结合IL-31的抗体可变结构域制造技术

本发明专利技术涉及一种特异性结合IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合IL
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31的抗体可变结构域


[0001]本专利技术涉及一种特异性结合IL
‑
31的抗体可变结构域，涉及包含一个或两个所述抗体可变结构域和至少一个特异性结合不同于IL
‑
31的靶标的其它结合结构域的多特异性抗体。本专利技术进一步涉及编码所述抗体可变结构域或所述多特异性抗体的一种核酸或两种核酸、包含所述核酸或所述两种核酸的载体、包含所述一种核酸或所述两种核酸或所述载体的宿主细胞，以及产生所述抗体可变结构域或所述多特异性抗体的方法。此外，本专利技术涉及包含所述抗体可变结构域或所述多特异性抗体的药物组合物及其使用方法。

技术介绍

[0002]白细胞介素31(IL
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31)是一种炎症细胞因子，有助于触发针对病原体的细胞介导免疫。IL
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31优先由Th2细胞产生。IL
‑
31通过异二聚体受体复合物(IL
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31R或IL31R)发送信号，该复合物包含在免疫和上皮细胞中表达的白细胞介素31受体α(IL
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31RA或IL31RA)和制瘤素M受体β(OSMRβ)。IL
‑
31与这种受体复合物的结合导致JAK/STAT和PI3K/AKT信号转导通路的激活，并激活不同的MAPK通路(ERK、p38和JNK)。
[0003]IL
‑
31与各种慢性炎症疾病有关。例如，已经发现小鼠中的IL
‑
31过表达导致皮炎样症状，参见Dillon,et al,Nature Immunol.5(2004):752
‑
760。此外，在许多慢性炎性疾病中，例如在特应性皮炎(AD)中，IL
‑
31介导患者皮肤内神经纤维的激活，导致侵袭性瘙痒表型，其在患者搔抓时加剧这些疾病的症状，参见例如Oetjen et al.,Cell 171(2017)217
–
228。抓挠会导致皮肤屏障破坏，微生物病原体进入皮肤，并进一步促进该部位的炎症。
[0004]特应性皮炎(AD)是一种慢性炎症性皮肤病，其特点是强烈的瘙痒(即严重的瘙痒)和鳞屑性和干燥的湿疹性皮损。严重的疾病可因重大的心理问题、严重的睡眠损失和生活质量的损害而造成极大的残疾，导致高社会经济成本。AD常在5岁前的儿童期开始，可能持续到成年。
[0005]AD的病理生理学受免疫球蛋白E(IgE)介导的致敏、免疫系统和环境因素之间复杂的相互作用影响。原发性皮肤缺损可能是一种免疫紊乱，导致IgE介导的过敏反应，并伴有上皮屏障功能障碍，这是基因突变和局部炎症的结果。
[0006]此外，已发现IL
‑
31与过敏性哮喘、过敏性鼻炎、炎性肠病、恶性肿瘤和骨质疏松症有关，参见Bagci et al.,J Allergy Clin Immunol.141(2018):858
‑
866。
[0007]通过抗IL31RA抗体，例如通过抗IL
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31RA抗体nemolizumab，阻断IL
‑
31/IL
‑
31RA信号传导，在临床上被证明可有效减轻AD患者的瘙痒，参见Ruzicka et al.,N Engl J Med.376(2017):2092
‑
2093。
[0008]此外，开发了IL
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31中和抗体BMS
‑
981164以提供用于治疗慢性瘙痒性皮肤病的有效靶向疗法，参见Lewis et al,J Eur Acad of Dermatol Venereol.31(2017)142
‑
150。
[0009]虽然这些抗IL
‑
31疗法似乎对治疗瘙痒性疾病(例如AD)中出现的瘙痒症状有效，但它们通常不能解决这些疾病的根本原因。即使对于与IL
‑
31信号传导不平衡相关的过敏性、炎性和自身免疫性疾病，这些抗IL
‑
31疗法的功效也通常有限和/或应答率低至中等，表
明IL
‑
31信号传导不平衡通常不是这些疾病的唯一原因。因此，为了提高这些疗法的应答率和/或疗效，还必须解决其他信号通路。因此，对于患有此类过敏性、炎性和自身免疫性疾病的患者，迫切需要额外的基于IL
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31的治疗选择。
[0010]更具体而言，希望手头有一种稳定且有效的抗IL
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31抗体构件，可以很容易地并入多特异性抗体形式中，另外还能干扰其他信号通路。所述抗IL
‑
31构件应该具有抑制IL
‑
31介导的信号传导的高效力。此外，所述构件应该具有优异的生物物理性质，例如特别是高稳定性，以便于它们有效地并入到适于药物开发的多特异性抗体中。
[0011]具体而言，所述抗IL
‑
31构件，即抗体结合结构域，应表现出以下最低特征：
[0012]‑
它应该以5nM或更小的单价解离常数(K
D
)与人IL
‑
31结合，如通过表面等离子体共振(SPR)测量的；
[0013]‑
它应该以30ng/ml或更低的IC
50
抑制人IL
‑
31诱导的信号传导，如在Path Hunter IL
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31RA/OSMRb二聚化分析中测定；
[0014]‑
当起始浓度为10mg/ml时，并且当在含有150mM NaCl、pH 6.4的50mM磷酸盐柠檬酸盐缓冲液中配制时，在4℃或40℃储存至少四周后，其单体含量的损失应该为5％或更少。
[0015]此外，当在含有150mM NaCl、pH 6.4的50mM磷酸柠檬酸盐缓冲液中配制时，通过差示扫描荧光测定法测定，期望所述抗IL
‑
31构件具有65℃或更高的解链温度(T
m
)。
[0016]尽管在现有技术中已知如何鉴定满足一个或两个上述标准的抗IL
‑
31抗体可变结构域的策略，但鉴定满足所有这些标准(更不用说下文项目7中提及的大多数或所有标准)的此类抗体可变结构域具有挑战性，且结果不可预测。

技术实现思路

[0017]本专利技术的一个目的是提供新的抗体可变结构域，其特异性结合IL
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31，能够有效降低或消除IL
‑
31介导的活性，同时高度稳定，从而可以容易地掺入到多特异性抗体形式中。
[0018]本专利技术人现已惊奇地发现，基于单克隆兔抗体克隆50
‑
09
‑
D07的scFv能够有效地阻断信号传导，同时表现出优异的稳定性。该抗体克隆是来自广泛免疫活动的已被鉴定为以高亲和力结合IL
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31的有限数量的单克隆兔抗体克隆之一。具体而言，衍生自克隆50
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗体可变结构域，其特异性结合IL
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31，所述抗体可变结构域包含:a)VH链，其具有选自SEQ ID NO:5、6和7的序列，和b)VL链，其具有选自SEQ ID NO:12和37的序列。2.权利要求1所述的抗体可变结构域，其中所述抗体可变结构域包含：a)VH链，其具有SEQ ID NO:5的序列；和VL链，其具有SEQ ID NO:12的序列；或者b)VH链，其具有SEQ ID NO:6的序列；和VL链，其具有SEQ ID NO:12的序列；或者c)VH链，其具有SEQ ID NO:7的序列；和VL链，其具有SEQ ID NO:12的序列；或者d)VH链，其具有SEQ ID NO:5的序列；和VL链，其具有SEQ ID NO:37的序列。3.权利要求1或2所述的抗体可变结构域，其中所述抗体可变结构域选自FAB、Fv、scFv和dsFv。4.权利要求3所述的抗体可变结构域，其选自SEQ ID NO:27至29和31的scFv抗体。5.一种多特异性抗体，其包含：a)权利要求1至4中任一项所定义的一个或两个抗体可变结构域；b)至少一个结合结构域，其特异性结合不同于IL
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31的靶标。6.权利要求5所述的多特异性抗体，其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区。7.权利要求6所述的多特异性抗体，其中多特异性抗体的形式选自由以下组成的组：串联scDb(Tandab)、线性二聚体scDb(LD
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scDb)、圆形二聚体scDb(CD
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scDb)、串联三
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scFv、三体(Fab
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(scFv)2)、Fab
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Fv2、三体、scDb
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scFv、四体、二
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【专利技术属性】
技术研发人员：朱莉娅，
申请(专利权)人：努玛治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：