冠状病毒mRNA疫苗及其应用制造技术

本文提供了冠状病毒mRNA疫苗及其应用。本文的核酸分子编码能够引发针对冠状病毒的强效中和抗体反应的高免疫原性抗原，用于表达冠状病毒刺突(S)蛋白的关键中和结构域，当单独或组合用作免疫原性组合物或疫苗时，能有效诱导保护性免疫。导保护性免疫。

【技术实现步骤摘要】
NO:10所示的氨基酸序列。在一些具体实施方式中，所述三聚化结构域由具有SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列编码。
[0011]在一些实施方式中，所述RBD和所述三聚化结构域可以直接连接。
[0012]在一些实施方式中，所述RBD和所述三聚化结构域可以经由可切割或不可切割的连接子连接。在一些实施方式中，所述连接子可以为(G
n
S)
m
，其中n和m各自独立地选自1至5的整数。在一些实施方式中，所述连接子可以包括4～15个氨基酸。在一些具体实施方式中，所述连接子具有SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。在一些具体实施方式中，所述连接子由具有SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列编码。
[0013]在一些实施方式中，所述ORF还可以编码信号肽。在一些实施方式中，所述信号肽可以与所述RBD连接。在一些实施方式中，所述信号肽相对于SARS
‑
CoV
‑
2可以是异源的。在具体实施方式中，所述信号肽具有有SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。在一些具体实施方式中，所述信号肽由具有SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列编码。
[0014]在一些实施方式中，所述RBD可以具有与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述RBD可以具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
[0015]在一些实施方式中，所述RBD可以具有与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述RBD可以具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
[0016]在一些实施方式中，所述RBD可以包括与SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列具有至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方式中，所述RBD可以包括SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。
[0017]在一些实施方式中，所述RBD可以包括与SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列具有至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方式中，所述RBD可以包括SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。
[0018]在一些实施方式中，所述核酸分子的开放阅读框(ORF)可以包括与SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列具有至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方式中，所述核酸分子的开放阅读框可以包括SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。
[0019]在一些实施方式中，所述核酸分子的开放阅读框(ORF)可以包括与SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列具有至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方式中，所述核酸分子的开放阅读框可以包括SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列。
[0020]在一些实施方式中，所述核酸分子可以包括与SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列具有至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方式中，所述核酸分子可以包括SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列。
[0021]在一些实施方式中，所述核酸分子可以包括与SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列具有至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方式中，所述核酸分子可以包括SEQ ID NO:9所示
的核苷酸序列。
[0022]在一些实施方式中，所述核酸分子可以为信使核糖核酸(mRNA)分子。
[0023]在一些实施方式中，所述核酸分子还可以包括5
’
非翻译区(5
’
UTR)。在一些实施方式中，所述5
’
非翻译区可以具有SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列。
[0024]在一些实施方式中，所述核酸分子还可以包括3
’
非翻译区(3
’
UTR)。在一些实施方式中，所述3
’
非翻译区可以具有SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列。
[0025]在一些实施方式中，所述mRNA分子还可以包括5
’
帽，任选地选自例3
’‑
O
‑
Me
‑
m7G(5
’
)ppp(5
’
)G；G(5
’
)ppp(5
’
)A；G(5
′
)ppp(5
’
)G；m7G(5
’
)ppp(5
’
)A；m7G(5
’
)ppp(5
’
)G。
[0026]在一些实施方式中，所述mRNA分子还可以包括多聚A尾。在一些实施方式中，所述多聚A尾任选地具有约100个核苷酸。
[0027]在一些实施方式中，所述mRNA分子可以包含化学修饰，任选地包括1
‑
甲基假尿苷。
[0028]在本文中，通过上述位点的氨基酸突变成天冬酰胺，表达的RBD能够在翻译后修饰的过程中被糖基化(N
‑
糖基化)。这些糖基化修饰能够遮盖易突变表位，使得更多保守位点得以暴露从而产生更为广谱的抗体。
[0029]本文的另一方面提供了一种组合物，其包括：本文提供的核酸分子；和，脂质纳米颗粒(LNP)。
[0030]在一些实施方式中，所述核酸分子在所述脂质纳米颗粒中。
[0031]在一些实施方式中，所述脂质纳米颗粒可以包括可电离脂质。在一些实施方式中，所述可电离脂质可以包括具有以下结构的化合物：
[0032][0033]在具体的实施方式中，所述可电离的阳离子脂质可以是式V所示的化合物。
[0034]在一些实施方式中，所述脂质纳米颗粒还可以包括中性脂质。在一些实施方式中，所述中性脂质可以选自1，2
‑
二硬脂酰基
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱(DSPC)、1，2
‑
二油酰基
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸乙醇胺(DOPE)、1，2
‑
二亚油酰基
‑
sn...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸分子，所述核酸分子包括编码冠状病毒的受体结合结构域(RBD)的开放阅读框(ORF)，其中所述受体结合结构域至少包括对应于SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第457、478、484和493位中的一个或多个位点的氨基酸突变成天冬酰胺(N)。2.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述受体结合结构域进一步包括对应于SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第417和/或452位的氨基酸突变成天冬酰胺(N)，和/或所述受体结合结构域进一步包括对应于SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第459、480、486和495位中的一个或多个位点的氨基酸突变成苏氨酸(T)，和/或所述受体结合结构域进一步包括对应于SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的第419和/或454位的氨基酸突变成苏氨酸(T)。3.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述ORF还编码与所述RBD连接的三聚化结构域和/或信号肽；优选地，所述RBD和所述三聚化结构域直接或通过连接子连接；优选地，所述信号肽与所述RBD连接。4.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述RBD具有与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；和/或所述RBD具有与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；和/或所述RBD具有与SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列具有至少75％同一性的核苷酸序列；和/或所述RBD具有与SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列具有至少75％同一性的核苷酸序列。5.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述ORF包括与SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列具有至少75％同一性的核苷酸序列；和/或所述ORF包括与SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列具有至少75％同一性的核苷酸序列。6.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子为信使核糖核酸(mRNA)分子；优选地，所述核酸分子还包括5
’
...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨明辉，黄渊余，沈晨光，叶国国，李春辉，石慧萍，田雨欣，赵梦圆，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：