多特异性抗体制造技术

本发明专利技术涉及一种多特异性抗体，其包含两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多特异性抗体


[0001]本专利技术涉及一种多特异性抗体，其包含两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN
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BD)；和至少一个特异性结合CD3的基于抗体的结合结构域(CD3
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BD)；其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽，并且其中当通过SPR测量时，每个所述MSLN
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BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(K
D
)的范围为0.5至20nM。本专利技术还涉及编码所述多特异性抗体的核酸序列、包含所述核酸序列的载体、包含所述核酸序列或所述载体的宿主细胞，以及生产所述多特异性抗体的方法。此外，本专利技术涉及包含所述多特异性抗体的药物组合物及其使用方法。

技术介绍

[0002]尽管癌症的治疗取得了相当大的进展，但癌症仍然是一个尚未得到满足的主要医疗需求。近年来，随着各种分子类型的免疫疗法的出现，在癌症治疗中取得了一些最实质性的进展，包括但不限于：单克隆抗体(mAb)、双特异性抗体(bsAb)、重组蛋白、和嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T细胞)疗法。这些疗法通过以下方式诱导抗肿瘤免疫：a)主动将免疫效应细胞导向肿瘤驻留细胞，和/或b)刺激免疫效应细胞，和/或c)解除肿瘤介导的免疫抑制。这些免疫疗法通常利用肿瘤驻留细胞(例如，恶性细胞、肿瘤脉管系统细胞、基质细胞、免疫细胞等)的特异性抗原的过表达(与肿瘤外位点相比)，将它们的药理活性靶向肿瘤。在这些抗原中，肿瘤相关抗原(TAA)包含恶性细胞选择性过表达的细胞表面蛋白。通过以高亲和力(affinity)结合TAA，免疫疗法可以在一定程度上将其免疫调节活性限制在肿瘤细胞和免疫效应细胞之间的免疫突触。
[0003]一类常见的TAA结合免疫治疗剂是mAb，其通过调理肿瘤细胞并通过表达Fcγ受体(FcγR)的细胞(主要是自然杀伤(NK)细胞)触发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)来引发抗肿瘤免疫。其他TAA结合免疫治疗剂利用细胞毒性T淋巴细胞(CTL)来诱导恶性细胞的靶向清除，例如CAR
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T细胞以及同时与T细胞抗原CD3结合的bsAb(TAA/CD3 bsAb)。
[0004]虽然TAA
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(再)靶向CTL和常规TAA/CD3 bsAb的治疗效用已经过临床验证，但剂量限制性毒性(DLT)通常会阻止以最大有效剂量(MED)给药或导致治疗中断，从而导致疗效有限。
[0005]DLT的一个原因是，常规TAA/CD3 bsAb也通常与细胞因子释放综合征(CRS)相关，推测是由于抗CD3结构域的过度活性。免疫疗法的肿瘤外活性导致健康组织中促炎细胞因子的分泌，这可导致不良的安全性。此外，尽管TAA/CD3bsAb能有效地耗尽TAA过表达细胞，但它们是通过募集和刺激CTL来做到这一点的，无论这些细胞是否表达识别肿瘤抗原的T细胞受体(TCR)(即肿瘤反应性T细胞)。因此，TAA/CD3 bsAb不是刺激或重新激活宿主的天然抗肿瘤免疫，而是不加选择地刺激CTL，潜在地造成安全风险。
[0006]虽然此类DLT产生的确切途径可有所不同，但通常可通过增强药理学活性的肿瘤定位来最小化或消除免疫疗法相关毒性的风险。
[0007]几乎只在癌细胞上表达的TAA，如癌胚瘤抗原，被称为纯净TAA(clean TAA)。也在
正常的非癌细胞上表达——通常与癌细胞相比水平较低——的TAA被认为是非纯净TAA。由于TAA/CD3 bsAb方法的高效性，非纯净TAA是一个挑战，因为它们会损伤同样表达TAA的非肿瘤细胞。间皮素(MSLN)是非纯净TAA的一个实例；它不仅在肿瘤细胞上表达，也在各种其他组织中表达，尽管水平较低。因此，当靶向非纯净TAA时，需要新的疗法来提高TAA/CD3 bsAb方法对肿瘤组织的选择性，并最小化脱肿瘤/靶向效应(off tumor/on target effect)。这尤其适用于MSLN/CD3 bsAb方法。
[0008]间皮素(MSLN)已被提议作为可靶向治疗MSLN
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实体癌，例如间皮瘤的肿瘤相关抗原(TAA)。许多其他类型的癌症也是MSLN
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，包括某些形式的卵巢癌和胰腺癌，以及三阴性乳腺癌。目前间皮瘤的治疗标准包括肿瘤切除、化疗和放疗，以及减少体液和疼痛管理等缓解措施。针对持续生长的肿瘤的免疫疗法包括使用PD
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1/PD
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L1阻断剂，如pembrolizumab和nivolumab，或抗CTLA4抗体，如ipilimumab，用于刺激免疫系统，以及VEGF抑制剂，如贝伐单抗(bevacizumab)，用于阻断血管新生。虽然这些疗法已经取得了临床成功，但它们具有更高的全身副作用风险。因此，需要一种靶向MSLN的特异性方法。
[0009]已经进行了或正在进行大量临床前和早期临床研究，以评估通过几种不同方法靶向MSLN的可行性，包括基于抗体的药物和CAR
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T细胞。基于抗体的药物包括用以下药剂靶向MSLN表达细胞：抗MSLN片段SS1P免疫毒素与化疗药物如培美曲塞(pemetrexed)和顺铂(cisplatin)一起或与PE38偶联；阿麦妥单抗(Amatuximab)，一种诱导ADCC的嵌合单克隆抗体；抗体药物缀合物，例如anetumab ravtansine(BAY 94
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9343:抗MSLN+微管蛋白抑制剂DM4)或DMOT4039A(抗MSLN+抗有丝分裂单甲基auristatin E)以抑制肿瘤生长。HPN536是一种多特异性结合物(抗MSLN+抗CD3+抗白蛋白)，具有更长的半衰期，它似乎可以在体内和体外重新引导T细胞杀伤表达MSLN的靶细胞，并且食蟹猴似乎对其耐受性良好。几种抗MSLN嵌合抗原受体(CAR)
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T疗法也被很好地耐受，包括瞬时mRNA转染的CAR
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T(RNA CARTmeso)和用自杀基因(iCasp9m28z)工程化的CAR
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T。到目前为止，对大多数抗MSLN疗法的反应是不太大的，这表明治疗实体肿瘤存在挑战。
[0010]对于抗MSLN疗法，该问题因MSLN脱落到癌症患者的血清中而进一步复杂化，在血清中它被称为可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)。对MSLN具有高亲和力的抗体也强烈结合SMRP，这显著抵消了它们的活性，降低了对癌细胞的有效剂量。
[0011]因此，需要能够在SMRP的存在下有效定位于肿瘤并促进T细胞反应的新分子。
[0012]具有至少三个结合结构域的多特异性抗体(其中两个结构域特异性结合间皮素(MSLN
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BD)，一个结构域特异性结合CD3(CD3
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BD)，其中两个MSLN
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BD的结合亲和力在良好平衡的范围内)理论上可以解决许多前述的安全性和有效性方面的限制。这种多特异性抗体理论上能够引起高肿瘤定位和选择性提高，这可以为多种癌症提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多特异性抗体，其包含：a)两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN
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BD)；和b)至少一个特异性结合CD3的基于抗体的结合结构域(CD3
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BD)；其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽，并且其中当通过SPR测量时，每个所述MSLN
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BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(K
D
)的范围为0.5至20nM，特别地范围为0.6至10nM。2.根据权利要求1所述的多特异性抗体，其中所述MSLN
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BD包括(i)分别为SEQ ID NO:1、2(或10)和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，和分别为SEQ ID NO:4、5和6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；或者分别为SEQ ID NO:11、12和13的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，和分别为SEQ ID NO:14、15和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；和(ii)VH3或VH4结构域框架序列FR1至FR4；特别是VH3结构域框架序列FR1至FR4；和(iii)VL结构域，其包含VL框架，所述VL框架包含Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1或Vκ3FR1至FR3，特别是Vκ1FR1至FR3，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，和VλFR4，特别地，VλFR4包含与SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:139中的任意一个具有至少70％、80％或90％同一性的氨基酸序列，更特别地，VλFR4选自SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:139中的任意一个，特别是根据SEQ ID NO:132或139的VλFR4。3.根据权利要求1或2所述的多特异性抗体，其中所述MSLN
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BD包括a.1)分别为SEQ ID NO:1、2(或10)和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，b.1)分别为SEQ ID NO:4、5、和6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，c.1)与氨基酸序列SEQ ID NO:7至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和d.1)与氨基酸序列SEQ ID NO:9至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；或a.2)分别为SEQ ID NO:1、2(或10)和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，b.2)分别为SEQ ID NO:4、5、和6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，c.2)与氨基酸序列SEQ ID NO:8至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和d.2)与氨基酸序列SEQ ID NO:9至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；或a.3)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，b.3)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，c.3)与氨基酸序列SEQ ID NO:17至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和d.3)与氨基酸序列SEQ ID NO:18至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；或a.4)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.4)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，c.4)与氨基酸序列SEQ ID NO:19至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和d.4)与氨基酸序列SEQ ID NO:21至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；或a.5)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，b.5)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，c.5)与氨基酸序列SEQ ID NO:20至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和d.5)与氨基酸序列SEQ ID NO:21至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；或a.6)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、...

【专利技术属性】
技术研发人员：彼得，
申请(专利权)人：努玛治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：