Galectin8与LILRB4结合的调节剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物制药技术领域，尤其是涉及Galectin8与LILRB4结合的调节剂及其应用。本发明专利技术旨在提出Galectin 8作为LILRB4的新配体发挥促进免疫抑制功能的作用，并提供具有阻断两者结合作用的包含一种抗体或抗原结合片段的调节剂，以及抗体互补决定区的核酸及氨基酸序列，抗体可变区核酸及氨基酸序列，抗体全分子氨基酸序列，制备鼠源抗LILRB4抗体的方法，及其对抑制LILRB4与Galectin 8蛋白的结合反应及调节MDSC免疫抑制功能中的用途，显示了抗LILRB4抗体在治疗肿瘤、自身免疫疾病、移植排斥反应、过敏反应、感染等疾病中的靶点价值。感染等疾病中的靶点价值。感染等疾病中的靶点价值。

【技术实现步骤摘要】
Galectin8与LILRB4结合的调节剂及其应用


[0001]本专利技术涉及生物制药
，尤其是涉及Galectin8与LILRB4结合的调节剂及其应用。

技术介绍

[0002]白细胞免疫球蛋白样受体4(Leukocyte immunoglobulin(Ig)
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like receptor B4,LILRB4)是免疫球蛋白样受体家族(leukocyte Ig
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like receptors,LILRs)的一员，这是一类跨膜蛋白，其胞内含有免疫受体基于酪氨酸的抑制性基序(immunoreceptor tyrosine
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based inhibitory motifs,ITIMs)，由此向胞内传递免疫抑制信号。LILRBs在多种免疫细胞的免疫激活和免疫耐受功能调控中具有重要作用，其中LILRB4被发现主要表达于单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞以及B细胞表面。LILRB4过去被认为主要与抗感染免疫有密切的关系，也参与DC细胞等细胞的分化成熟；近年来，越来越多的研究发现了LILRB4在多种疾病免疫调控中的重要性(Liu,Wu等.2020)。多项研究显示LILRB4抑制Fc受体的下游信号，调节细胞的吞噬功能和细胞因子分泌(Lu,Rentero等.2009,Park,Raftery等.2016)；还有研究者发现LILRB4与非酒精性肝硬化有关(Lu,Jiang等.2018)；也有研究表明LILRB4在急性髓系白血病细胞高表达，通过与其配体之一载脂蛋白E(Apolipoprotein E,APOE)作用来抑制T细胞的功能(Gui,Deng等.2019)；当LILRB4与其表达于肿瘤细胞的反受体CD166作用时，被发现能够抑制肿瘤生长(Xu,Chang等.2018)。更进一步的探索揭示LILRB4胞内区ITIM基序不同位点的酪氨酸磷酸化会带来不同的下游信号(Park,Liu等.2017)，目前人们认为LILRB4的功能主要由其配体不同而决定。
[0003]近年来随着肿瘤免疫学领域的发展，一群具有免疫抑制功能的髓系来源细胞引起越来越多的关注，这群细胞被成为髓系来源的抑制性细胞(Myeloid
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Derived Suppressor Cells,MDSCs)。MDSC在肿瘤微环境中参与诱导和维持免疫抑制状态、抑制效应T细胞功能和活性，促进肿瘤发展，已经成为肿瘤微环境和肿瘤靶向治疗的研究热点。已有报道发现LILR家族蛋白与MDSC的诱导有关(Chen,van der Touw等.2018)，其中单核系细胞表达的LILRB4也被发现与MDSC的诱导有关(de Goeje,Bezemer等.2015,Tomic,Joksimovic等.2019,Singh,Muise等.2020)。但目前，这种诱导功能是通过何种配体来实现，仍然未知。
[0004]半乳糖凝集素(Galectins)是一类与特定聚糖或糖基化分子结合的蛋白，过往研究揭示了他们在抗感染免疫及介导细胞在内膜损伤时引发自噬中具有重要作用(Jia,Abudu等.2018,Weng,Chen等.2018)。他们中的有些成员已经被发现与肿瘤生长和肿瘤微环境调节有关(Limagne,Richard等.2019,Yang,Sun等.2021)。例如Galectin 9已被报道能够促进移植反应中MDSC比例增加从而抑制免疫(Yin,Li等.2020)。Galectin 8在调节免疫功能，包括炎症反应中的作用存在争议(Tribulatti,Carabelli等.2020)，目前研究显示Galectin 8在弓形虫感染中具有抗炎作用(Bertelli,Sanmarco等.2020)，在肿瘤中通过促进CD166内吞来降低细胞粘性，促进肿瘤转移(Renard,Tyckaert等.2020)。
[0005]LILRB4是肿瘤免疫研究领域的一个热门靶点，但以前对其的关注主要聚焦于在急
性髓系白血病细胞上高表达LILRB4，通过靶向该靶点来解除其对T细胞通过Arg，NO等途径造成的抑制，过去关于LILRB4的抗体专利也基于此(Anami,Deng等.2020)。通过靶向LILRB4来调控MDSC进行肿瘤治疗的抗体是很有潜力的治疗方法，目前暂未有研究者报道。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供Galectin8与LILRB4结合的调节剂及其应用。本专利技术创新性地发现了LILRB4的新配体Galectin 8，且该配体与LILRB4的作用与LILRB4诱导MDSC有关，把LILRB4作为一个免疫细胞上表达的靶点，并筛选能够阻断LILRB4与Galectin 8结合的抗体，从而阻断MDSC的诱导和抑制性表型的展现，从而调节免疫抑制功能，以实现激活抗肿瘤免疫的目的。
[0007]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0008]本专利技术的第一个目的是提供一种阻断Galectin 8与LILRB4结合的调节剂，所述调节剂包括一种抗体或抗原结合片段；所述调节剂结合LILRB4的特征性抗原表位符合以下氨基酸序列：FPMSPVTSVHGGTYRCFxxxxFxHxLL；其中，x表示任意氨基酸；
[0009]所述调节剂结合上述特征性抗原表位中的一个或多个氨基酸残基。
[0010]在本专利技术的一个实施方式中，优选的，所述调节剂结合LILRB4的特征性抗原表位为LILRB4胞外段连续截短重叠多肽LILRB4
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P10，所述LILRB4
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P10氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示。
[0011]本专利技术的第二个目的是提供一种阻断Galectin 8与LILRB4结合的化合物拮抗剂，化合物拮抗剂包括一种抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段的CDR包含三个轻链CDR和/或三个重链CDR，
[0012]所述轻链CDR选自氨基酸序列为如下所示的多肽：SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.49或SEQ ID NO.50，
[0013]所述重链CDR选自氨基酸序列为如下所示的多肽：SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52或SEQ ID NO.53，
[0014]所述抗原或抗体结合片段结合LILRB4。
[0015]本专利技术的第三个目的是提供一种阻断Galectin 8与LILRB4结合的化合物拮抗剂，化合物拮抗剂包括一种抗体或抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种阻断Galectin 8与LILRB4结合的调节剂，其特征在于，所述调节剂包括一种抗体或抗原结合片段；所述调节剂结合LILRB4的特征性抗原表位符合以下氨基酸序列：FPMSPVTSVHGGTYRCFxxxxFxHxLL；其中，x表示任意氨基酸；所述调节剂结合上述特征性抗原表位中的一个或多个氨基酸残基。2.根据权利要求1所述的一种阻断Galectin 8与LILRB4结合的调节剂，其特征在于，优选的，所述调节剂结合LILRB4的特征性抗原表位为LILRB4胞外段连续截短重叠多肽LILRB4
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P10，所述LILRB4
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P10氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示。3.一种阻断Galectin 8与LILRB4结合的化合物拮抗剂，其特征在于，化合物拮抗剂包括一种抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段的CDR包含三个轻链CDR和/或三个重链CDR，所述轻链CDR选自氨基酸序列为如下所示的多肽：SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.49或SEQ ID NO.50，所述重链CDR选自氨基酸序列为如下所示的多肽：SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52或SEQ ID NO.53，所述抗原或抗体结合片段结合LILRB4。4.一种阻断Galectin 8与LILRB4结合的化合物拮抗剂，其特征在于，化合物拮抗剂包括一种抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段的CDR包含三个轻链CDR和/或三个重链CDR，所述轻链CDR选自如下氨基酸序列经过替换、缺失或插入后衍生的序列对应的多肽：SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.49或SEQ ID NO.50，所述重链CDR选自如下氨基酸序列经过替换、缺失或插入后衍生的序列对应的多肽：SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47、SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：许杰，王一婷，孙玉凡，邓守言，韩雪，王运刚，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：