增殖性降低，进一步地，通过对该规定的突变株进行回复突变试验，发现规定的责任突变(日语：責任変異)在一般的β冠状病毒中可引起在人的体温(所谓的下呼吸道温度)下的增殖性降低。本专利技术是基于该见解并进一步重复进行研究从而完成的专利技术。
[0007]在本专利技术中，“温度敏感性”是具有低温(即，人的上呼吸道温度)特异性增殖能力的性质，是通过获得高温(即，人的下气道温度)下的增殖能力受到限制的特性而发挥的性质。应予说明，在本说明书中，“低温驯化”这一用语以获得具有低温(即，人的上呼吸道温度)特异性增殖能力的性质的含义使用，其实际情况是该低温特异性的增殖能力通过获得在高温(即，人的下呼吸道温度)下的增殖能力受到限制的特性而发挥，因此可以说是以“温度敏感性化”的含义使用。另外，将被“温度敏感性化”的毒株称为“温度敏感性株”。因此，在本说明书中，“低温驯化株”和“温度敏感性株”的含义相同。另外，在本专利技术中，“责任突变”是指具有能够成为突变表型(表现生物性状的表型因突变而发生了变化)的原因或具有与突变表型的因果关系的突变，“温度敏感性能的责任突变”是指具有能够成为温度敏感性的
获得的原因或具有与温度敏感性的获得的因果关系的突变。本专利技术提供以下所示的方式的专利技术。
[0008]项1.一种β冠状病毒温度敏感性株，其包含非结构蛋白，所述非结构蛋白具有以下的(b)的突变、(e)和(f)的突变的组合、和/或(h)的突变作为温度敏感性能的责任突变：(b)NSP3中相当于序列号1所示的氨基酸序列的第445位的亮氨酸的氨基酸残基的突变、(e)NSP14中相当于序列号2所示的氨基酸序列的第248位的甘氨酸的氨基酸残基的突变、(f)NSP14中相当于序列号2所示的氨基酸序列的第416位的甘氨酸的氨基酸残基的突变、(h)NSP16中相当于序列号3所示的氨基酸序列的第67位的缬氨酸的氨基酸残基的突变。
[0009]作为上述项1的专利技术的具体例，可举出以下的专利技术。一种β冠状病毒温度敏感性株，其包含由以下的(I)、(II)和(III)中的至少任一种多肽构成的非结构蛋白：(I)以下的(I
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1)～(I
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3)中的至少任一种多肽:(I
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1)由在序列号1所示的氨基酸序列中，具有第445位亮氨酸的突变(b
’
)作为责任突变的氨基酸序列构成的多肽(NSP3)、(I
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2)由在序列号2所示氨基酸序列中，具有第248位甘氨酸的突变(e
’
)和第416位甘氨酸的突变(f
’
)作为责任突变的氨基酸序列构成的多肽(NSP14)、(I
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3)由在序列号3所示氨基酸序列中，具有第67位缬氨酸的突变(h
’
)作为责任突变的氨基酸序列构成的多肽(NSP16)；(II)在上述(I)的多肽的氨基酸序列中，除了上述责任突变所涉及的氨基酸残基以外的1个或多个氨基酸残基被替换、添加、插入或缺失而成，构成获得了温度敏感性能的β冠状病毒的多肽；(III)在上述(I)的多肽的氨基酸序列中的除了上述责任突变所涉及的氨基酸残基以外的氨基酸序列的序列一致性为50％以上，构成获得了温度敏感性的β冠状病毒的多肽。
[0010]项2.根据项1所述的病毒温度敏感性株，其中，所述β冠状病毒为SARS
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CoV
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2病毒。项3.根据项1或2所述的病毒温度敏感性株，其中，人的下呼吸道温度下的增殖能力与包含不具有上述责任突变的非结构蛋白的β冠状病毒的增殖能力相比降低。项4.根据项3所述的病毒温度敏感性株，其中，所述人的下呼吸道温度为36～38℃。项5.根据项1～4中任一项所述的病毒温度敏感性株，其中，上述(b)的突变是替换为苯丙氨酸，上述(e)的突变是替换为缬氨酸，上述(f)的突变是替换为丝氨酸，上述(h)的突变是替换为异亮氨酸。项6.根据项1～5中任一项所述的病毒温度敏感性株，其包含：在所述序列号1所示的氨基酸序列中，具有所述(b)的突变的所述NSP3，在所述序列号2所示的氨基酸序列中，具有所述(e)的突变和所述(f)的突变的所
述NSP14，和/或在所述序列号3所示的氨基酸序列中，具有所述(h)的突变的NSP16。项7.根据项1～6中任一项所述的病毒温度敏感性株，其具有所述(e)的突变和所述(f)的突变。项8.根据项1～6中任一项所述的病毒温度敏感性株，其具有上述(h)的突变。项9.根据项1～6中任一项所述的病毒温度敏感性，其具有所述(b)的突变。项10.一种减毒活疫苗，其包含如项1～9中任一项所述的病毒温度敏感性株。项11.根据项10所述的减毒活疫苗，其为经鼻给药。项12.根据项10所述的减毒活疫苗，其为肌内给药、皮下给药或皮内给药。项13.一种β冠状病毒基因疫苗，其包含编码非结构蛋白的基因，所述非结构蛋白具有以下的(b)的突变、(e)和(f)的突变的组合、和/或(h)的突变作为温度敏感性能的责任突变：(b)NSP3中相当于序列号1所示的氨基酸序列的第445位的亮氨酸的氨基酸残基的突变、(e)NSP14中相当于序列号2所示的氨基酸序列的第248位的甘氨酸的氨基酸残基的突变、(f)NSP14中相当于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种β冠状病毒温度敏感性株，其包含非结构蛋白，所述非结构蛋白具有以下的(b)的突变、(e)和(f)的突变的组合、和/或(h)的突变作为温度敏感性能的责任突变：(b)NSP3中相当于序列号1所示的氨基酸序列的第445位的亮氨酸的氨基酸残基的突变、(e)NSP14中相当于序列号2所示的氨基酸序列的第248位的甘氨酸的氨基酸残基的突变、(f)NSP14中相当于序列号2所示的氨基酸序列的第416位的甘氨酸的氨基酸残基的突变、(h)NSP16中相当于序列号3所示的氨基酸序列的第67位的缬氨酸的氨基酸残基的突变。2.根据权利要求1所述的病毒温度敏感性株，其中，所述β冠状病毒为SARS
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CoV
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2病毒。3.根据权利要求1或2所述的病毒温度敏感性株，其中，在人的下呼吸道温度下的增殖能力与包含不具有所述责任突变的非结构蛋白的β冠状病毒的增殖能力相比降低。4.根据权利要求3所述的病毒温度敏感性株，其中，所述人的下呼吸道温度为36～38℃。5.根据权利要求1～4中任一项所述的病毒温度敏感性株，其中，所述(b)的突变是替换为苯丙氨酸，所述(e)的突变是替换为缬氨酸，所述(f)的突变是替换为丝氨酸，所述(h)的突变是替换为异亮氨酸。6.根据权利要求1～5中任一项所述的病毒温度敏感性株，其中，所述病毒温度敏感性株包含：在所述序列号1所示的氨基酸序列中具有所述(b)的突变的所述NSP3，在所述序列号2所示的氨基酸序列中具有所述(e)的突变和所述(f)的突...

【专利技术属性】
技术研发人员：冈村真弥，柏原秋穗，虾名博贵，
申请(专利权)人：一般财团法人阪大微生物病研究会，
类型：发明
国别省市：